抑癌基因PTEN在大腸癌中的表達(dá)及臨床意義

[摘要] 目的 探討抑癌基因PTEN在大腸癌中的表達(dá)及臨床意義。 方法 采用免疫組化S-P法檢測70例大腸癌組織中PTEN的表達(dá)，并探討其與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期等生物學(xué)行為的相關(guān)性。另選擇30例癌旁正常大腸組織作對照組。 結(jié)果 70例大腸癌標(biāo)本中PTEN陽性表達(dá)32例。30例癌旁正常組織中PTEN表達(dá)均陽性。大腸癌組織中PTEN的陽性率明顯低于癌旁正常組織（χ2=26.27，P<0.01）。大腸癌組織中PTEN表達(dá)與生物學(xué)行為的關(guān)系較密切，與組織分化程度呈正相關(guān)（r=0.30，P<0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期呈負(fù)相關(guān)（r=-0.27，P<0.05； r=-0.26，P<0.05）。 結(jié)論 PTEN基因異常改變參與大腸癌的發(fā)生與發(fā)展過程，其表達(dá)水平與大腸癌的生物學(xué)行為具有明顯相關(guān)性，參與大腸癌惡化演變、浸潤和轉(zhuǎn)移過程，有望成為大腸癌基因診斷和治療的新靶點(diǎn)。

[關(guān)鍵詞] 大腸癌；PTEN基因；免疫組化；生物學(xué)行為

[中圖分類號] R735.34 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）33-0053-02

大腸癌是臨床較常見的消化道惡性腫瘤，其發(fā)生和發(fā)展過程是一個涉及多基因參與復(fù)雜病理過程，其中癌基因激活和抑癌基因失活引起的細(xì)胞增殖異常是其中重要分子機(jī)制之一[1]。第10號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因（phosphatase and tension hom logy deleted on chromosome 10，PTEN）是目前發(fā)現(xiàn)的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因，在惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、浸潤和凋亡中起抑制作用[2，3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)在許多惡性腫瘤中表達(dá)減少或缺失，并引起腫瘤細(xì)胞無限制生長，但有關(guān)PTEN基因在大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義國內(nèi)外研究不多[4，5]。本研究觀察了抑癌基因PTEN在大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月～2013年4月兩院普外科收治的大腸癌患者70例。納入患者均具有完整臨床資料且經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)，且所有患者術(shù)前均未進(jìn)行任何形式的化療、放療或免疫治療。其中男38例，女32例；年齡36～89歲，平均（64.7±7.2）歲。另選擇同期30例癌旁正常大腸組織（距腫瘤邊緣>5 cm）作對照組，其中男17例，女13例；年齡38～87歲，平均（65.0±7.1）歲。兩組患者在性別、年齡方面比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 免疫組化染色

采用免疫組化S-P法檢測PTEN的表達(dá)。組織經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟常規(guī)包埋4 μm連續(xù)切片，進(jìn)行HE染色和免疫組化S-P法染色。4 μm石蠟切片常規(guī)逐級脫蠟至水，3%H2O2室溫孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，用微波抗原進(jìn)行修復(fù)，滴加正常的羊血清封閉15 min，傾去血清滴加PTEN一抗工作液4℃過夜，后滴加生物素標(biāo)記二抗工作液室溫孵育15 min，再滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素室溫孵育15 min。各步驟間PBS沖洗5 min×3次。常規(guī)DAB顯色、復(fù)染、脫水、透明、封片和鏡檢。用已知陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。鼠抗人PTEN單克隆抗體為 Santa Cruz公司產(chǎn)品，免疫組化S-P試劑盒購自福州邁新公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

1.3 結(jié)果判定

免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)是以細(xì)胞漿見棕褐色顆粒者為陽性細(xì)胞。按照染色的有無及強(qiáng)度進(jìn)行記分，其中0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；按照陽性染色細(xì)胞百分率記分，其中1分為11%～50%，2分為51%～75%，3分為>75%，兩項(xiàng)記分得分相乘結(jié)果>3為（+），否則為（-）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0 for windows 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件。計(jì)數(shù)資料結(jié)果以率[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本文相關(guān)性檢驗(yàn)資料屬于等級資料，采用非參數(shù)檢驗(yàn)的Spearman相關(guān)系數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 PTEN在大腸癌組織和癌旁組織中的表達(dá)的差異

