RP—HPLC法測定酚酞片中酚酞的含量

[摘要] 目的 建立RP-HPLC法測定酚酞片的含量。 方法 采用 Agilent C18色譜柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），柱溫為25℃，以甲醇-0.05 mol/L NH4H2PO4（用磷酸調(diào)pH至3.31）（70：30）為流動相，流速為1 mL/min，檢測波長為275 nm。 結(jié)果 酚酞在（19.968～139.776） μg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r = 0.9999，n = 5），測得平均回收率為100.87%，RSD = 0.88% （n = 9）。 結(jié)論 該方法穩(wěn)定可靠，重現(xiàn)性好，可有效控制酚酞片的質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞] RP-HPLC；酚酞片；含量測定

[中圖分類號] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）23-0081-02

酚酞片為刺激性瀉藥，口服后在腸內(nèi)堿性環(huán)境中形成可溶性鈉鹽，刺激結(jié)腸而產(chǎn)生導(dǎo)瀉作用，作用溫和，服藥后4～8 h可排除軟便[1]。止瀉藥及鎮(zhèn)吐藥，用于治療習(xí)慣性頑固性便秘。2010年版《中國藥典》[2]采用UV-Vis分光光度法對酚酞原料和其片劑測定含量。本文參閱相關(guān)文獻(xiàn)[3-8]采用RP-HPLC法測定酚酞片的含量，與UV-Vis分光光度法測得結(jié)果一致，RP-HPLC法亦可準(zhǔn)確測定出酚酞片中酚酞的含量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（沃特斯Waters 2695），二極管陣列檢測器（DAD 檢測器）；BS 110S（d=0.1mg）、AB135-S（d=0.01 mg）、電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；酚酞對照品（批號：100091-199601，含量為100.0%）；酚酞片（批號：1202731、120302、120103）；所用試劑均符合色譜條件要求。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：沃特斯Waters C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）， 柱溫：25℃；流動相：甲醇-0.05 mol/L NH4H2PO4（用磷酸調(diào)pH至3.31）（70：30）；流速：1 mL/min；檢測波長：275 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取酚酞對照品適量，用乙醇作溶劑，配置成濃度為0.5 mg/mL的對照品儲備液；精密量取儲備液適量，用流動相定量稀釋成0.05 mg/mL的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取供試品適量，加乙醇溶解后，用流動相定量稀釋成0.05 mg/mL的供試品溶液。

2.2.3 空白樣品溶液 按處方比例稱取輔料適量，按供試品溶液制備方法，制備成與供試品溶液相當(dāng)?shù)目瞻兹芤骸?/p>

分別吸取2.2.1、2.2.2與2.2.3項(xiàng)下溶液按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測。記錄色譜圖，酚酞的保留時間約為1.9 min，理論板數(shù)為3123，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度>1.5，在空白樣品溶液色圖譜中，酚酞峰位置上無峰出現(xiàn)，表明輔料無干擾。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密量取上述對照品儲備液1.0、2.0、3.0、5.0、7.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.22 μm濾膜濾過后備用。取上述不同濃度對照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別注入色譜儀，記錄色譜圖與峰面積。峰面積分別為171375、333980、501665、828292、1161787。以對照品濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制線性方程，回歸方程為A = 8264.82C + 5304.57（r =0.999 9）。結(jié)果表明，酚酞在（19.968～139.776）μg/mL的濃度范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

取對照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積依次為411039、411522、411646、410551、410676，RSD為0.12%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（批號：120103），按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別于0、4、7、13、24 h進(jìn)樣，記錄色譜圖與峰面積，峰面積分別為414224、411818、414028、413951、414033，RSD為0.24%，表明酚酞溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品細(xì)粉適量（批號：120103）（約相當(dāng)于酚酞50 mg）9份，分別用乙醇溶解稀釋至濃度為0.5 mg/mL供試品儲備液；精密稱取酚酞對照品25.67 mg，用乙醇作溶劑，配置成濃度為0.5 mg/mL的對照品儲備液；精密量取供試品儲備液5 mL 9份，分別置9個100 mL容量瓶中，再精密量取對照品儲備液3.0、5.0、7.0 mL各三份加入上述容量瓶中，混勻后用流動相稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.22 μm濾膜濾過。按2.1項(xiàng)下色譜條件，按低、中、高濃度分別進(jìn)樣。依據(jù)酚酞峰面積，考察本方法的準(zhǔn)確度，見表1。

2.7 樣品測定

分別吸取對照品溶液和供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。依據(jù)對照品和供試品溶液的酚酞峰面積，按外標(biāo)方法計(jì)算酚酞標(biāo)示量的百分含量。見表2。

3 討論

3.1 測定波長的檢測

對酚酞對照品溶液在210～400 nm波長范圍內(nèi)用DAD檢測器進(jìn)行圖譜掃描，掃描所得的光譜圖結(jié)果：酚酞在229 nm和275 nm波長處有最大吸收，考慮到流動相在紫外短波段的吸收對測定組分的影響，因此選擇275 nm作為本次試驗(yàn)的測定波長。

3.2 流動相的選擇

3.3 溶劑的選擇

酚酞難溶于水，易溶于甲醇、乙醇，參考中國藥典[1]方法采用乙醇作溶劑能得到穩(wěn)定的溶液，故用乙醇溶解樣品，稀釋時用流動相作溶劑。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳燕紅，黃羽. 口服酚酞片預(yù)防化療中便秘臨床觀察[J]. 中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)，2010，12（5）：58.

[2] 國家藥典委員會. 中國藥典（二部）[S]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：882.

[3] 孫銀華. 酚酞片中熒光母素的HPLC法限量檢查[J]. 安徽醫(yī)藥，2012， 16（3）：312-313.

[4] 吳紅英. 高效液相色譜法測定酚酞片中酚酞含量的研究[J]. 山西醫(yī)藥雜質(zhì)，2010，39（2）：161-162.

[5] 王枚，曹霞. HPLC法測定酚酞片的含量探討[J]. 黑龍江醫(yī)藥，2009， 22（3）：260-261.

[6] 董艷. 高效液相色譜法測定酚酞栓的含量[J]. 安徽醫(yī)藥，2010，14（3）：299-300.

[7] 梁選革，伍國怡. 高效液相色譜法測定酚酞溶液與酚酞片中熒光母素含量[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，25（11）：1210-1211.

[8] 黃弈濱，黃諾嘉，楊文紅. HPLC法測定減肥類保健食品中非法添加酚酞的研究[J]. 齊魯藥事，2011，30（1）：12-14.

（收稿日期：2013-04-12）