膠體金法和ELISA法聯(lián)合檢測手足口病腸道病毒71型

【摘 要】目的：探討膠體金法和ELISA法聯(lián)合檢測手足口病腸道病毒71型IgM 抗體。方法：膠體金法和ELISA法聯(lián)合檢測EV71 型病毒并對221例結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：膠體金法和ELISA法檢測EV71 型病毒IgM 抗體無顯著差異（P>0.05）。結(jié)論：膠體金法和ELISA法聯(lián)合檢測EV71 型病毒既能保證快速檢測，又能提高準(zhǔn)確性。

【關(guān)鍵詞】膠體金法；ELISA法；腸道病毒71型

【中圖分類號】R440 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004—7484（2013）10—0793—02

手足口?。℉FMD）是一種由多種腸道病毒感染引起的兒童常見的傳染性疾病，傳染性強(qiáng)，在世界范圍內(nèi)包括我國多省市都出現(xiàn)過多次暴發(fā)與流行。鑒于我國目前手足口病發(fā)病的嚴(yán)峻形勢，2008年5月HFMD被列入法定丙類傳染病，要求各級衛(wèi)生部門做到早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早隔離、早治療。

引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種，其中以柯薩奇病毒A16型（CAl6）和腸道病毒71型（EV71）最為常見。與其他腸道病毒引起的手足口病相比，由EV71型感染引起的疾病發(fā)生重癥比例較大，病死率較高，且最易導(dǎo)致流行。國內(nèi)的數(shù)次暴發(fā)流行經(jīng)衛(wèi)生部證實(shí)均為EV7l引起的[1]。我院每年收治手足口病患兒數(shù)百例。為貫徹落實(shí)省政府要求的“四早”措施，建立手足口病流行動(dòng)態(tài)監(jiān)測與應(yīng)急性檢測方法具有非常重要的意義。對EV71的早期診斷、早期治療成為治愈該病的關(guān)鍵。我科同時(shí)采用膠體金法和ELISA法檢測EV71型病毒IgM抗體，結(jié)合兩者優(yōu)勢，能夠快速、準(zhǔn)確的檢測EV71型病毒。

1 材料與方法

1.1 一般資料

患者為我院兒科2012年3月至2013年3月收治的疑似HFMD患者，男132例，女89例，年齡4月～12歲。

1.2 試劑與方法

試劑由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)：膠體金法（國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2011第3401197號，京藥監(jiān)械生產(chǎn)許20040097號）；ELISA法（國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2010第3400526號，京藥監(jiān)械生產(chǎn)許20040097號）。

標(biāo)本為患者靜脈血2mL，肝素鈉抗凝。當(dāng)日標(biāo)本采用膠體金法進(jìn)行快速檢測，檢測完標(biāo)本保存，第二日再采用ELISA法集中批量檢測，操作均按試劑盒要求嚴(yán)格進(jìn)行檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Spss 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果

同時(shí)采用膠體金法和ELISA法檢測EV71型病毒IgM抗體，膠體金法陽性率為27.15%（60/221），ELISA法陽性率28.05%（62/221），共同陽性標(biāo)本60例，總符合率96.79% ，Kappa值為0.92。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P>0.05，兩種方法結(jié)果無顯著性差異。

3 討論

1957年新西蘭首次報(bào)導(dǎo)手足口病后，世界大部分地區(qū)如美國、澳大利亞、意大利、法國等均有手足口病的流行報(bào)導(dǎo)[2]。目前手足口病的的流行在亞太地區(qū)呈上升趨勢，我國自1981年在上海首次發(fā)現(xiàn)本病，以后北京、河北、山東等十幾個(gè)?。ㄊ校┚斜┌l(fā)流行的報(bào)導(dǎo)[3]。經(jīng)衛(wèi)生部證實(shí)均為EV7l引起的。

EV71感染患兒主要臨床表現(xiàn)以發(fā)熱和手、足、口腔和臀部等部位出現(xiàn)皮疹為主，部分病例可無發(fā)熱。絕大多數(shù)患者預(yù)后良好。但病毒可以侵犯呼吸系統(tǒng)、中樞系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等引起病毒性腦炎、病毒性腦脊髓膜炎、心肌炎、肺水腫、肺出血、弛緩性麻痹等癥狀，出現(xiàn)臨床預(yù)后較嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)綜合征及心肺功能衰竭綜合征，個(gè)別危重患兒可因多種原因?qū)е滤劳?。EV71型手足口病是一類嚴(yán)重危害兒童健康的疾病，因此建立EV71快速、準(zhǔn)確的檢測通道尤為重要。

病毒培養(yǎng)是EV71的檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，但是費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，對人員操作及設(shè)備要求高，不宜于基層醫(yī)院開展。目前實(shí)驗(yàn)室開展的EV71檢測方法有PCR、ELASA法和膠體金法3種。PCR法雖然檢出率高，特異性強(qiáng)，但對實(shí)驗(yàn)條件、人員、設(shè)備要求高，操作繁瑣，且仍然存在時(shí)間長、速度慢等缺點(diǎn)，而臨床病例多為散發(fā)急診發(fā)燒患兒，早診斷、早治療對挽救重癥患兒的生命極其重要。我院地處市中心，門診量大，就診患兒多，既要保證檢測結(jié)果快速，又要確保結(jié)果的準(zhǔn)確性，結(jié)合我科設(shè)備及人員上的優(yōu)勢，于是采用了膠體金法和ELISA法檢測EV71型IgM抗體。利用膠體金法操作最為簡便、快速的特點(diǎn)進(jìn)行初步診斷，再結(jié)合ELISA法靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)進(jìn)行確證。結(jié)合兩者優(yōu)勢，達(dá)到快速、準(zhǔn)確的檢測EV71型病毒的目的。

膠體金法檢測EV71型病毒利用免疫層析技術(shù)檢測EV71-IgM抗體，優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，30分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，可單份檢測、便于保存、不需特殊設(shè)備，肉眼可以直接觀察結(jié)果，非常適合門/急診病人的檢測，較好地滿足基層防控一線需求。缺點(diǎn)是需要較高濃度的標(biāo)記物，靈敏度受限制，可能造成假陰性。

ELISA法檢測EV71型采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理檢測EV71-IgM抗體。優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，漏檢度低，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，可進(jìn)行定量和半定量測定，可以在酶免疫分析儀上作批量檢測。缺點(diǎn)是存在假陽性率，檢測時(shí)間需要2小時(shí)左右，操作復(fù)雜，步驟多。受加樣、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、洗滌徹底性等諸多因素的影響，不適用于急診及現(xiàn)場的篩查。

綜上所述，同時(shí)采用膠體金法和ELISA法聯(lián)合檢測腸道病毒71型，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果無顯著性差異。所以采取這兩種方法的聯(lián)合檢測，可有效的避免單一檢測方法的缺點(diǎn)，既能縮短了診斷時(shí)間，減少了患兒等待時(shí)間，又能得到初步確診結(jié)果，避免漏診，提高確診率。符合我院門診量大，急診病人多的實(shí)際情況，為HFMD患兒的及時(shí)治療提供幫助。

參考文獻(xiàn)：

[1] 徐之良 手足口病研究進(jìn)展 臨床內(nèi)科雜志 2009，26：509-510.

[2] 李忠，張華寧，裴耀文，等 不同分子生物學(xué)方法檢測手足口病標(biāo)本的應(yīng)用研究[J] 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床 2009，4（6）：268-269.

[3] 歐新華，張如勝，葉文，等 長沙市2010年手足口病EV71型VP1區(qū)基因序列分析[J] 實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué) 2011，18（3）：420-424.