分光光度法測(cè)定茶葉中茶多酚實(shí)驗(yàn)條件摸索

【摘 要】（Tea Polyphenols）是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，包括黃烷醇類、花色苷類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等。其中以黃烷醇類物質(zhì)（兒茶素）最為重要。茶多酚又稱茶鞣或茶單寧，是形成茶葉色香味的主要成份之一，也是茶葉中有保健功能的主要成份之一。

【關(guān)鍵詞】茶多酚；分光光度法；實(shí)驗(yàn)條件摸索

光學(xué)分析法是利用物質(zhì)對(duì)光產(chǎn)生吸收，根據(jù)吸收的特征和吸收程度對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析方法。

許多物質(zhì)的溶液是有顏色的。例如高錳酸鉀溶液呈紫色，鄰二氮菲亞鐵絡(luò)合物的溶液呈橙紅色，亞硝酸鹽先重氧化再偶合生成紫紅色染料等等。溶液的濃度越大，顏色越深。目視比色法就是基于物質(zhì)溶液顏色的深淺來測(cè)定物質(zhì)濃度的一種方法，在目視比色法的基礎(chǔ)上又發(fā)展了光電比色法和分光光度法等。在選定波長(zhǎng)下，分光光度法是建立在被測(cè)物質(zhì)的溶液濃度對(duì)光吸收程度與溶液中吸光組分的濃度有定量關(guān)系。通常是將被測(cè)物質(zhì)通過化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)變成有色化合物和絡(luò)合物，然后根據(jù)顏色的深淺來定量。分光光度法具有如下特點(diǎn)：

1、靈敏度高：常用于測(cè)定式樣中1%～3%的微量組成，如組分經(jīng)富集，靈敏度可提高2～3個(gè)數(shù)量級(jí)。2、準(zhǔn)確度高：響度誤差約為5%～10%，準(zhǔn)確度能夠滿足量組分測(cè)定的要求。3、操作簡(jiǎn)單：所需設(shè)備不復(fù)雜，如果將式樣處理成溶液，通常只需經(jīng)歷顯色和測(cè)量就可得出結(jié)果。4、應(yīng)用廣泛：幾乎所有的無機(jī)離子和有機(jī)化合物都可直接或者間接測(cè)定。是應(yīng)用最廣泛的一種分析法。

一、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備

1、茶葉的取樣。小包裝茶取樣時(shí)，在整批包裝完成后的堆垛中，從不同堆放位置隨機(jī)抽取規(guī)定的件數(shù)，逐件開啟。從各件內(nèi)不同位置處，取出2～3盒（聽、袋）。所取樣品保留數(shù)盒（聽、袋），盛于密閉的容器中，供單個(gè)分別檢驗(yàn)。其余部分現(xiàn)場(chǎng)拆封，倒出茶葉，混勻。再用分樣器或四分法逐步縮分至約500g，作為平均樣品，裝于茶筒中，供檢驗(yàn)用。袋泡茶的拆封混樣工作，在檢驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。

2、試樣的制備

樣品、花茶、儀器、研缽

操作步驟：將茶樣按茶取樣方法取出，置于研缽中磨碎，達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需粒度。

原理：用沸水萃取茶葉中的可溶性物質(zhì)，再經(jīng)過濾，留濾液配成試液。

儀器：燒杯（500mL、250mL）玻璃棒、量筒、漏斗、試紙、錐形瓶

操作步驟：準(zhǔn)確稱取3g（精確至0.0001g），磨碎的試樣于500mL燒杯中，加沸蒸餾水450mL，放在電熱板上加熱45min（每隔10min用玻璃棒攪拌一次）。煮完后，用普通過濾進(jìn)行過濾，過濾完再洗2-3次為止，將濾液稀釋至500mL即可。

二、分光光度計(jì)的使用方法

721型分光光度計(jì)其波長(zhǎng)范圍360～800nm，色散元件為三角棱形。使用之前先檢查儀器各調(diào)節(jié)鈕的起始位置是否正確，接通電源開關(guān)，打開樣品室暗箱蓋，使電表指針處于“0”位，預(yù)熱20min后，再選擇須用的單色光波長(zhǎng)和相應(yīng)的放大靈敏度檔，用調(diào)“0”電位器調(diào)整電表為T=0%。