70例大腸癌標(biāo)本中PTEN的陽性表達(dá)為32例。30例癌旁正常組織中PTEN表達(dá)均為陽性。大腸癌組織中PTEN的陽性率明顯低于癌旁正常組織，比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=26.27，P<0.01）。見表1。

2.2 大腸癌組織中PTEN的表達(dá)與生物學(xué)行為的關(guān)系

大腸癌組織中PTEN表達(dá)與生物學(xué)行為的關(guān)系較密切，與組織分化程度呈正相關(guān)（r=0.30，P<0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期呈負(fù)相關(guān)（r=-0.27，P<0.05； r=-0.26，P<0.05）。見表1。

3 討論

大腸癌是消化道的高發(fā)惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于胃癌及食管癌。近年來由于飲食結(jié)構(gòu)的改變，大腸癌發(fā)病率及死亡率呈逐漸上升趨勢，尤其是大腸癌的中遠(yuǎn)期進(jìn)展、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)較快，生存率仍偏低。因此明確大腸癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制是提高大腸癌患生存率和降低死亡率的關(guān)鍵[1]。大腸癌的發(fā)生是遺傳和環(huán)境因素等多種因素共同作用的結(jié)果，抑癌基因的失活可促進(jìn)細(xì)胞的增殖，抑制凋亡和促進(jìn)腫瘤的發(fā)生在其中起重要作用。PTEN是近10年來新發(fā)現(xiàn)的一個抑癌基因，位于人染色體10 q23.3位點(diǎn)，全長約218 kb，有9個外顯子，其編碼由403個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)[6-8]。PTEN編碼的蛋白具有酪氨酸磷酸激酶活性，可抑制酪氨酸的磷酸化，對細(xì)胞增生、增殖、凋亡、粘附和遷移和細(xì)胞周期起調(diào)控作用，PTEN失活則促進(jìn)腫瘤進(jìn)行性生長和腫瘤細(xì)胞增殖活性增加，PTEN因其獨(dú)特的作用途徑和在多種人類腫瘤的發(fā)病中的重要性而備受重視[9-11]。

近年來研究發(fā)現(xiàn)PTEN基因的突變或表達(dá)缺失與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的關(guān)系密切。馬穎等[12]研究發(fā)現(xiàn)PTEN在正常大腸組織、大腸腺瘤、大腸癌組織中的表達(dá)率分別為100%、70%和51.61%，呈逐級下降的趨勢，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析大腸癌中PTEN的表達(dá)率明顯低于非癌組。推測PTEN蛋白的丟失大腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中可能起重要作用。谷化平等[13]研究發(fā)現(xiàn)大腸癌組織中PTEN蛋白表達(dá)率明顯低于大腸腺瘤和正常大腸黏膜組織，提示PTEN基因缺失或突變與大腸癌的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)大腸癌組織中PTEN的表達(dá)率明顯低于癌旁正常組織，與上述的研究報道相符，提示PTEN基因異常改變參與大腸癌的發(fā)生與發(fā)展過程，可成為大腸癌基因診斷的新靶點(diǎn)。近年來國內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)大腸癌組織中PTEN的表達(dá)與其生物學(xué)行為的關(guān)系較密切。張敬偉[14]研究發(fā)現(xiàn)大腸癌組織中PTEN蛋白的表達(dá)與其分化程度呈正相關(guān)，即癌組織的分化程度愈差，其表達(dá)水平愈弱；PTEN蛋白表達(dá)還與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期呈負(fù)相關(guān)。曲洪濱等[15]研究發(fā)現(xiàn)大腸癌組織中PTEN蛋白的表達(dá)與癌細(xì)胞的分化、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為密切相關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)大腸癌組織中PTEN表達(dá)與組織分化程度呈正相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Dukes分期呈負(fù)相關(guān)。提示PTEN基因不僅與大腸癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，而且其表達(dá)水平與大腸癌的生物學(xué)行為具有明顯相關(guān)性，參與大腸癌惡化演變、浸潤和轉(zhuǎn)移過程。

總之，PTEN基因異常改變參與大腸癌的發(fā)生與發(fā)展過程，其表達(dá)水平與大腸癌的生物學(xué)行為具有明顯相關(guān)性，參與大腸癌惡化演變、浸潤和轉(zhuǎn)移過程，有望成為大腸癌基因診斷和治療的新靶點(diǎn)。深入探討PTEN基因在大腸癌中的作用機(jī)制及其與其他抑癌基因相互性，對闡明和阻斷大腸癌浸潤和轉(zhuǎn)移的形成具有重要價值。

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（收稿日期：2013-07-08）