CD44v6、E-cadherin和ki-67蛋白質(zhì)與腮腺多形性腺瘤的生物學(xué)行為相關(guān)性研究

邱雪冰，趙瑾，徐江

（石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，石河子 832002）

多形性腺瘤是腮腺區(qū)最常見(jiàn)的良性腫瘤，該瘤生長(zhǎng)較緩慢。極少發(fā)生遠(yuǎn)處的轉(zhuǎn)移，但具有一定的侵襲性，其包膜不完整易復(fù)發(fā)，臨床手術(shù)成功治療病例仍然有2%-3%的復(fù)發(fā)率。多次復(fù)發(fā)或病程較長(zhǎng)者可發(fā)生惡變并轉(zhuǎn)移[1]。

通過(guò)對(duì)CD44v6、E-cadherin和ki-67蛋白質(zhì)與腮腺多形性腺瘤的相關(guān)性研究，發(fā)展新的手段來(lái)檢測(cè)腫瘤的轉(zhuǎn)移，有助于腫瘤的診斷和判斷預(yù)后，也有助于為臨床上采用有效的治療方法提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

材料取自石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院頜面外科2007-2012年多形性腺瘤手術(shù)標(biāo)本50例，均經(jīng)病理證實(shí)。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行任何抗腫瘤治療?；颊吣挲g19～76歲，平均年齡44歲，其中男性21例，女性29例。取瘤旁非瘤組織為對(duì)照。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué)SP法 （過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈酶素卵白素法）染色,鼠抗人CD44v6、E-cadherin、ki-67及二抗均購(gòu)于武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，SP免疫組化試劑盒，DAB顯色劑均購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本均經(jīng) 10%甲醛固定，石蠟重新包埋后，將每個(gè)蠟塊切成4-5μm的切片，共切5張，1張HE染色，1張作為陰性對(duì)照，其余3張分別CD44v6、E-cadherin、ki-67染色。陽(yáng)性對(duì)照用已知陽(yáng)性片，陰性對(duì)照用PBS代替一抗。

數(shù)據(jù)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，各組間CD44v6、E-cadherin和ki-67表達(dá)強(qiáng)度的比較均采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 CD44v6與腮腺多形性腺瘤的生物學(xué)行為相關(guān)性研究

2.1.1 CD44v6 的陽(yáng)性表達(dá)

光鏡下觀察，CD44v6染色以胞膜呈黃色或棕黃色為陽(yáng)性反應(yīng)，隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野（×400），每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，染色結(jié)果結(jié)合陽(yáng)性率和著色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析，由兩項(xiàng)積分相乘進(jìn)行評(píng)分。多形性腺瘤中瘤體侵及包膜中CD44v6強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖1）；多形性腺瘤中腫瘤呈多結(jié)節(jié)狀生長(zhǎng)CD44v6強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖2）。

圖1 多形性腺瘤瘤體侵包膜中CD44v6陽(yáng)性表達(dá)（×200）Fig.1 Pleomorphic adenoma CD44v6 positive expression in tumors invade coated（×200）

2.1.2 各組的CD44v6的表達(dá)及比較

由表1可見(jiàn)，多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組、復(fù)發(fā)傾向組及惡變組表達(dá)CD44v6陽(yáng)性率達(dá)100%，強(qiáng)陽(yáng)性率為80%，瘤周非瘤組織表達(dá)CD44v6陽(yáng)性率達(dá)17.6%，較前者低（Z=-8.821，P＜0.001）。

多形性腺瘤惡變組CD44v6陽(yáng)性率較瘤周非瘤組織組高，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-5.883，P＜0.001）。

多形性腺瘤組CD44v6陽(yáng)性率也較瘤周非瘤組織組高，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-8.408，P＜0.000）。多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組與復(fù)發(fā)傾向組CD44v6陽(yáng)性表達(dá)兩組差異不顯著。

多形性腺瘤組與多形性腺瘤惡變組間CD44v6陽(yáng)性表達(dá)差異也不顯著，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖2 多形性腺腫瘤呈多結(jié)節(jié)狀生長(zhǎng)CD44v6陽(yáng)性表達(dá)（×200）Fig.2 Polymorphism in the multiple nodular gland tumor growth CD44v6 positive expression(×200)