蓋上樣品室蓋使光電管受光，推動(dòng)試樣架拉手，使參比溶液池（溶液裝入4/5高度，置第一格）置于光路上，調(diào)節(jié)100%透射比調(diào)節(jié)器，使電表指針指T=100%。重復(fù)進(jìn)行打開樣品室蓋，調(diào)0，蓋上樣品室蓋，調(diào)透射比為100%的操作至儀器穩(wěn)定。蓋上樣品室蓋，推動(dòng)試樣架拉手，使樣品溶液池置于光路上，讀出吸光度值。讀數(shù)后應(yīng)立即打開樣品室蓋。

測(cè)量完畢，取出比色皿，洗凈后倒置于濾紙上晾干。各旋鈕置于原來位置，電源開關(guān)置于“關(guān)”，拔下電源插頭。

放大器各檔的靈敏度為：“l(fā)”×1倍；“2”×10倍；“3”×20倍，靈敏度依次增大。由于單色光波長(zhǎng)不同時(shí)，光能量不同，需選不同的靈敏度檔。選擇原則是在能使參比溶液調(diào)到T=100%處時(shí)，盡量使用靈敏度較低的檔，以提高儀器的穩(wěn)定性。改變靈敏度檔后，應(yīng)重新調(diào)“0”和“100”。

原理：分光光度法利用物質(zhì)對(duì)某種波長(zhǎng)單色光能量的吸收特性，根據(jù)朗伯—比耳定律以測(cè)量物質(zhì)的成分和含量。本儀器是利用相對(duì)測(cè)量原理工作。既先選定某一溶劑作為空白溶液（或參比溶液）將某透過率（透射比）依為100%（或吸光度、濃度為0），然后測(cè)定式樣的透過率（或吸光度、濃度）讀取相對(duì)比值。

T=I0/I A=LgI0/I=Lg1/T=abc 其中，T——投射比 a——吸收系數(shù) I0——入射光強(qiáng)度 b——溶液的光程強(qiáng)度 I——投射光 c——溶液的濃度 A——吸光度

由上述可以看出當(dāng)吸光系數(shù)與光程長(zhǎng)度不變時(shí)，吸光度與溶液的濃度成正比。

三、分光光度法測(cè)定茶葉中茶多酚

1、實(shí)驗(yàn)所用試劑和儀器

儀器：電子天平、分光光度計(jì)、酸度計(jì)、燒杯、錐形瓶、量筒、試劑瓶、 漏斗移液管、比色皿

試劑：酒石酸亞鐵溶液、pH=7.5磷酸鹽緩沖液、1/15M磷酸氫鈉、 1/15M磷酸二氫鉀蒸餾水

2、溶液的配制

酒石酸亞鐵溶液：稱取0.5g（準(zhǔn)確至0.0001g）、硫酸亞鐵和2.5g （準(zhǔn)確至 0.0001g）、酒石酸鉀鈉，用水溶解并定容至500mL（溶液應(yīng)避光，低溫保存，有效期一個(gè)月）。

pH=7.5磷酸鹽緩沖液：1/15M磷酸氫二鈉：稱取11.6885g磷酸氫二鈉，加水溶解后定容至500mL。1/15M磷酸二氫鉀：稱取4.539g磷酸二氫鉀，加水溶解后定容至500mL。

取上述1/15M的磷酸氫二鈉溶液85ml和1/15M的磷酸二氫鉀溶液15ml混合均勻。

3、測(cè)定

（1）試液的制備：按制備方法制備試液。

（2）測(cè)定：準(zhǔn)確吸取制備好的試液1mL，注入25mL的容量瓶中，加水4mL和酒石酸亞鐵溶液5mL，充分混合，再加緩沖溶液液稀釋至刻度，用10mm比色杯，在波長(zhǎng)540nm處，以試劑空白溶液（空白即在不加試液換為蒸餾水配成的溶液）作參比，測(cè)定吸光度（A）。

（3）結(jié)果計(jì)算

茶葉中茶多酚的含量，以干態(tài)質(zhì)量百分率表示，按下式計(jì)算：

茶多酚（%）= ×100

式中，L1——試液的總量， mL L2——測(cè)定時(shí)的用液量， mL M——試樣的質(zhì)量， g

m——試樣干物質(zhì)含量百分率，% A——試樣的吸光度

通過本驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)可知，放置時(shí)間對(duì)茶葉中茶多酚含量也有影響，放置時(shí)間越長(zhǎng)，茶多酚的含量越低，因此，后面的實(shí)驗(yàn)應(yīng)該用新配的試液。

綜上所述，分光光度法測(cè)定茶葉中茶多酚最佳實(shí)驗(yàn)條件為：pH在7.0左右， 顯色劑酒石酸亞鐵的用量為4mL，試驗(yàn)溫度為95℃，供試液為新配制。

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