納他霉素對(duì)銀杏果的抑菌作用及保鮮效果

李 昱，吳彩娥*，范龔健，李婷婷，吳海霞，華 菁

（南京林業(yè)大學(xué)森林資源與環(huán)境學(xué)院，江蘇 南京 210037）

納他霉素對(duì)銀杏果的抑菌作用及保鮮效果

李 昱，吳彩娥*，范龔健，李婷婷，吳海霞，華 菁

（南京林業(yè)大學(xué)森林資源與環(huán)境學(xué)院，江蘇 南京 210037）

探討銀杏果貯藏過(guò)程中霉變問(wèn)題的解決途徑；以銀杏果主栽品種大佛指為試材，分離篩選出其在貯藏過(guò)程中的主要致霉菌，采用納他霉素作為抑菌劑進(jìn)行體外抑菌實(shí)驗(yàn)，并分別采用不同質(zhì)量濃度納他霉素噴涂處理銀杏果，研究其在0 ℃冷藏過(guò)程中的生理生化及相關(guān)營(yíng)養(yǎng)和貯藏品質(zhì)的變化規(guī)律；250 mg/L納他霉素對(duì)致霉菌便有明顯的抑制作用，使用500 mg/L的納他霉素處理銀杏果，可有效抑制貯藏期間果實(shí)的呼吸強(qiáng)度，降低果實(shí)的細(xì)胞膜透性，維持較高的過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶活性，保持較高的含水量和淀粉含量，較低的霉變率、萎縮率和石灰化指數(shù)。

銀杏；貯藏；納他霉素；抑菌；致霉菌

銀杏（Ginkgo biloba L.）原產(chǎn)于我國(guó)，為裸子植物銀杏綱目前僅存的一種，被人們譽(yù)為“活化石”。銀杏果實(shí)由肉質(zhì)外種皮、骨質(zhì)中種皮、膜質(zhì)內(nèi)種皮以及富含營(yíng)養(yǎng)成分的胚乳和種胚組成，其中用來(lái)貯藏保鮮、加工和鮮食用銀杏主要是除去外種皮后的種核[1]，俗稱白果。但由于其中水分和淀粉含量較高，種子呼吸強(qiáng)度大，營(yíng)養(yǎng)成分消耗快，采后極易出現(xiàn)霉?fàn)€變質(zhì)、失水硬化、糯性下降、外殼發(fā)黃等現(xiàn)象而導(dǎo)致商品價(jià)值降低[2]。在銀杏產(chǎn)地每年銀杏果的發(fā)霉腐爛及硬化現(xiàn)象極為嚴(yán)重。

納他霉素（natamycin）是由納塔爾鏈霉菌等微生物產(chǎn)生的一種多烯類抗菌素，能有效抑制和殺死霉菌、酵母菌和絲狀真菌[3]。納他霉素現(xiàn)主要以溶解形式噴霧于奶酪表面，作為奶酪的防腐劑；還可以用于飲料制作過(guò)程，可以有效地防止飲料中霉菌的生長(zhǎng)[4]；亦有學(xué)者將其應(yīng)用于葡萄[4]、草莓[5]、櫻桃[6]、蘆筍[7]等果蔬，也有良好的防霉保鮮效果。

針對(duì)銀杏果采后貯藏，前人已進(jìn)行了不少研究，如：采前化學(xué)處理、漂白處理、涂膜處理以及不同的外種皮脫除方式對(duì)貯藏期間銀杏果保鮮效果的影響，結(jié)果表明一定濃度的乙烯利和植物生長(zhǎng)素處理、二氧化硫熏蒸、蟲(chóng)膠、樹(shù)膠及乳化石蠟涂膜和飽和石灰水浸泡等貯前處理方式均可較好地保持采后銀杏果的品質(zhì)[8]；還有的學(xué)者采用1% CaCl2浸泡[1]、熱激[12-13]、冷激[9]、60Co輻照[10]、臭氧[11]等處理，但是其貯藏保鮮效果仍然不佳，發(fā)霉腐爛現(xiàn)象仍很嚴(yán)重；對(duì)于銀杏果在貯藏過(guò)程中制霉菌的分離、鑒定及其相關(guān)抑菌實(shí)驗(yàn)尚未進(jìn)行；而且有關(guān)納他霉素對(duì)采后銀杏果貯藏保鮮效果的研究未見(jiàn)資料報(bào)道。因此，進(jìn)一步研究銀杏果貯藏中霉變現(xiàn)象，從根源上抑制霉變，對(duì)于提高銀杏果實(shí)的貯藏品質(zhì)，延長(zhǎng)市場(chǎng)供應(yīng)、增加銀杏果農(nóng)的經(jīng)濟(jì)收入具有重要的意義。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)銀杏果貯藏中引起霉變的致霉菌進(jìn)行了分離、初步鑒定，并對(duì)其體外抑菌實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了研究，后又采用不同質(zhì)量濃度納他霉素處理銀杏果，主要針對(duì)銀杏果貯藏中霉變問(wèn)題進(jìn)行研究，探討不同質(zhì)量濃度納他霉素處理對(duì)銀杏果采后生理生化和貯藏品質(zhì)的影響，以期獲得更適宜的貯藏保鮮方法，延長(zhǎng)貯藏時(shí)間，減少貯運(yùn)損失，為銀杏果長(zhǎng)期保鮮提供有效的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

