新疆北疆地區(qū)犢牛球蟲感染調(diào)查及蟲種鑒定

馬 玉，喬 軍＊，孟慶玲，劉田莉，李清平，張金生，陳創(chuàng)夫

（1.石河子大學動物科技學院，新疆石河子832003；2.昌吉市動物疾病預(yù)防控制中心，新疆昌吉831100；3.新疆沙灣縣烏蘭烏蘇鎮(zhèn)獸醫(yī)站，新疆沙灣832100）

牛球蟲?。–attle Coccidiosis）是由艾美耳屬（Eimeria）的多種球蟲引起的以出血性腸炎為特征的常見寄生蟲病，主要發(fā)生于犢牛［1］。該病臨床表現(xiàn)為腹瀉、消瘦、貧血、生長發(fā)育緩慢、生產(chǎn)性能下降、免疫力下降等［2］。隨著我國奶牛業(yè)的快速發(fā)展，奶牛感染球蟲十分普遍，球蟲病病例也屢見報道［3－4］，而集約化養(yǎng)殖為奶牛球蟲的大量聚集、傳播提供了更多機會，使球蟲更容易在不同個體間進行傳播，缺乏有效控制可能會導致牛球蟲病的暴發(fā)，將會給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。

目前，已全世界報道的牛球蟲有19 種，但公認的有15蟲種［5］，我國報道的牛球蟲確定種有13 蟲種，都是艾美耳屬球蟲，另外有兩個等孢屬的未定種［6］。其中致病力最強的艾美爾屬球蟲為邱氏艾美耳球蟲、牛艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲，在這幾種球蟲的感染過程中，可寄生于牛的整個大腸和小腸，嚴重破壞腸黏膜的完整性，引起奶牛的血痢和消瘦，最終導致死亡［7－8］。近年來，隨著新疆奶牛養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，犢牛腹瀉的病例也不斷增加。經(jīng)初步調(diào)查，發(fā)現(xiàn)對球蟲引起的奶牛腹瀉重視度不高，常常會將球蟲引起的腹瀉診斷為細菌性疾病或其他疾病；并且在球蟲病的感染中，不同年齡階段犢牛所感染的球蟲種類及感染程度也不同，為此本文對新疆北疆昌吉、石河子、奎屯地區(qū)6個大型奶牛場犢牛進行了牛球蟲病的調(diào)查，旨在掌握新疆北疆地區(qū)一歲以內(nèi)奶牛的球蟲感染率及感染種類，為該病的防控措施的制定提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

顯微鏡、離心機、載玻片、蓋玻片、試管、離心管。飽和鹽水（400g食鹽加入1 000mL沸水中溶解，冷卻后備用）、飽和蔗糖溶液（稱500g蔗糖和6.5g石碳酸溶于320mL蒸餾水中即可）、蒸餾水、2.5%重鉻酸鉀、甘油。

1.2 糞樣采集

隨機采取新疆昌吉阿什里（Ⅰ）、二六工（Ⅱ）、石河子（Ⅲ）、奎屯130團（Ⅳ）、131團（Ⅴ）、129團（Ⅵ）6個牛場0～6月齡和7～12月齡犢牛的糞便，糞便采集采用直腸取糞法或者直接采集剛排出的新鮮糞便，每頭牛采取新鮮糞便50～100g裝入干凈的一次性聚乙烯手套中，并標記好犢牛編號、月齡與采集日期，置4 ℃冰箱待檢。

1.3 檢測方法

1.3.1 飽和蔗糖溶液漂浮法 取被檢糞便3～5g放入50mL燒杯中，加20mL蒸餾水，用玻璃棒攪拌均勻后經(jīng)80 目糞篩過濾至50 mL 離心管中，3 000r／min離心10min后棄去上清液，加入30 mL飽和蔗糖溶液，用玻璃棒把糞便沉淀物攪勻后3 000r／min 離心5min，用吸管吸取少量表面液膜于潔凈載玻片上，加蓋玻片進行鏡檢。

