強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血Treg/Th17相關(guān)細(xì)胞因子檢測及其意義

【摘 要】目的：通過觀察強(qiáng)直性脊柱炎（AS）患者外周血Treg、Th17相關(guān)細(xì)胞因子的變化，探討淋巴細(xì)胞亞群Treg和Th17細(xì)胞在AS發(fā)病機(jī)制中的作用及其與AS臨床特征的相關(guān)性。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測42例患者和19例健康對照者外周血血清中IL-10、TGF-β、IL-17及IL-23水平。結(jié)果：AS組外周血中細(xì)胞因子IL-17、IL-23水平明顯高于健康對照組（P<0.05），但TGF-β、IL-10升高不明顯（P>0.05）。AS患者血清各細(xì)胞因子與疾病活動度（BASDAI）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、紅細(xì)胞沉降率（ESR）無相關(guān)性。結(jié)論：AS患者外周血中存在Treg/Th17失衡，Treg/Th17失衡可能參與了AS的發(fā)生發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】脊柱炎；強(qiáng)直性；Treg；Th17；細(xì)胞因子

【中圖分類號】R 593.23 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004—7484（2013）10—0136—02

強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一種慢性進(jìn)行性自身免疫病，目前，發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，多認(rèn)為是在遺傳背景的基礎(chǔ)上，免疫、微生物等因素參與的結(jié)果。近年來，機(jī)體免疫功能的異常對該病的發(fā)病作用已經(jīng)得到了肯定，T細(xì)胞的免疫功能異常更是得到了廣泛的關(guān)注[1]。Th17細(xì)胞是近年發(fā)現(xiàn)的一種新的Th細(xì)胞亞群，以分泌IL-17而得名，能介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells）是一種介導(dǎo)特異性免疫抑制的調(diào)控性T細(xì)胞，Treg細(xì)胞可以分泌抑制性的細(xì)胞因子IL-10與TGF-β來發(fā)揮作用，影響其分化的細(xì)胞因子有TGF-β和IL-2[2]。為探索Th17與Treg相關(guān)細(xì)胞因子在AS發(fā)病機(jī)制中的作用，本研究通過ELISA法檢測活動期、穩(wěn)定期AS患者及健康對照者外周血血清中Th17相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-23與Treg相關(guān)細(xì)胞因子IL-10、TGF-β水平，并將其與臨床及實驗室指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)分析。

1材料與方法

1.1 臨床資料 隨機(jī)選取2012年2月至2013年5月在泉州市正骨醫(yī)院風(fēng)濕科住院的AS患者43例。診斷均符合1984年修訂的AS紐約標(biāo)準(zhǔn)[3]。其中男30例，女13例；年齡15～59（29±8.2）歲；平均病程5.6年。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠或哺乳期婦女；合并其他結(jié)締組織病者；合并心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾??；精神病患者；以前接受過抗TNF-α藥物治療；正處于急慢性感染期間；惡性腫瘤患者。將患者根據(jù)Bath強(qiáng)直性脊柱炎活動性指標(biāo)（BASDAI）[4]分為（BASDAI平均分?jǐn)?shù)≤4）穩(wěn)定組20例、（BASDAI平均分?jǐn)?shù)≥5）活動組22例。19例健康志愿者為正常對照組，男15例，女4例；年齡16～50（27.3±6.1）歲。

1.2 試劑與儀器 人細(xì)胞因子IL-10、TGF-β、IL-17、IL-23酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒均購自美國RD公司。光吸收酶標(biāo)儀（SunriseTM，瑞士TECAN公司）。

1.3 檢測方法 所有患者及健康志愿者均于早晨8～9點間采集外周靜脈血5ml于EDTA抗凝管中，3000r/10min離心后收集血清凍存于-80℃?zhèn)溆谩Ｃ嘎?lián)免疫反應(yīng)均采用雙抗體夾心法，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析，資料符合正態(tài)分布，采用兩組獨(dú)立樣本t檢驗，兩變量之間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 一般情況和生化指標(biāo)比較，見表1。