銀杏果（Ginkgo biloba L.）為主栽品種大佛指。2011年10月20日采自于江蘇省泰興縣，挑選新采收、大小一致的銀杏種核，脫皮洗滌后，室溫條件下晾干7 d，除去空、癟果及蟲(chóng)果等。

納他霉素（純度99.6%） 鄭州奇泓生物科技有限公司。

1.2 培養(yǎng)基

馬丁氏培養(yǎng)基：葡萄糖10 g、蛋白胨5 g、KH2PO41 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、瓊脂15 g，溶于1 000 mL水，pH值自然，此培養(yǎng)液1 000 mL加1%孟加拉紅水溶液3.3 mL。臨用時(shí)每100 mL培養(yǎng)基中加1%鏈霉素溶液0.3 mL；馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（potato dextrose agar，PDA）：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g，溶于1 000 mL水，pH值自然；察氏培養(yǎng)基（czapek yeast extract agar，CYA）：蔗糖30g、NaNO33 g、K2HPO41 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、KCl 0.5 g、FeSO40.01 g、瓊脂20 g，溶于1000 mL水，pH值自然；麥芽葡萄糖培養(yǎng)基（malt extract agar，MEA）：麥芽浸膏30 g、大豆蛋白胨3 g、瓊脂15 g，加蒸餾水配制1 000 mL，pH值調(diào)至5.6±0.2即可。

1.3 方法

1.3.1 致霉菌的分離篩選及體外抑菌實(shí)驗(yàn)

1.3.1.1 菌懸液的制備

將銀杏水洗后放入塑料袋內(nèi)，在27 ℃的恒溫恒濕培養(yǎng)箱里放置，使其長(zhǎng)出大量病菌以便制備菌懸液。取典型發(fā)霉果，用無(wú)菌水沖洗核果表面得到菌懸液，將菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，分別稀釋成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6倍。

1.3.1.2 病菌的初分離

將馬丁氏培養(yǎng)基倒平板，待培養(yǎng)基凝固后，用微量移液槍吸取50 μL菌懸液加入平板，然后涂布均勻。所有操作都在無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行，每個(gè)梯度做3個(gè)平行。將分離出來(lái)的各種不同形態(tài)單菌落再進(jìn)行一次同樣操作。如果得出的菌落形態(tài)確實(shí)一致，將菌種斜面接種保存；如果不一致，重復(fù)上面的操作，直至菌落形態(tài)一致，然后將菌種保存。

1.3.1.3 反接實(shí)驗(yàn)

將新鮮銀杏果漂洗，然后在75%乙醇浸泡30 min，在超凈工作臺(tái)上晾干，再放入菌懸液中浸泡，取出裝入滅菌聚乙烯薄膜袋，扎口，27 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3.1.4 病菌的再分離

5 d后，將聚乙烯袋包裝的長(zhǎng)霉銀杏果進(jìn)行病菌的再分離，方法同1.3.1.3節(jié)。

1.3.1.5 病原菌的初步鑒定

將前后2次保存的菌種進(jìn)行比較，初步找出病原菌。

1.3.1.6 再次反接和分離

操作同1.3.1.4節(jié)和1.3.1.5節(jié)。

1.3.1.7 體外抑菌實(shí)驗(yàn)