表1 各組CD44v6的表達(dá)強(qiáng)度（×200）Tab.1 Each group of CD44v6 expression intensity（×200）

2.2 E-cadherin與腮腺多形性腺瘤的生物學(xué)行為相關(guān)性研究

2.2.1 E-cadherin 的陽(yáng)性表達(dá)

光鏡下觀察，E-cadherin染色以胞膜呈黃色或棕黃色為陽(yáng)性反應(yīng)，隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野（×400），每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，染色結(jié)果結(jié)合陽(yáng)性率和著色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析，由兩項(xiàng)積分相乘進(jìn)行評(píng)分。多形性腺瘤惡變中E-cadherin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖3）；多形性腺瘤中多形性腺瘤瘤體侵包膜中E-cadherin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖4）。

圖3 多形性腺瘤惡變中E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)（×200）Fig.3 E-cadherin positive expression in malignant pleomorphic adenoma（×200）

圖4 多形性腺瘤瘤體侵包膜中E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)（×200）Fig.4 Pleomorphic adenoma tumors invade coated in E-cadherin positive expresssion（×200）

2.2.2 各組的E-cadherin的表達(dá)及比較

多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組、復(fù)發(fā)傾向組及惡變組表達(dá)E-cadherin陽(yáng)性率達(dá)96%，強(qiáng)陽(yáng)性率為76%，瘤周非瘤組織E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率82%。多形性腺瘤組E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率高于瘤周非瘤組織組，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-6.495，P＜0.000）。多形性腺瘤惡變組E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性率較瘤周非瘤組織高，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-5.839，P＜0.001）。 多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組、復(fù)發(fā)傾向組相比較，兩組差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Z=-3.422，P=0.001）。 多形性腺瘤組與多形性腺瘤惡變組間兩組差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.316，P=0.021）。 結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組E-cadherin的表達(dá)強(qiáng)度（×200）Tab.2 The expression of goup E-cadherin intensity（×200）

2.3 ki-67與腮腺多形性腺瘤的生物學(xué)行為相關(guān)性研究

2.3.1 ki-67 的陽(yáng)性表達(dá)

光鏡下觀察，Ki-67染色以胞核內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性細(xì)胞百分率以細(xì)胞增殖指數(shù)（Proliferating Index，PI）表示。 多形性腺瘤惡變中Ki-67強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖5）；多形性腺瘤中多形性腺瘤瘤體侵包膜中Ki-67強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖6）。

2.3.2 各組的ki-67表達(dá)及比較

多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組、復(fù)發(fā)傾向組及惡變組表達(dá)Ki-67陽(yáng)性率達(dá)73.8%，強(qiáng)陽(yáng)性率為26.2%。多形性腺瘤組Ki-67表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于瘤周非瘤組織組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Z=-6.335，P＜0.000）。多形性腺瘤惡變組Ki-67表達(dá)陽(yáng)性率較瘤周非瘤組織高，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Z=-6.905，P＜0.001）。 多形性腺瘤非復(fù)發(fā)傾向組、復(fù)發(fā)傾向組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Z=-2.539，P=0.011）。多形性腺瘤組與多形性腺瘤惡變組間差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（-2.382，P=0.017）。 結(jié)果見(jiàn)表 3。

圖5 多形性腺瘤惡變中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)（×200）Fig.5 Ki-67 posityve expression in malignant pleororphic adenoma（×200）

圖6 多形性腺瘤瘤體侵包膜Ki-67陽(yáng)性表達(dá)（×200）Fig.6 Pleomorphic adenoma tumors invade coated in the positive expression of Ki-67（×200）

表3 各組Ki-67的表達(dá)強(qiáng)度Tab.3 Groups of strength of the expression of Ki-67（×200）