2.2 AS患者Treg和Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平 AS組血清IL-17、IL-23的含量與對照組相比增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；AS組活動期病人血清IL-17、IL-23的含量與對照組、AS組穩(wěn)定期相比均增加明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而AS組穩(wěn)定期病人血清IL-17、IL-23的含量與對照組相比未見明顯增加。AS患者血清IL-10、TGF-β含量與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

2.3 AS患者Th17/Treg細(xì)胞因子與疾病活動度（BASDAI）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、紅細(xì)胞沉降率（ESR）的相關(guān)性分析 AS患者血清中IL-10、TGF-β、IL-17、IL-23中幾種細(xì)胞因子的含量與BASDAI、ESR、CRP均無相關(guān)性。

2.4 三組血清中細(xì)胞因子相關(guān)性分析 AS患者血清中IL-17與IL-23，IL-17與TGF-β均有相關(guān)性（r=0.55，P<0.01；r=-0.43，P<0.01），見表3。

3 討論

目前AS的發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，T細(xì)胞的免疫功能異常對該病的發(fā)病作用得到了廣泛的關(guān)注。Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞作為輔助性T細(xì)胞中的重要組成部分，對機(jī)體的免疫功能起著重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，AS患者外周血IL-17、IL-23與對照組比較明顯增加，尤其是活動期患者尤為顯著，而Treg細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子并無明顯增加，提示在AS患者體內(nèi)可能存在著Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的失衡，而Th17細(xì)胞在數(shù)量或功能上占優(yōu)勢，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂，引起或加速了疾病的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程。Th17細(xì)胞具有IL-23依賴性和能產(chǎn)生IL-17等特性。IL-23是Th17重要的存活因子，活化之后能促進(jìn)炎癥因子IL-17和IL-6的產(chǎn)生。同時，IL-23是一種促炎性細(xì)胞因子，由樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌，與其他T細(xì)胞存活因子不同，IL-23僅在炎癥刺激時分泌，提示Th17細(xì)胞長期存活依賴于機(jī)體慢性炎癥的刺激[5]。研究表明，IL-23可以促進(jìn)AS患者的外周血單核細(xì)胞分泌IL-17[6]。本研究證實，AS患者血清中IL-23含量高于健康對照組，并且與IL-17含量呈正相關(guān)，說明IL-23/Th17炎癥軸可能是AS發(fā)病的一個重要組成部分。但是，本研究結(jié)果中也出現(xiàn)，AS患者細(xì)胞因子的改變與BASDAI、ESR、CRP無相關(guān)性，分析可能與研究樣本量不足有關(guān)。IL-17具有強(qiáng)大的致炎性，可以引起促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，導(dǎo)致炎性細(xì)胞的浸潤和組織損害。AS的發(fā)病過程有如下特點：持續(xù)性炎癥、炎癥高度活動和低度活動相交替[7]。本實驗結(jié)果顯示，AS組活動期病人血清IL-17含量較AS組穩(wěn)定期病人和健康對照組明顯升高。而AS組穩(wěn)定期病人血清IL-17含量與健康對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異，與文獻(xiàn)報道相符[8]。IL-23、IL-17的增加說明在外周系統(tǒng)中AS患者的Th17細(xì)胞處于優(yōu)勢狀態(tài)。與Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的普遍升高不同的是，Treg細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子IL-10、TGF-β并沒有明顯升高，AS組與健康對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示AS患者體內(nèi)的Treg細(xì)胞在數(shù)量和功能上與Th17細(xì)胞相比并沒有相應(yīng)的提升[9]。以上這些結(jié)果都證明，AS患者隨著病情進(jìn)展，其外周血中出現(xiàn)Th17與Treg細(xì)胞功能的失衡，Th17細(xì)胞是導(dǎo)致該病的重要致病因素，因此研究AS患者外周血中的Th17與Treg細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子對進(jìn)一步了解AS疾病的發(fā)病機(jī)制有十分重要的意義，同時也為AS的治療和療效判斷提供理論依據(jù)。

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作者簡介：

許秀秀（1983-），女，福建泉州人，講師，E-mail：93852465@qq.com

項目來源：

泉州市優(yōu)秀人才培養(yǎng)專項經(jīng)費(fèi)資助項目（編號09A02）