胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)及與胃癌預(yù)后關(guān)系分析

【摘 要】目的：利用免疫組化方法檢測(cè)胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的敏感指標(biāo)白細(xì)胞分化抗原（cluster of differentiation antigens，CD）CD44和細(xì)胞角蛋白（cytokeratin，CK） CK18，分析常規(guī)病理未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶的胃癌淋巴結(jié)是否存在胃癌微轉(zhuǎn)移及其與預(yù)后的關(guān)系。方法：運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)CD44和CK18在胃癌患者淋巴結(jié)中的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床相關(guān)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：26.7%患者（10.7%淋巴結(jié)）CD44陽(yáng)性， 23.3%患者（9.9%淋巴結(jié)）CK18陽(yáng)性；進(jìn)展期胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的發(fā)生率明顯高于早期胃癌（P﹤0.05）；存在淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的患者五年生存率明顯低于無(wú)淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的患者（P﹤0.05）。結(jié)論：利用CD44和CK18因子監(jiān)測(cè)胃癌微轉(zhuǎn)移敏感度高，可以作為臨床診斷治療的參考因素，胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移是影響胃癌預(yù)后的重要因素。

【關(guān)鍵詞】胃癌；微轉(zhuǎn)移；CD44 CK18

【中圖分類號(hào)】R735.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004—7484（2013）10—0009—02

胃癌的發(fā)病率和病死率均居我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤前列，胃癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響胃癌患者預(yù)后的主要因素，胃癌的微轉(zhuǎn)移則與術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[1]， 因此，早期準(zhǔn)確的監(jiān)測(cè)到胃癌微轉(zhuǎn)移的發(fā)生，使患者及時(shí)合理地接受綜合治療，對(duì)于夠降低胃癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，提高患者的生存率有重要意義。

1 材料與方法

1.1一般資料 收集新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院和新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院病理科2003年1月至2008年1月因胃癌而行胃癌根治術(shù)，常規(guī)病理檢查淋巴結(jié)陰性，30例胃癌患者的100枚組織石蠟塊共242枚淋巴結(jié)。早期胃癌9例，進(jìn)展期胃癌21例，所有淋巴結(jié)HE染色均沒(méi)有發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞。所選取的30例病人均獲滿意隨訪結(jié)果，隨訪期限5～10年，其中5例病人死于術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)。

1.2主要方法 采用免疫組織化學(xué)染色，小鼠抗人CD44（HCAM）單克隆抗體、小鼠抗人CK18單克隆抗體試劑盒購(gòu)自上海原葉科技有限公司。免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，試劑公司提供之陽(yáng)性片為陽(yáng)性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液代替一抗為陰性對(duì)照。用200倍和400倍鏡觀察各標(biāo)本染色情況。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 免疫組化染色陽(yáng)性反應(yīng)為黃—棕色顆粒且明顯高于背景染色。陽(yáng)性染色位于細(xì)胞漿，呈彌漫性胞漿著色，但有一個(gè)強(qiáng)的邊緣染色帶。所以陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為淋巴結(jié)中有一個(gè)或多個(gè)呈陽(yáng)性染色，具有上皮形態(tài)，且形態(tài)不典型的癌細(xì)胞。兩人雙盲法觀察切片，在低倍鏡下（10×10）觀察選擇有代表性的區(qū)域然后再高倍鏡下（10×40）隨機(jī)觀測(cè)10個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞較多的視野。微轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞在淋巴結(jié)中有兩種存在方式：一種以一小簇癌細(xì)胞形式存在；另一種以單個(gè)癌細(xì)胞形式存在。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS13.0軟件包進(jìn)行，兩種指標(biāo)間的比較用配對(duì)資料的χ2檢驗(yàn)，微轉(zhuǎn)移與臨床病理參數(shù)間關(guān)系用χ2檢驗(yàn)。用Kaplan-Meier法制累計(jì)生存率曲線；Log-rank檢驗(yàn)檢測(cè)差異之間的顯著性意義；多變量生存分析用Cox模型進(jìn)行；P<0.05為具有顯著性意義的標(biāo)準(zhǔn)。

2結(jié)果

2.1 CD44和CK18在各樣本中表達(dá)情況 結(jié)果見(jiàn)表1，8例病人（26.7%）共26枚（10.7%）淋巴結(jié)CD44陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)；7例病人（23.3%）共24枚（9.9%）淋巴結(jié)CK18陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)。