1.3.2 飽和鹽水漂浮法 取被檢糞便3～5g放入50mL燒杯中，加20mL 蒸餾水，用玻璃棒攪拌均勻后經(jīng)80 目濾網(wǎng)過濾至50 mL 離心管中，3 000r／min 離心10min后棄去上清液，加入少量飽和食鹽水，用玻璃棒輕輕攪拌后倒入試管中，繼續(xù)添加飽和鹽水，直至試管口形成凸面，將載玻片蓋在試管口，靜置10min后，取下載玻片，蓋上蓋玻片，用甘油密封后進行鏡檢。

1.4 卵囊收集與培養(yǎng)

吸取1mL陽性球蟲飽和鹽水或飽和蔗糖液表面液膜放入50mL燒杯中，加入蒸餾水10mL均勻攪拌后分裝到1.5mL 離心管中，置于離心機中以3000r／min沉淀10 min，棄去上清液，將沉淀吸入盛有2.5%重鉻酸鉀溶液的培養(yǎng)皿中，室溫26～28℃培養(yǎng)7d，在光學顯微鏡下逐日觀察，直至蟲卵完全孢子化。

1.5 卵囊形態(tài)觀察與蟲種鑒定

取孢子化后的卵囊液置載玻片，蓋上蓋玻片，用甘油密封后置于帶有測微尺的顯微鏡下，在10×40倍下觀察孢子化卵囊的結(jié)構(gòu)，根據(jù)卵囊、孢子囊和子孢子的形態(tài)、顏色等，并測量其大小，計算“形狀指數(shù)（平均長度和平均寬度之比）”。依據(jù)文獻資料進行蟲種鑒定［9－12］。

2 結(jié)果

2.1 6個不同奶牛場犢牛感染球蟲情況

由表1知，在調(diào)查的6個奶牛養(yǎng)殖場中，犢牛球蟲陽性總感染率達到35.55%，其中0～6月齡犢牛感染率達42.25%，7～12月齡犢牛感染率達21.74%。昌吉地區(qū)阿什里牛場和二六工牛場的感染率分別是28.57%和46.42%，石河子地區(qū)牛場的感染率為32.65%，奎屯地區(qū)131團牛場、130團牛場和129團牛場的感染率分別是34.38%、41.38%和34.21%。

表1 新疆北疆地區(qū)6個奶牛養(yǎng)殖場犢牛球蟲感染率Table 1 Infection rates of coccidia among calves of six dairy farms in north Xinjiang%

2.2 不同月齡奶牛球蟲感染率情況

在調(diào)查的3個地區(qū)的211份糞樣中，從1月齡內(nèi)到12月齡的犢牛感染球蟲情況分別是53.85%、45.16%、45.45%、40.91%、39.47%、38.89%、33.33%、25.53%、25.00%、25.00%、23.08%、14.29%、0（表2）；0～6月齡犢牛的感染率遠遠高于7～12月齡犢牛，隨著年齡的增長，球蟲感染率逐漸降低（圖1）。

2.3 球蟲種類及孢子化卵囊形態(tài)結(jié)構(gòu)特征

邱氏艾美耳球蟲（Eimeriazurnii）：卵囊呈亞球形或短橢圓形，大小為13.50～20.00μm×14.50～22.50μm，平均為16.75μm×18.50μm，形狀指數(shù)為0.93。卵囊壁為2 層，平滑，無色，無卵膜孔和內(nèi)、外殘體（圖2A）。孢子囊呈卵圓形或橢圓形，平均大小為7.5μm×10.25μm，子孢子呈細長卵圓狀，完成孢子化發(fā)育的時間一般為2～4d。

牛艾美耳球蟲（Eimeriabovi）：卵囊呈卵圓形，大小為17～23μm×25～32μm，平均為20μm×28.5μm，形狀指數(shù)為0.7。卵囊壁為2層，無殘體和極粒，有卵膜孔（圖2B）。孢子囊呈卵圓形或橢圓形，平均大小為6.5μm×13.5μm，有內(nèi)殘體，子孢子呈魚形，子孢子有折光體，完成孢子化發(fā)育的時間一般為3～6d。