3 討論

CD44v6分子是一類具有高度異質(zhì)性單鏈膜細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，主要參與細(xì)胞與基質(zhì)間的粘附，與細(xì)胞的遷移有關(guān)，屬于未分類的黏附分子。CD44v6在腫瘤細(xì)胞表面通常呈現(xiàn)異常表達(dá),與腫瘤的復(fù)發(fā)有著密切相關(guān),在腫瘤的侵襲 、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中起著重要的作用[2-4]。本研究結(jié)果顯示，腮腺多形性腺瘤惡變組、復(fù)發(fā)傾向組及非復(fù)發(fā)傾向組CD44v6的陽(yáng)性及強(qiáng)陽(yáng)性率較高，表明CD44v6的表達(dá)與腮腺多形性腺瘤的轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性，CD44v6陽(yáng)性患者的預(yù)后顯著較差。CD44v6參與腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，但它并不是腫瘤轉(zhuǎn)移的必然因素，在發(fā)揮作用時(shí)，必定還要受到體內(nèi)許多條件的制約，在細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中已經(jīng)證實(shí)CD44v6是一種轉(zhuǎn)移相關(guān)基因。

E-cadherin是Ⅰ型cadherin的原型,是一種依賴于鈣離子的細(xì)胞間黏附分子,幾乎表達(dá)于所有上皮組織,對(duì)細(xì)胞間的連接和相互作用具有關(guān)鍵作用,其通過(guò)其細(xì)胞外的Ig結(jié)構(gòu)域間形成黏結(jié)結(jié)合，參與細(xì)胞間的黏附，維持組織結(jié)構(gòu)完整性和極性,其表達(dá)的下降與腫瘤的發(fā)生、分化、侵襲轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后不良有著密切的關(guān)聯(lián)[5]，被認(rèn)為是參與腫瘤惡變以及轉(zhuǎn)移的重要蛋白[6-7]。本研究結(jié)果顯示，E-cadherin在多形性腺瘤惡變組強(qiáng)陽(yáng)性率較高，多形性腺瘤惡變易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，瘤旁非瘤組織組E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性，是腫瘤轉(zhuǎn)移的早期表現(xiàn)。大量的研究結(jié)果表明，E-cadherin表達(dá)下降或喪失與腫瘤低分化、高侵襲、高轉(zhuǎn)移和高復(fù)發(fā)率呈正相關(guān)，是預(yù)示腫瘤進(jìn)展及患者預(yù)后的指標(biāo)之一。

Ki-67作為與細(xì)胞核增殖相關(guān)的抗原,是近年來(lái)研究最多、最具有前途的細(xì)胞增生標(biāo)記之一。細(xì)胞增殖活性是判斷腫瘤預(yù)后的指標(biāo)之一，可以判斷腫瘤惡性程度及評(píng)估腫瘤的生物學(xué)行為。ki-67的檢測(cè)是目前用于檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性的方法之一。本研究表明ki-67表達(dá)在多形性腺瘤組明顯高于瘤旁非瘤組織，說(shuō)明ki-67可作為多形性腺瘤早期癌變指標(biāo)。許多研究表明，在人體的多種惡性腫瘤中，如胃癌、乳腺癌、卵巢癌以及膀胱癌等，不管腫瘤的大小、浸潤(rùn)的深度和組織學(xué)類型如何，即便是早期病變，轉(zhuǎn)移的發(fā)生伴隨著K-67陽(yáng)性指數(shù)的增加而增加[8]。

E-cadherin和ki-67與腮腺多形性腺瘤的生物學(xué)行為有關(guān)，其表達(dá)與腮腺多形性腺瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān),可作為新的腫瘤標(biāo)志物,其表達(dá)對(duì)判斷預(yù)后有一定的價(jià)值，而CD44v6在腮腺多形性腺瘤組與瘤周非瘤組織組、多形性腺瘤惡變組與瘤周非瘤組織組有生物學(xué)意義。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，腫瘤轉(zhuǎn)移一直是腫瘤研究的一個(gè)熱點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示E-cadherin、ki-67更敏感，更具特異性，對(duì)腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有更有意義，可作為新的腫瘤標(biāo)志物，二者均可用于評(píng)估多形性腺癌的預(yù)后，指導(dǎo)治療有一定的價(jià)值。

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