高效液相色譜法對小麥粉檢測的探討

【摘要】介紹了一種國際上普遍使用的小麥粉檢測高效液相色譜法（HPLC），這是利用經(jīng)典的液相色譜法作為理論基礎，通過氣相色譜法的相關(guān)技術(shù)理念，用強大的壓力傳輸流動相，利用高效固定相及高靈敏度檢測器發(fā)展而成的現(xiàn)代液相色譜分析方法，在食品分析領域具有巨大的意義。

【關(guān)鍵詞】高效液相；色譜儀；吊白塊

近年來，國內(nèi)的糧食加工發(fā)展非常迅速，規(guī)模不斷擴大，產(chǎn)量也在提升，許多設備都能緊跟上時代發(fā)展的腳步。然而，因為發(fā)展的速度十分快，但其基礎又比較薄弱，導致許多地方發(fā)展差異很大。尤其是一些檢測的手段還停留在舊的時期，這就經(jīng)常產(chǎn)生許多質(zhì)量問題。一是近幾年調(diào)查發(fā)現(xiàn)部分地區(qū)過量使用農(nóng)藥造成農(nóng)殘超標嚴重、部分地區(qū)糧食重金屬超過衛(wèi)生標準、田間真菌繁殖造成真菌毒素如嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、黃曲霉毒素等重度超標，已危及到人畜安全。二是小麥粉中大量使用過氧化苯甲酰、添加禁用的溴酸鉀，大米違規(guī)染色、增香、礦物油拋光，以次充好，用吊白塊漂白面粉、饅頭、面條、米粉以及粉條等，引起人們的極大擔憂。

吊白塊又稱雕白粉，化學名稱為次硫酸氫鈉甲醛或甲醛合次硫酸氫鈉，為半透明白色結(jié)晶或小塊，易溶于水。高溫下具有極強的還原性，有漂白作用。遇酸即分解，120℃下分解產(chǎn)生甲醛、二氧化硫和硫化氫等有毒氣體。吊白塊水溶液在60℃以上就開始分解出有害物質(zhì)。醫(yī)學專家指出，人食用含“吊白塊”食品后可引起過敏、腸道刺激等不良反應，嚴重者可產(chǎn)生中毒，腎臟、肝臟受損等疾病。已發(fā)現(xiàn)存在吊白塊的食品主要有面粉、腐竹、米粉、豆腐、粉條、銀耳、白糖、罐頭、水產(chǎn)品等，這類產(chǎn)品往往在加入吊自塊后會呈現(xiàn)出很好看的外觀效果。高效液相色譜法（HPLC）是上個世紀中期形成的一種分離的技術(shù)方式。這是利用經(jīng)典的液相色譜法作為理論基礎，通過氣相色譜法的相關(guān)技術(shù)理念，用強大的壓力傳輸流動相，利用高效固定相及高靈敏度檢測器發(fā)展而成的現(xiàn)代液相色譜分析方法?，F(xiàn)代HPLC采用了小口徑柱（約1～3ram）和極細小的高效色譜填料（粒徑<5Ixm），用高壓輸液泵使溶劑以高流速（1～10cm/s）通過色譜柱，分離速度比經(jīng)典柱色譜法快100～1000倍，分離效率已接近毛細管柱氣相色譜法。因此，HPLC具有高壓、高速、高效、高靈敏度四大特點。HPLC與GC比較，即使仍然要考慮如何延長使用的時間，可是許多相關(guān)專家都覺得在眾多分析領域中HPLC比GC更加實用。HPLC可以探討在熱穩(wěn)定或是揮發(fā)影響之后化合物，而進行分析的時候就一定要通過它的衍生物。因為HPLC具備很多的優(yōu)點，分辨率很高，又十分靈敏，速度非常快，色譜柱還能夠循環(huán)再利用，因此被運用在現(xiàn)代社會諸如醫(yī)學研究的許多領域之中。小麥粉中吊自塊定性檢驗方法，其特點是檢驗設備簡單，檢驗時間較短，靈敏度高，利用高效液相色譜儀進行檢測過程中的幾個使用問題：

一、色譜分離試驗常見的問題

如果因為不小心，沒有能夠及時的補充流動相，致使溶劑瓶里面的流動相被泵完全吸完，就會使HPLC系統(tǒng)因此而不再繼續(xù)工作。這樣的事件會影響到色譜柱嗎？所有的流動相會被泵完全吸收，一點都沒有留下嗎？色譜柱是不是不能用了？其實，被吸干了流動相，也不意味著色譜柱就此壞了。就算是在泵中有了空氣的介入，泵也會把空氣排到色譜柱之中。由于泵傳送的是液體，而不是氣體。因此與之前的事件相比，更容易發(fā)生因為忘記蓋上色譜柱的蓋子而產(chǎn)生的事端。而且，要想色譜柱完全干涸也不是一件容易的事情，一般都只是兩段的局部地方出現(xiàn)了干涸，因為完全干涸需要很長時間。就算是真的發(fā)生了完全干涸的現(xiàn)象，也不是無法挽回?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面：已脫氣的溶劑應該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以lmL/min的流速）沖一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢復到正常狀態(tài)。

二、預防液相泵的故障的措施

想要讓泵的所有工作性能保持在最佳狀態(tài)，一定要定期進行清潔的工作，務必讓溶劑與試劑保證高質(zhì)量，還要對流動相做過濾與脫氣的處理，以下是幾個防止意外的具體措施：

1、用高質(zhì)量試劑和HPLC級溶劑；

2、過濾流動相和溶劑；

3、脫氣；

4、每天開始使用時放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液；

5、不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中；

處于良好操作狀態(tài)的泵，應該能使色譜圖上的基線平穩(wěn)；保留時間的重復性好。在等度洗脫時壓力波動小于2%。梯度洗脫時壓力變化應是緩慢和平穩(wěn)的。

液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

三、柱壓過高的解決辦法

許多問題都不是出在柱子上面，原因的可能性很多，根據(jù)下面的步驟可以進行檢查：

l、拆去保護柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；

2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。

3、將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動性）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；

4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。

通常情況下，只要在保護柱與進樣器中連接一個過濾器就可以解決嚴厲過大的問題，高效的液相色譜法只需樣品可以形成溶液，不需要去顧慮樣品是否會揮發(fā)。流動相的選擇性非常大，種類也是錯綜復雜，所以能夠分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。跟試驗樣品的處理方式融合，HPLC具備很好的分辨率，也十分靈敏，因此可以讓分離與一起測定在性能上差不多的物質(zhì)變成現(xiàn)實，可以將復雜的相體中一些很小的成分分離出來。如今，固定相又得到了很大的發(fā)展，漸漸發(fā)展出了可以在完全保證生化物質(zhì)的活性的條件下進行分離。因為運用了高壓的輸液泵，跟經(jīng)典的液相色譜相比，探索的時間可以減少許多。如果輸液的壓力提升，其流動相也會隨之提升速度，做好一個樣品往往僅需短短的幾分鐘或是幾十分鐘。所以，高效液相色譜技術(shù)在食品分析領域具有巨大的現(xiàn)實意義。

參考文獻

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