鹽酸戊乙奎醚對肢體缺血再灌注損傷大鼠肝組織自噬的影響

【摘 要】目的：觀察鹽酸戊乙奎醚對肢體缺血再灌注損傷大鼠肝組織自噬的影響。方法：采用大鼠肢體缺血再灌注損傷模型，將雄性SD大鼠60只，隨機分為3組（n=20）：假手術(shù)組（S組），缺血再灌注組（IR組），鹽酸戊乙奎醚組（IPHC組）。各組再分為再灌注4h，測定各組血清中LDH、CK活性；熒光顯微鏡下觀察肝臟組織自噬小體。結(jié)果：IR組4h血清LDH、CK活性較S、IPHC組明顯升高（P< 0.05）；IR組熒光顯微鏡下自噬小體較S、IPHC組明顯增加。結(jié)論：肢體缺血再灌注損傷可致大鼠肝組織自噬水平增加。

【關(guān)鍵詞】鹽酸戊乙奎醚；肢體缺血再灌注；自噬；肝

【中圖分類號】R614 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004—7484（2013）10—0011—01

肢體缺血再灌注損傷是臨床經(jīng)常發(fā)生的現(xiàn)象，嚴重的損傷可以導致遠隔臟器的功能障礙或衰竭[1]。有研究表明[2]，缺血再灌注可誘發(fā)細胞自噬，以心、腦等方面研究較多，而與肝臟自噬相關(guān)的研究較少。本研究觀察鹽酸戊乙奎醚對肢體缺血再灌注大鼠小腸組織自噬的影響。

1 材料與方法

1.1 動物分組與模型制備：健康成年雄性SD大鼠60只，體重220-250g，隨機分為3組，假手術(shù)組（S組），缺血再灌注組（IR組），鹽酸戊乙奎醚組（IPHC組），每亞組大鼠20只。

1.2 肢體缺血再灌注損傷模型的建立及動物分組處理：術(shù)前禁食不禁水，大鼠在2%戊巴比妥（30mg/kg）淺麻醉下固定于試驗臺，常規(guī)消毒后，切開皮膚、皮下，暴露股血管神經(jīng)束，分離股動脈，IR組、IPHC組動脈夾夾閉股動脈；再用市售橡皮筋（直徑2.5cm）環(huán)扎大鼠雙下肢近心端3h，再灌注4h。S組暴露股動脈后在其下方放一絲線，不阻斷血流。

1.3 標本采集及指標測定：于再灌注4h后采集下腔靜脈血后即刻放血，處死大鼠，同時收集下腔靜脈血，取血清，測定LDH、CK活性；取肝臟組織，用4%甲醛固定后石蠟包埋，切片，熒光染色，熒光顯微鏡下觀察肝臟組織的自噬情況。

1.4 統(tǒng)計學方法：采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計量資料以均數(shù)±標準差（ ±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1 3組大鼠血清中LDH、CK的變化：與S組相比，IR組血清LDH、CK活性明顯升高（P<0.05）；IPHC組血清LDH、CK活性稍升高，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2 熒光顯微鏡下3組大鼠肝臟組織形態(tài)學變化：S組：單位視野下可見少量的自噬體；IR組：可見大量散在的點狀自噬體；IPHC組：單位視野下可見少量的自噬體。見圖1。

3 討論

有研究顯示，肢體缺血再灌注損傷可引起遠隔臟器（心，肝，肺等）的損傷，肝功能障礙可使乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）等釋放入血，引起肝臟組織進一步的損傷和功能障礙，LDH、CK漏出量可以間接反映肝臟細胞的損傷情況。本實驗結(jié)果表明，與S組、IPHC組相比，IR組血清LDH、CK活性水平明顯升高。表明本實驗建立缺血再灌注損傷模型是成功的。

自噬是細胞內(nèi)物質(zhì)成分利用溶酶體被降解的過程。哺乳動物自噬一般分為以下3種形式：大自噬，小自噬和分子伴侶介導的自噬[3]。其中大自噬是哺乳動物中最普遍的形式，本文研究的自噬也是該種自噬。鹽酸戊乙奎醚注射液（長托寧）是新型抗膽堿藥，具有選擇性 M1、M3和N1、N2受體拮抗作用，對中樞和外周均有很強的抗膽堿作用，而對M2受體無明顯作用，出于維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的目的，正常情況下細胞自噬的基礎水平保持在一個較低的狀態(tài)，但在某些狀況下會快速上調(diào)。本研究表明，肢體缺血再灌注損傷可誘發(fā)自噬，而鹽酸戊乙奎醚可抑制其自噬水平的上調(diào)。機制可能和長托寧可解除小血管痙攣，降低外周血管阻力，改善微循環(huán)和心功能，能提高細胞對缺血缺氧的耐受性有關(guān)，其具體機制仍需進一步深入探討。

參考文獻：

[1] Zhang Y， Leng YF， Xue X，et al. Effects of penehyclidine hydrochloride in small intestinal damage caused by limb ischemia-reperfusion. World J Gastroenterol. 2011，17（2）：254-9.

[2] Wei C， Li H， Han L，et al. Activation of autophagy in ischemic postconditioning contributes to cardioprotective effects against ischemia/reperfusion injury in rat hearts. J Cardiovasc Pharmacol. 2013，61（5）：416-22.

[3] 韓繼媛，曹鋒生， 王一鏜，等. 長托寧的臨床應用[J].中華急診醫(yī)學雜志， 2005，14 （2）：173-174.