采用牛津杯法（管碟法），檢測(cè)納他霉素對(duì)銀杏果致霉菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)。

先將滅菌后的PDA培養(yǎng)基趁熱倒平板，每皿20 mL，作為底層，凝固后等距離放置3 個(gè)直徑為6 mm牛津杯，待作為上層的培養(yǎng)基溫度冷至40 ℃時(shí)，將菌懸液加入700 mL培養(yǎng)基中，得到104CFU/mL菌濃度的培養(yǎng)基，再趁熱迅速倒入培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基冷卻凝固后用鑷子取出3 個(gè)牛津杯；3 個(gè)牛津杯所形成的孔中，1 個(gè)加入無(wú)菌水作為陰性對(duì)照，1 個(gè)加入不同質(zhì)量濃度的納他霉素溶液作為實(shí)驗(yàn)組，1 個(gè)加入一定質(zhì)量濃度的山梨酸鉀作為陽(yáng)性對(duì)照。28 ℃培養(yǎng)4 d，用10分度游標(biāo)卡尺（精確到0.1 mm）測(cè)量記錄抑菌圈的直徑。同一實(shí)驗(yàn)，重復(fù)操作3次，取算術(shù)平均值。參考NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)判斷抑菌效果[12]：抑菌圈半徑R≥20 mm為極敏，15 mm≤R≤19 mm為高敏，10 mm≤R≤14 mm為中敏，R≤9 mm為低敏，無(wú)抑菌圈為耐藥。

1.3.2 納他霉素對(duì)銀杏果保鮮處理

將納他霉素分別配制成質(zhì)量濃度為250、500、750、1 000 mg/L的納他霉素懸浮液，均勻噴涂在銀杏果表面，自然晾干，用0.03 mm聚乙烯薄膜塑料袋進(jìn)行包裝，置于（0.0±1.0） ℃條件下進(jìn)行貯藏，未經(jīng)處理的銀杏果作為對(duì)照。每個(gè)處理3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)約2 kg，每30 d進(jìn)行1次相關(guān)指標(biāo)測(cè)定，連續(xù)測(cè)定180 d。

1.3.3 測(cè)定項(xiàng)目

1.3.3.1 貯藏指標(biāo)測(cè)定方法

呼吸強(qiáng)度的測(cè)定：采用氣流法；細(xì)胞膜透性的測(cè)定：采用電導(dǎo)法；過(guò)氧化物酶（peroxidase，POD）活性的測(cè)定：采用愈創(chuàng)木酚法；過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）活性的測(cè)定：采用紫外吸收法；淀粉含量的測(cè)定：采用蒽酮硫酸法。含水量的測(cè)定：采用稱質(zhì)量法；霉變率、萎縮率的測(cè)定：采用計(jì)數(shù)法。

1.3.3.2 數(shù)據(jù)處理

本實(shí)驗(yàn)采用完全隨機(jī)取樣，每處理3 個(gè)重復(fù)，用Excel整理原始數(shù)據(jù)并作圖，實(shí)驗(yàn)采用SPSS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用Duncan新復(fù)極差檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較，顯著性水平：P＜0.05，差異顯著；P＜0.01，差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 致霉菌形態(tài)學(xué)的初步鑒定

從霉變銀杏果上分離得到3株真菌，經(jīng)柯赫法則驗(yàn)證其中致病菌為一株青霉菌，它們?cè)阼b定培基CYA和MEA上的生長(zhǎng)形態(tài)以及制片鏡檢圖見(jiàn)圖1。根據(jù)其菌落生長(zhǎng)形態(tài)，通過(guò)查找資料[13]，認(rèn)為這株青霉為擴(kuò)展青霉。

圖1 目標(biāo)青霉在CYA、MEA上生長(zhǎng)及100倍鏡檢形態(tài)圖Fig.1 The growth and morphology of Penicillium expansum in CYA and MEA (×100)

2.2 納他霉素對(duì)致霉菌體外抑菌實(shí)驗(yàn)

