HPLC測定肉及肉制品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的前處理方法研究

【摘 要】目的：建立肉及肉制品中高效液相色譜測定苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的一種簡單可行前處理方法。方法：采用兩種不同沉淀劑除去肉及肉制品中的脂肪及蛋白質(zhì)后，用高效液相色譜法測定苯甲酸、山梨酸、糖精鈉。結(jié)果：1、采用金屬鹽作沉淀劑時(shí)，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.91%，1.14%，0.64%，方法回收率分別為98.1%～99.1%，98.5%～100.6%，98.9%～99.8%；2、采用生物堿試劑作沉淀劑時(shí)，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.00%，1.48%，0.31%，方法回收率分別為88.2%～91.4%，88.7%～93.8%，89.1%～94.6%。結(jié)論：方法1是一種簡單及結(jié)果準(zhǔn)確的前處理方法。

【關(guān)鍵詞】苯甲酸；山梨酸；糖精鈉；高效液相色譜

【中圖分類號】R155 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004—7484（2013）10—0105—01

肉及肉制品中的脂肪和蛋 質(zhì)對苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的測定極為不 利，如果樣品前處理不好，會污染色譜柱，嚴(yán)重時(shí)會造成色譜柱阻塞，使色譜柱徹底不能使用。這類樣品處理的關(guān)鍵在于找到一種沉淀劑既能除出脂肪和蛋白質(zhì)，又能得到準(zhǔn)確的測量結(jié)果。GB/T5009.28-2003《食品中糖精鈉的測定》第一法高效液相色譜法，僅規(guī)定了汽水、果汁類和配制酒類樣品的前處理方法，而對肉及肉制品樣品沒有前處理方法。為測定肉及肉制品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉含量，我們分別采用金屬鹽和生物堿試劑來沉淀樣品中的脂肪和蛋白質(zhì)，測定結(jié)果滿意，尋找出一種簡單可行的前處理方法。

1 材料與方法

1.1儀器和試劑

日本島津SPD-20A（紫外檢測器，自動進(jìn)樣器）；色譜柱DIKMA C18（4.6mm×250mm 5um）；苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00mg/mL，GBW（E）100006，中國計(jì)量科學(xué)研究院）；山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00mg/mL，GBW（E）100007， 中國計(jì)量科學(xué)研究院）；糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00mg/mL，GBW（E）100008，中國計(jì)量科學(xué)研究院）；0.02mol/L乙酸

銨溶液（經(jīng)0.45um濾膜過濾，成都金山化學(xué)試劑有限公司），甲醇（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），乙酸鋅溶液（稱取21.9g乙酸鋅，加3mL乙酸，加水溶解至100mL，重慶北碚化學(xué)試劑廠）亞鐵氰化鉀溶液（稱10.6g加水至100mL，成都市化學(xué)試劑廠）；10%硫酸；10%鎢酸鈉溶液（廣東省臺山化工廠），超純水（沒注明的試劑均為AR）。

1.2色譜條件

流動相：甲醇︰0.02mol/L乙酸銨（3︰97）；流量：1.0mL/min；檢測波長230nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量20uL。

1.3樣品處理

1.3.1 稱取5.0g左右粉碎均勻的樣品，放入50mL離心管中，加30mL水，旋渦振蕩搖勻，超聲提取30min，于8000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)入另一50mL離心管中，加入乙酸鋅溶液，亞鐵氰化鉀溶液各2mL，振蕩搖勻后，定容至50mL，再于8000r/min離心5min，取上清液經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾后上機(jī)檢測。

1.3.2稱取5.0g左右粉碎均勻的樣品，放入50mL離心管中，加30mL水，旋渦振蕩搖勻，超聲提取30min，于8000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)入另一50mL離心管中，加入10%硫酸溶液，10%鎢酸鈉溶液各1mL，振蕩搖勻后，定容至50mL，再于8000r/min離心5min，取上清液經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾后上機(jī)檢測。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

配制苯甲酸、山梨酸、糖精鈉混合物標(biāo)準(zhǔn)溶液50ug/mL，自動進(jìn)樣體積4，8，12，16，20uL，

以不同濃度及相應(yīng)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍及方法的最低檢出濃度

在本實(shí)驗(yàn)的條件下，對苯甲酸、山梨酸、糖精鈉混合物標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，在10～50ug/mL時(shí)有很好的線性關(guān)系，回歸方程：苯甲酸：Y=60252.5X+（﹣895.866），r=0.99997；

山梨酸：Y=40556.6X+4839.48，r=0.99998；糖精鈉：Y=102762X+（﹣6897.13），r=0.99997。稱取5.0g樣品處理后，定容至50mL，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉最低檢出濃度均為1.0mg/kg。

2.2 精密度試驗(yàn)

取30ug/mL標(biāo)樣10.0mL分別用以上兩種方法處理，測定6次，結(jié)果見表1。

2.3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

2.3.1 回收率測定 取不含苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的肉，粉碎后分別加入0.1，0.5，2.0mg標(biāo)準(zhǔn)物，再分別用以上兩種方法處理，測定其回收率，結(jié)果見表2。

2.3.2測定結(jié)果的比較 取不含苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的肉，粉碎后取5.0g分別加入1.0mg標(biāo)準(zhǔn)，分別用以上兩種方法處理樣品，測定6次，與理論標(biāo)準(zhǔn)值0.02mg/mL比較，結(jié)果見表3，以t0.05（5）=2.57表示。

3 討論

肉及肉制品樣品的處理既要完全除去脂肪和蛋白質(zhì)，又要不影響檢測結(jié)果，關(guān)鍵在于找到一種較為理想的沉淀劑。我們分別采用金屬鹽及生物堿試劑沉淀樣品中的脂肪和蛋白質(zhì)，從實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來看，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均為0.9999以上。最低檢出濃度苯甲酸、山梨酸、糖精鈉均為1.0mg/kg。在同樣色譜條件下，用方法1金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)精密度結(jié)果，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.91%，1.14%，0.64%，方法回收率分別為98.1%～99.1%，98.5%～100.6%，98.9%～99.8%。用方法2生物堿沉淀蛋白質(zhì)精密度結(jié)果，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.00%，1.48%，0.31%，方法回收率分別為88.2%～91.4%，88.7%～93.8%，89.1%～94.6%。2種方法的精密度均符合測定要求，與理論標(biāo)準(zhǔn)值0.020mg/mL的t檢驗(yàn)比較（信度95%），方法1的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉結(jié)果tt0.05（5）=2.57，與理論值存在顯著性差異，即采用方法2后，引起顯著的系統(tǒng)誤差。由以上驗(yàn)證結(jié)果可見，方法1滿足檢測要求，樣品處理簡單、快速及結(jié)果準(zhǔn)確，適用于肉及肉制品樣品前處理。

綜上所述，在HPLC測定肉及肉制品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉時(shí)，使用金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)，即亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液較為理想。

參考文獻(xiàn)：

[1] GB/T5009.28—2003 食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法（理化部分）

[2] 王竹天 楊大進(jìn) 食品中化學(xué)污染物及有害因素監(jiān)測技術(shù)手冊 202—204

作者簡介：

李冀斌，女，1968.12 貴州 職稱：高級工程師 學(xué)歷：本科 研究方向：理化檢驗(yàn) 工作單位：黔南州疾病預(yù)防控制中心。