十八味訶子利尿丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

【摘 要】目的：建立十八味訶子利尿丸質(zhì)量控制方法。方法：采用TLC法同時鑒別制劑中紅花、山礬葉、小檗皮；采用HPLC方法測定制劑中沒食子酸的含量。色譜柱：Agilent-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）。甲醇-水-磷酸（10：90：0.01）為流動相。流速為1.0ml·min-1，檢測波長273nm，柱溫：30℃.結(jié)果：沒食子酸在0.412 -2.06μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9998，平均回收率為99.8%，RSD為0.5%（n=5）.結(jié)論：該方法靈敏、準(zhǔn)確、分離效果好，可用于該制劑的質(zhì)量評價。

【關(guān)鍵詞】TLC； 沒食子酸；十八味訶子利尿丸；HPLC

【中圖分類號】R927.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004—7484（2013）10—0121—02

十八味訶子利尿丸為我州柴達(dá)木高科技藥業(yè)有限公司的制劑產(chǎn)品，由訶子、紅花、豆蔻、、山礬葉、紫草茸、余甘子、小檗皮等十八味藥制成，具有益腎固精，利尿。臨床上用于腎病，腰腎疼痛，尿頻，小便混濁，糖尿病，遺精等癥。原標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥第一冊，其檢驗(yàn)項(xiàng)目為丸劑的常規(guī)項(xiàng)，為了進(jìn)一步控制制劑質(zhì)量，本文對該制的質(zhì)量控制方法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，建立了處方中紅花、山礬葉、小檗皮的薄層鑒別方法，同時采用HPLC法對訶子中沒食子酸的含量測定研究，取得了良好的效果。

1儀器與試藥

美國Agilent1260高效液相色譜儀，美國Agilent1260紫外檢測器，Agilent1260漢字色譜工作站，甲醇為色譜純，水為新制重蒸餾水，紅花對照藥材（中國生物制品檢定所，批號：120907-201010）；小檗皮對照藥材（中國生物制品檢定所，批號：121001-201003）；鹽酸小檗堿對照品（中國生物制品檢定所，批號：110731-200911）沒食子酸對照品（中國生物制品檢定所，批號：110831-200803），十八味訶子利尿丸（柴達(dá)木高科技藥業(yè)有限公司，批號：20130405，20121202，20111001）。

2方法與結(jié)果

2.1薄層色譜

2.1.1紅花的薄層鑒別【1】

取本品細(xì)粉2g，，研細(xì)，加甲醇15ml，加熱回流30分鐘，冷卻，濾過，濾液，濃縮至5ml，作為供試品溶液。另取紅花對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（15：3：2：1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品均無干擾。結(jié)果見圖1

1 2 3 4 5 6

1.陰性樣品 2-4.樣品 5-6.紅花對照品

圖1 紅花TCL色譜圖

2.1.2山礬葉的薄層鑒別【2】

取本品細(xì)粉2g，，研細(xì)，加甲醇15ml，加熱回流30分鐘，冷卻，濾過，濾液，濃縮至5ml，作為供試品溶液。另取山礬葉對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60-90℃）-甲酸乙酯-甲酸（5：5：1）上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。噴以5%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品均無干擾。結(jié)果見圖2

1 2 3 4 5 6 7

1-3.樣品 4-5.山礬葉對照藥材 6-7.陰性樣品

圖2 山礬葉TCL色譜圖

2.1.3小檗皮的薄層鑒別【3】

取本品細(xì)粉7.5g，加水30ml、鹽酸2ml，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液加氯仿振搖提取2次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。另取小檗皮對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性樣品均無干擾。結(jié)果見圖3

1 2 3 4 5 6 7 8

1.陰性樣品 2-4.樣品 5-6小檗皮對照藥材 7-8.小檗堿對照品

圖3小檗皮TCL色譜圖

2.2含量測定

2.2.1色譜條件[3]

色譜柱：Agilent-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）。流動相：甲醇-水-磷酸（10：90：0.01）為流動相。流速為1.0ml·min-1，檢測波長273nm，柱溫：30℃.理論板數(shù)按沒食子酸峰計(jì)算不得少于2500。

2.2.2線性關(guān)系考察[4]

2.2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品9.15mg（含C7H6O5為90.1%計(jì)），置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液，精密吸取1.0ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，為對照品溶液。

2.2.2.2 線性關(guān)系測定 精密吸取貯備液0.5，1，1.5，2.0，2.5ml置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定峰面積，以沒食子酸峰面積積分值（X）為橫坐標(biāo)，以進(jìn)樣量（μg）（Y）為縱坐標(biāo)，經(jīng)線性回歸，回歸方程為Y=2.05×106X+7.86×103，r=0.9998，在0.412-2.06μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.3 精密度試驗(yàn)

取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，沒食子酸峰面積均值為2524842.6，RSD為0.35%，精密度良好。

2.2.4重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同批樣品5份，按樣品含量測定方法測定含量為4.04mg·g-1，RSD為0.9%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批樣品溶液，按上述色譜條件，分別在放置0，2，4，6，8，10，12h后，依法測定沒食子酸峰面積均值為176321，RSD為1.4%，說明樣品溶液12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量112.4μg·ml-1的樣品5份，分別精密加入對照品溶液（41.2μg·ml-1）1ml，按樣品溶液制備方法，制備供試液，照樣品含量測定方法測定，結(jié)果見表1

2.2.7 樣品溶液制備

取本品適量，研細(xì)取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，用甲醇洗滌殘?jiān)c濾紙，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45um）濾過，取濾液，即得。

2.2.8 陰性對照溶液的制備

除訶子外，按處方比例稱取其他各藥材，按工藝制成不含訶子制劑，照供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液，即得。

2.2.9 專屬性考察

分別精密吸取對照品溶液，樣品溶液及陰性對照溶液各10μl注入色譜儀，記錄色譜圖，見圖4。

從圖1可見，陰性對照品溶液對測定無干擾。

2.2.10樣品測定

取3個批號樣品，按樣品溶液的制備方法制備，同法制備對照品溶液，分別進(jìn)樣10μl，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見表2。

訶子為方中君藥，主要含沒食子酸，故以沒食子酸為指標(biāo)成分進(jìn)行定量測定。

b）流動相的選擇

我們采用不同的流動相乙腈：水（13：87），乙腈：0.1%磷酸溶液（14：86），甲醇-水-磷酸（10：90：0.01），結(jié)果表明采用流動相甲醇-水-磷酸（10：90：0.01）的色譜圖基線較穩(wěn)。

c）提取溶劑的選擇

我們采用不同的提取溶劑水，甲醇，稀乙醇，結(jié)果表明采用甲醇的色譜圖雜質(zhì)峰比較少，分離度較好。

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