表1 納他霉素對(duì)致霉菌的抑制作用Table 1 MIC of Natamycin on Penicillium

納他霉素的作用機(jī)理是通過(guò)與細(xì)胞膜里的膽固醇，特別是麥角固醇這樣的固醇類形成復(fù)雜的復(fù)合物，改變細(xì)胞滲透性，從而抑制和殺滅真菌[14]。由表1可知，250 mg/L納他霉素對(duì)目標(biāo)青霉的抑制作用便有較高的敏感性，可以有效抑制致霉菌的生長(zhǎng)，見(jiàn)圖2。文獻(xiàn)[15]指出納他霉素對(duì)真菌的抑菌作用比山梨酸鉀強(qiáng)50倍左右，使用1 g/mL山梨酸鉀作為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)目標(biāo)青霉幾乎沒(méi)有抑制作用。

圖2 納他霉素對(duì)致霉菌的抑菌效果Fig.2 Antimicrobial effect of natamycin on Penicillium expansum

2.3 不同質(zhì)量濃度納他霉素對(duì)銀杏果貯藏品質(zhì)的影響

銀杏果采后貯藏過(guò)程中，常受多種霉菌污染，使外殼呈黑、青、黃白等各種顏色，同時(shí)種仁變硬、霉?fàn)€變軟或呈粉狀，因而造成其品質(zhì)降低，嚴(yán)重影響商品價(jià)值。銀杏果經(jīng)不同質(zhì)量濃度納他霉素處理后，貯藏180 d時(shí)，其霉變率、萎縮率、石灰化指數(shù)如表2所示。低質(zhì)量濃度的納他霉素處理便可有效抑制銀杏果貯藏期間 霉變的發(fā)生，且各質(zhì)量濃度處理間差異不顯著。但可以發(fā)現(xiàn)低質(zhì)量濃度的250、500 mg/L納他霉素處理的萎縮率極顯著低于其他處理組（P＜0.01），且2 個(gè)質(zhì)量濃度處理間差異不顯著，同時(shí)這2 個(gè)質(zhì)量濃度處理的石灰化指數(shù)差異亦不顯著，經(jīng)相關(guān)性分析可知，霉變率與萎縮率、石灰化指數(shù)呈極顯著負(fù)相關(guān)（－0.816**、－0.723**），因此較高質(zhì)量濃度的納他霉素處理可能會(huì)影響銀杏果的貯藏品質(zhì)。

表2 不同質(zhì)量濃度納他霉素對(duì)銀杏果貯藏品質(zhì)的影響Table 2 Effect of different concentrations of natamycin on quality parameters of ginkgo fruits

2.4 不同質(zhì)量濃度納他霉素對(duì)銀杏果呼吸強(qiáng)度的影響

圖3 不同質(zhì)量濃度納他霉素處理對(duì)銀杏果在貯藏期間呼吸強(qiáng)度的影響Fig.3 Effect of different conentrations of natamycin on respiration intensity of ginkgo fruits during storage

呼吸強(qiáng)度表明了組織內(nèi)含物消耗的快慢，是衡量銀杏果生理狀態(tài)的重要標(biāo)志，一般來(lái)說(shuō)，呼吸強(qiáng)度越大，內(nèi)含物消耗越快，衰老的也越快。由圖3可知，在銀杏果的貯藏初期，高質(zhì)量濃度的納他霉素可以有效抑 制銀杏果的呼吸作用，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，不同質(zhì)量濃度間的差異顯著性逐漸降低，貯藏至90 d時(shí)，500、750、1 000 mg/L均極顯著低于其他處理組（P＜0.01），3 個(gè)質(zhì)量濃度間差異不顯著；貯藏180 d時(shí)，低質(zhì)量濃度的納他霉素反而表現(xiàn)了更好的呼吸抑制性，250 mg/L和500 mg/L納他霉素處理的銀杏果，其呼吸強(qiáng)度均極顯著低于其他處理組（P＜0.01），二者間差異不顯著。

2.5 不同質(zhì)量濃度納他霉素對(duì)銀杏果細(xì)胞膜透性的影響

圖4 不同質(zhì)量濃度納他霉素處理對(duì)銀杏果在貯藏期間相對(duì)電導(dǎo)率的影響Fig.4 Effect of different concentrations of natamycin on relative conductivity of ginkgo fruits during storage