2.2早期胃癌和進(jìn)展期胃癌淋巴結(jié)發(fā)生微轉(zhuǎn)移情況對(duì)比 CD44監(jiān)測(cè)結(jié)果：早期胃癌（30%），共1例（12.5%）患者，2枚（7.7%）淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)隱匿腫瘤細(xì)胞存在；進(jìn)展期胃癌（70%），共7例（87.5%）患者，24枚（92.3%）淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)有隱匿腫瘤細(xì)胞存在。CK18監(jiān)測(cè)結(jié)果：早期胃癌（30%），共1例（14.2%）患者，2枚（8.33%）淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移。進(jìn)展期胃癌（70%），共6例（85.7%）患者，22枚（91.8%）淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)有隱匿腫瘤細(xì)胞存在。進(jìn)展期胃癌淋巴結(jié)發(fā)生微轉(zhuǎn)移的發(fā)生幾率高于早期胃癌（P<0.05）。

2.3 CD44與CK18陽(yáng)性率與臨床幾種病理因素關(guān)系

本研究提示胃癌微轉(zhuǎn)移的發(fā)生與病人的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、Borrmann分型無(wú)明顯關(guān)系（P>0.05）。CD44與CK18陽(yáng)性率與臨床幾種病理因素關(guān)系如表2。

2.4多變量生存分析

Cox多變量生存分析回歸模型顯示在胃癌的各種臨床病理因素中性別、年齡、部位、腫瘤大小、Borrmann分型與預(yù)后無(wú)關(guān)，而淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移是影響胃癌預(yù)后的獨(dú)立因子（P﹤0.05）。見(jiàn)表3。

3討論

1993年國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）在腫瘤TNM分期補(bǔ)充材料中指出：當(dāng)微小腫瘤轉(zhuǎn)移灶生長(zhǎng)到直徑在1-2mm時(shí)稱為微轉(zhuǎn)移。常規(guī)病理HE染色對(duì)于這些微轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞常常難以發(fā)現(xiàn)，免疫組化法和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法是目前認(rèn)為靈敏度最高最常用的檢測(cè)方法。Meachara[2]等采用免疫組化法檢測(cè)34例早期胃癌的420枚淋巴結(jié)，結(jié)果檢出23.5%（8/34）的患者存在微轉(zhuǎn)移灶，可見(jiàn)免疫組化檢測(cè)胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移具有其優(yōu)勢(shì)。

CD44是一種由單一基因編碼的具有高度特異的多功能跨膜蛋白，屬于白細(xì)胞黏附分子，分為標(biāo)準(zhǔn)型（CD44S）和變異型（CD44V）。CD44V主要表達(dá)于癌細(xì)胞，加強(qiáng)癌細(xì)胞的黏附和運(yùn)動(dòng)能力，與轉(zhuǎn)移潛能相關(guān)。有學(xué)者[6]采用免疫組化方法研究CD44與胃癌患者的預(yù)后，結(jié)果表明CD44S表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性術(shù)后死亡率明顯大于CD44S弱陽(yáng)性的胃癌患者，說(shuō)明CD44S表達(dá)與預(yù)后有關(guān)。夏建國(guó)等[7]采用免疫組化二步法對(duì)100例進(jìn)展期胃癌標(biāo)本進(jìn)行標(biāo)記，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD44V6的表達(dá)隨胃癌浸潤(rùn)深度、周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而升高，認(rèn)為CD44V6在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中起著重要作用，可用于早期預(yù)測(cè)胃癌的轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后。很多研究[3-5]采用不同方法證實(shí)CD44能夠反映胃癌微轉(zhuǎn)移的發(fā)生，因此CD44被認(rèn)為是檢測(cè)胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的一個(gè)經(jīng)典指標(biāo)。CK18是Ⅰ型中間絲蛋白的一種，是單層上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞的主要成分。CK18應(yīng)用于多種消化道腫瘤微轉(zhuǎn)移灶的檢測(cè)中，而應(yīng)用于胃癌微轉(zhuǎn)移的報(bào)道較多，是目前檢測(cè)胃癌微轉(zhuǎn)移常用的靈敏指標(biāo)之一。

胃癌患者的預(yù)后與多種臨床因素相關(guān)，比如腫瘤的分期及分化程度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，外科手術(shù)方式選擇，術(shù)后化療等。在多種因素的影響下，如何認(rèn)識(shí)胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與預(yù)后的關(guān)系是一個(gè)復(fù)雜的問(wèn)題，眾多文獻(xiàn)研究沒(méi)有統(tǒng)一的觀點(diǎn)，不同學(xué)者也有自己不同的觀點(diǎn)。本研究采用CD44和CK18兩個(gè)胃癌微轉(zhuǎn)移常用的靈敏指標(biāo)闡明了胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移病人的五年生存率明顯低于無(wú)淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移胃癌病人（P﹤0.05），客觀的說(shuō)明胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的發(fā)生增加了患者復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)性，降低了患者的生存率。隨著免疫學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)將更加準(zhǔn)確，有利于對(duì)患者的預(yù)后進(jìn)行準(zhǔn)確科學(xué)的判斷。

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