表2 不同月齡奶牛感染球蟲情況Table 2 Infection rates of coccidia in calves of different age

圖1 不同月齡犢牛感染球蟲情況Fig.1 Coccidia infection of calves of different age

橢圓艾美耳球蟲（Eimeriaellipsoidallis）：卵囊呈橢圓形，大小為12～23μm×20～29μm，平均為17.5μm×24.5μm，形狀指數(shù)為0.71，卵囊壁有2層，無色且光滑，無卵膜孔，無極粒和內(nèi)、外殘體。孢子囊呈卵圓形或橢圓形，平均大小為6.75μm×13.5 μm（圖2C）。完成孢子化發(fā)育的時間一般為2～3d。

柱狀艾美耳球蟲（Eimeriacylindrica）：卵囊呈長圓柱形或橢圓狀形，大小為13～17μm×21～23.5 μm，平均為15μm×22.25μm，形狀指數(shù)為0.67。卵囊壁為2層，光滑、均勻、透明，無卵膜孔，無極帽，無極粒和外殘體（圖2D）。孢子囊呈長魚形，平均大小為5.5μm×12.5μm，有內(nèi)殘體，孢子囊鈍端有折光體。完成孢子化發(fā)育的時間一般為3～4d。

圖2 新疆北疆地區(qū)犢牛感染球蟲種類及孢子化卵囊形態(tài)結(jié)構(gòu)特征A.邱氏艾美耳球蟲；B.牛艾美爾球蟲；C.橢圓艾美爾球蟲；D.柱狀艾美爾球蟲；E.亞球形艾美爾球蟲Fig.2 Species infected with coccidia in calves in north Xinjiang and morphological characteristics of sporulated oocystsA.Eimeria zurnii；B.Eimeria bovi；C.Eimeria ellipsoidallis；D.Eimeria cylindrica；E.Eimeria subspherica

亞球形艾美耳球蟲（Eimeriasubspherica）：卵囊呈球形或亞球形，大小為10～13μm×11～14 μm，平均為11.5μm×12.5μm，形狀指數(shù)為0.92。卵囊壁為2層，薄而光滑，均勻、無色、透明，無卵膜孔，無極粒和內(nèi)、外殘體（圖2E）。孢子囊呈卵圓形，平均大小為6.5μm×9.5μm，折光體不明顯。完成孢子化發(fā)育的時間一般為3～4d。

3 討論

本次對昌吉、石河子、奎屯等3個地區(qū)共6個奶牛場犢牛進行了球蟲感染調(diào)查，結(jié)果表明所有的奶牛場均存在球蟲感染，表明目前新疆北疆地區(qū)的奶牛場犢牛球蟲感染也十分普遍，這與國內(nèi)外其他地區(qū)報道的犢牛球蟲感染情況類似［13－14］。6個奶牛場的球蟲感染率高低不一，主要原因是養(yǎng)殖場的飼養(yǎng)管理與環(huán)境存在差異。其中，昌吉二六工的奶牛場和奎屯130團的奶牛場球蟲感染率高于其他奶牛場，其原因是飼養(yǎng)場養(yǎng)殖管理不嚴謹，奶?；顒拥孛婕S尿多，濕度大，適宜球蟲卵囊的發(fā)育和感染；球蟲無法用肉眼直接辨別，飼養(yǎng)員沒有直觀的認識，對帶蟲牛和發(fā)病牛的診斷有誤，不采取防治或盲目防治。而其他4個養(yǎng)殖場飼養(yǎng)空間寬敞，衛(wèi)生較為嚴格，通風良好，球蟲感染率較低。

本次調(diào)查共211頭犢牛，球蟲陽性總感染率達35.55%。調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，新疆北疆奶牛場犢牛感染5種艾美爾球蟲，分別是牛艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲、橢圓艾美耳球蟲、亞球形艾美爾球蟲和柱狀艾美爾球蟲，其中優(yōu)勢蟲種為牛艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲和橢圓艾美耳球蟲，其他2種球蟲所占比例較少，都為混合感染。與江蘇?。?］、安徽?。?5］、上海市［16］的奶牛球蟲的優(yōu)勢蟲種相同。調(diào)查還發(fā)現(xiàn)，從1月齡內(nèi)到12月齡的奶牛球蟲感染率隨著月齡的增長感染率呈下降趨勢。Levine［17］也提到球蟲病主要發(fā)生于青年牛和犢牛，成年牛不易感染，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因可能與牛體年齡抵抗力或幼齡時接觸球蟲而產(chǎn)生的特異性免疫力有關(guān)［6］。

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