植物在貯藏過(guò)程中，細(xì)胞膜內(nèi)大量的不飽和脂肪酸，在生物自由基或活性氧的作用下易誘發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用，膜的通透性增加，離子大量外滲，導(dǎo)致組織浸泡液的電導(dǎo)率增大。由圖4可知，在貯藏初期，低質(zhì)量濃度的納他霉素便可很有效地減緩銀杏果衰老，250 mg/L和500 mg/L納他霉素處理的銀杏果，其相對(duì)電導(dǎo)率均極顯著低于其他處理組（P＜0.01）；貯藏90～120 d時(shí)，500 mg/L處理表現(xiàn)了更為良好的貯藏性，其相對(duì)電導(dǎo)率極顯著低于其他處理組（P＜0.01），隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，銀杏果的衰老逐漸加劇，高質(zhì)量濃度的納他霉素對(duì)于銀杏果貯藏過(guò)程中發(fā)生的脂質(zhì)氧化現(xiàn)象有更好的預(yù)防作用，到貯藏后期，經(jīng)750 mg/L納他霉素處理的銀杏果，其相對(duì)電導(dǎo)率極顯著低于其他處理組（P＜0.01），但與1 000 mg/L和500 mg/L處理差異不顯著。

2.6 不同質(zhì)量濃度納他霉素對(duì)銀杏果POD活性的影響

POD普遍存在于果蔬體內(nèi)，催化植物組織中低質(zhì)量濃度的H2O2氧化其他底物，用以清除過(guò)氧化物H2O2，從而使機(jī)體免受H2O2的毒害作用，較高的POD活性在一定程度上可以延緩果實(shí)的衰老，與植物的抗逆性密切相關(guān)[16]。由圖5可知，銀杏果貯藏30 d時(shí)，750 mg/L和500 mg/L納他霉素處理的銀杏果的POD活性極顯著高于其他各組（P＜0.01），兩質(zhì)量濃度間差異不顯著；貯藏至90 d時(shí)，500 mg/L納他霉素處理的銀杏果的POD活性極顯著高于其他處理組（P＜0.01），但與1 000 mg/L處理差異不顯著；到貯藏結(jié)束180 d時(shí)，250、500、750 mg/L 3 個(gè)質(zhì)量濃度間差異不顯著，但均極顯著低于1 000 mg/L處理（P＜0.01）。

圖5 不同質(zhì)量濃度納他霉素處理對(duì)銀杏果在貯藏期間POD活性的影響Fig.5 Effect of different concentrations of natamycin on POD activity of ginkgo fruits during storage

2.7 不同質(zhì)量濃度納他霉素對(duì)銀杏果CAT活性的影響

圖6 不同質(zhì)量濃度納他霉素處理對(duì)銀杏果在貯藏期間CAT活性的影響Fig.6 Effect of different concentrations of natamycin on CAT activity of ginkgo fruits during storage

過(guò)氧化氫酶（CAT）是一種內(nèi)源活性氧清除劑，能夠在逆境協(xié)迫式衰老過(guò)程中清除植物體內(nèi)過(guò)量的活性氧，維持氧代謝平衡，CAT能在一定程度上延緩細(xì)胞的衰老進(jìn)程，延長(zhǎng)種核的貯藏時(shí)間[16]。由圖6可知，貯藏30 d時(shí)，納他霉素處理可有效激發(fā)CAT活性，以延緩銀杏果衰老，且低質(zhì)量濃度納他霉素的效果更佳，250 mg/L納他霉素處理的銀杏果CAT活性極顯著高于其他處理組（P＜0.01），但與500 mg/L處理差異不顯著；與膜脂氧化的發(fā)生相似，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，高質(zhì)量濃度的納他霉素處理在后期表現(xiàn)出更好的酶活促進(jìn)作用，在貯藏90、150 d時(shí)，500 mg/L納他霉素處理的銀杏果的CAT活性極顯著高于其他組（P＜0.01），在貯藏末期180 d時(shí)，1 000 mg/L納他霉素處理的銀杏果的CAT活性極顯著高于其他組（P＜0.01），但與500 mg/L差異不顯著。

2.8 不同質(zhì)量濃度納他霉素對(duì)銀杏果淀粉酶活性的影響淀粉酶是淀粉水解的關(guān)鍵酶，淀粉酶活性的高低直接影響銀杏果在貯藏期間淀粉含量的多少。由圖7可知，在貯藏初期，低質(zhì)量濃度的納他霉素便可很有效地抑制淀粉酶活性，控制銀杏果在貯藏中發(fā)生的淀粉水解現(xiàn)象，250 mg/L和500 mg/L納他霉素處理的銀杏果，其淀粉酶活性均極顯著低于其他處理組（P＜0.01），貯藏至120 d時(shí)，經(jīng)500 mg/L納他霉素處理的銀杏果的淀粉酶活性僅為對(duì)照組的一半，極顯著低于其他處理組（P＜0.01）。綜合各階段看來(lái)，經(jīng)500 mg/L納他霉素處理可較好地抑制淀粉酶活性在較低水平。

圖7 不同質(zhì)量濃度納他霉素處理對(duì)銀杏果在貯藏期間淀粉酶活性的影響Fig.7 Effect of different concentrations of natamycin on amylase activity of ginkgo fruits during storage

2.9 不同質(zhì)量濃度納他霉素對(duì)銀杏果淀粉含量的影響

圖8 不同質(zhì)量濃度納他霉素處理對(duì)銀杏果在貯藏期間淀粉含量的影響Fig.8 Effect of different concentrations of natamycin on starch content of ginkgo fruits during storage

淀粉是銀杏果的主要營(yíng)養(yǎng)成分，在貯藏過(guò)程中，種胚持續(xù)發(fā)育，淀粉酶分解淀粉，以滿足了種胚的后熟生長(zhǎng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量物質(zhì)的需求[17]，通過(guò)對(duì)淀粉含量的測(cè)定，可以推測(cè)銀杏果的生理活性狀態(tài)。由圖8可知，貯藏30 d時(shí)，經(jīng)500 mg/L納他霉素處理的銀杏果的淀粉含量為40.08%，極顯著高于其他處理組（P＜0.01）；貯藏90 d時(shí)，其淀粉含量為29.74%；貯藏120 d后，淀粉含量變化明顯；貯藏末期180 d時(shí)，經(jīng)500 mg/L納他霉素處理的銀杏果的淀粉含量仍可達(dá)到13.06%，極顯著高于其他處理組（P＜0.01）。在整個(gè)貯藏過(guò)程中，500 mg/L納他霉素處理可維持淀粉含量在較高水平。

2.10 不同質(zhì)量濃度納他霉素對(duì)銀杏果含水量的影響

含水量是衡量銀杏果品質(zhì)的重要指標(biāo)，水分含量高則種仁新鮮飽滿，食用品質(zhì)好[18]；一定的含水量是維持細(xì)胞膨壓、保持種子新鮮度的主要因素，而且含水量與種子的活力密切相關(guān)[19]；但含水量過(guò)高，濕度大為霉菌的生長(zhǎng)提供了溫床，易引發(fā)銀杏果在貯藏過(guò)程中發(fā)生霉變現(xiàn)象；而組織少量失水后，果實(shí)不再飽滿，發(fā)生萎縮，“石灰化”等現(xiàn)象，還會(huì)使其抗氧化能力降低，自由基產(chǎn)生增加，同時(shí)伴隨膜脂質(zhì)過(guò)氧化作用，使膜傷害加強(qiáng)，透性增大，種子活力降低。

圖9 不同質(zhì)量濃度納他霉素處理對(duì)銀杏果在貯藏期間含水量的影響Fig.9 Effect of different concentrations of natamycin on water content of ginkgo fruits during storage

由圖9可知，貯藏的90 d內(nèi)，經(jīng)納他霉素處理的銀杏果的含水量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），但是不同質(zhì)量濃度納他霉素處理間差異不顯著，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，銀杏果的含水量不斷下降，但是低質(zhì)量濃度的含水量的下降速度較為平緩，至貯藏120 d時(shí)，250 mg/L納他霉素處理的銀杏果的含水量為60.09%，極顯著高于其他處理組（P＜0.01），但與500 mg/L納他霉素處理差異不顯著；到貯藏后期，500 mg/L納他霉素處理的銀杏果的含水量均極顯著高于其他各組（P＜0.01）。與銀杏果貯藏期間的霉變率比較可知，500 mg/L納他霉素處理不但可以保持銀杏果較高的含水量，也可避免在貯藏過(guò)程中的霉變現(xiàn)象。

3 結(jié) 論

銀杏果貯藏中易出現(xiàn)霉腐病癥，實(shí)驗(yàn)證明擴(kuò)展青霉是導(dǎo)致霉變的主要病原菌之一。本實(shí)驗(yàn)研究了納他霉素對(duì)病原菌的抑制作用，250 mg/L對(duì)其致霉菌有較為敏感的抑制作用。后續(xù)實(shí)驗(yàn)是對(duì)銀杏果進(jìn)行涂膜處理，以達(dá)到有效地抑制霉菌生長(zhǎng)的目的，實(shí)驗(yàn)證明，250 mg/L納他霉素處理便可有效地抑制致霉菌的生長(zhǎng)，降低霉變率。

貯藏過(guò)程中，采用適當(dāng)?shù)募{他霉素處理可以使銀杏果維持較低的呼吸強(qiáng)度，本實(shí)驗(yàn)中，500 mg/L納他霉素處理抑制了銀杏果呼吸強(qiáng)度。POD、CAT等酶被稱為膜的酶保護(hù)系統(tǒng)，它們對(duì)于清除細(xì)胞內(nèi)氧自由基、保護(hù)細(xì)胞膜不受自由基傷害有重要作用。該酶保護(hù)系統(tǒng)在貯藏前期保持較高水平，隨貯藏時(shí)間延長(zhǎng)，膜受自由基傷害而導(dǎo)致電導(dǎo)率升高[20]。相對(duì)電導(dǎo)率反映膜的透性及膜受破壞的程度，納他霉素處理對(duì)于銀杏果膜系統(tǒng)，保持一定的細(xì)胞膜透性有重要作用，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，500 mg/L納他霉素處理效果最好，同時(shí)可以延緩淀粉的消耗分解，延長(zhǎng)貯藏期。

銀杏果含水量較高，一般條件下不耐貯藏，干燥時(shí)又容易風(fēng)干失水，種仁皺縮[21]，發(fā)生“石灰化”，致使食用價(jià)值和商品價(jià)值降低；但貯藏過(guò)程中，若保持較高的含水量又易導(dǎo)致較高的霉變率[22]，因此在貯藏銀杏種子時(shí)如何控制銀杏果的含水量非常重要。低質(zhì)量濃度的納他霉素處理保持了銀杏果飽滿的同時(shí)，可有效降低霉變率，避免石灰化的發(fā)生，500 mg/L納他霉素處理很好地減少了銀杏果貯藏過(guò)程中水分的損失，為最佳的處理質(zhì)量濃度，為了進(jìn)一步既保持一定的含水量又防止霉變的發(fā)生，可以采取復(fù)合保鮮劑進(jìn)一步進(jìn)行研究。

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Antimicrobial and Preservative Effects of Natamycin on Ginkgo Fruits

LI Yu, WU Cai-e*, FAN Gong-jian, LI Ting-ting, WU Hai-xia, HUA Jing
(College of Forest Resource and Environment, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, China)

The aim of this study was to find out an effective way for the control of postharvest decay of ginkgo fruits during storage. Natamycin was tested for its in vitro inhibitory activity on the main pathogen Penicillium expansum isolated from “Large Buddha Finger” ginkgo fruits during storage. Moreover, the effect of postharvest spraying with different concentrations of natamycin on physiological and biochemical parameters, nutritional quality and storage stability of ginkgo fruits stored at 0 ℃ was examined. Natamycin at 250 mg/L had a potent inhibitory effect on the isolated strain. The respiratory intensity of ginkgo fruits was inhibited by natamycin at 500 mg/L, while maintaining lower membrane permeability, decay incidence, shrinking rate and calcification index of kernels as well as higher peroxidase (POD) and catalase (CAT) activities and moisture and starch contents.

ginkgo fruits; storage; natamycin; antibacterial activities; decay pathogens

S609.3

A

1002-6630（2014）04-0220-06

10.7506/spkx1002-6630-201404045

2013-04-03

江蘇省科技支撐（農(nóng)業(yè)）項(xiàng)目（BE2011381）；國(guó)家林業(yè)局林業(yè)公益性行業(yè)科研專項(xiàng)（201004015）；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目（PAPD）；江蘇高等學(xué)校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)科研計(jì)劃（蘇教科（2009）10號(hào)）

李昱（1988—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品貯藏與加工。E-mail：crystal__lee@163.com

*通信作者：吳彩娥（1962—），女，教授，博士，研究方向?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品貯藏與加工。E-mail：sxwucaie@163.com