香菇多糖對雙歧桿菌和大腸桿菌體外生長的影響

【摘要】 目的：探討香菇多糖體外對雙歧桿菌和大腸桿菌的生長影響。方法：2個麥?zhǔn)蠞舛鹊碾p歧桿菌和大腸桿菌分別接種于PYG培養(yǎng)基中，12 h和24 h分別檢測細(xì)菌數(shù)量，氣相色譜法測培養(yǎng)24 h后的細(xì)菌培養(yǎng)液中乙酸含量。結(jié)果：香菇多糖體外對大腸桿菌存在抑制生長的作用，對雙歧桿菌有促進(jìn)生長的作用，大腸桿菌對雙歧桿菌的體外生長無抑制作用，雙歧桿菌、雙歧桿菌+香菇多糖都能夠體外抑制大腸桿菌生長；在香菇多糖作用下，雙歧桿菌代謝的乙酸含量與其數(shù)量呈正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論：香菇多糖與雙歧桿菌聯(lián)用可以更好的對大腸桿菌發(fā)揮生物拮抗作用；主要機(jī)制是因為香菇多糖可以作為雙歧桿菌的益生元，雙歧桿菌增殖后乙酸代謝也隨之增加，從而抑制大腸桿菌的生長。

【關(guān)鍵詞】 香菇多糖； 雙歧桿菌； 乙酸； 生物拮抗

香菇[Lentinus edodes （Berk.） Sing]屬于擔(dān)子菌綱傘菌目側(cè)耳科香菇屬，是世界著名的食用兼藥用菌之一，香菇中含有一種抗氧化、抗疲勞、夠刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)（使機(jī)體的免疫功能得到恢復(fù)和提高）等功能的香菇多糖[1-2]，臨床經(jīng)驗證實：注射用香菇多糖胸腔內(nèi)注入對惡性胸水有較好療效且不良反應(yīng)少[3]。在調(diào)控腸道微生態(tài)方面，香菇多糖對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸道微生態(tài)失調(diào)也具有調(diào)整作用[4]。生理狀態(tài)下，正常成人腸道內(nèi)含有近500種細(xì)菌，而雙歧桿菌和大腸桿菌分別是腸道中的優(yōu)勢厭氧菌和需氧菌，雙歧桿菌是人體健康的重要標(biāo)志之一，具有生物學(xué)屏障、控制內(nèi)毒素血癥、預(yù)防和治療細(xì)菌性腹瀉、抗腫瘤、營養(yǎng)、延緩衰老等作用[5]，本研究利用體外細(xì)菌培養(yǎng)條件單一的優(yōu)勢，研究香菇多糖對雙歧桿菌和大腸桿菌體外生長的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗儀器 UV2550型分光光度計（日本 Shimadzu 公司），YQX-Ⅱ型厭氧培養(yǎng)箱（上海新苗醫(yī)療器有限公司），HZQ-X100型恒溫振蕩培養(yǎng)箱（江蘇省金壇市漢康電子有限公司），SW-CJ-2A2D型超凈工作臺（青島丹佳凈化設(shè)備有限公司），GC-14C型氣相色譜儀（日本島津公司），渦旋振蕩器（康寧管理有限公司）。

1.1.2 實驗菌株 取本院健康體檢青年糞便1 g，無菌條件下加入9 ml生理鹽水，于振蕩器上振蕩5 min，使糞便均質(zhì)化，繼續(xù)用無菌生理鹽水釋至10-9倍，凃板至EMB培養(yǎng)基和BBL培養(yǎng)基上，篩選單菌落。

1.1.3 藥物與試劑 黨參多糖（武漢百興康生物工程有限公司），PYG培養(yǎng)基（上海工碩生物技術(shù)有限公司），雙歧桿菌液體培養(yǎng)基（0233），大腸埃希菌液體培養(yǎng)基（LB），腸桿菌選擇性固體培養(yǎng)基（EMB），腸桿菌選擇性固體培養(yǎng)基（BBL）。

1.2 實驗方法

1.2.1 菌液制備 雙歧桿菌和大腸桿菌分別于0233和LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，采用分光光度法將菌液濃度調(diào)至2個麥?zhǔn)蠞舛龋譃?組，分別是大腸桿菌對照組、雙歧桿菌對照組、大腸桿菌+香菇多糖組、雙歧桿菌+香菇多糖組、大腸桿菌+雙歧桿菌組、大腸桿菌+香菇多糖+雙歧桿菌組。隨后取制備好的菌液分別接種于10 ml PYG培養(yǎng)基中，香菇多糖用量為0.2 mg/管，對照組則加以等量無菌生理鹽水。所有細(xì)菌于厭氧培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。

1.2.3 細(xì)菌培養(yǎng)液中乙酸含量檢測

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

研究證明（Gustafssom，1984），如果按重量計算，人體攜帶的微生物總重量約為1271 g，其中腸道占1000 g，由此可見，人體攜帶的微生物細(xì)胞主要在腸道[6]。益生菌（Probiotics）是一類對宿主有益的活性微生物，是定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能產(chǎn)生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益微生物的總稱。目前常見的益生菌藥品，例如：口服雙歧桿菌活菌制劑（麗珠腸樂），地衣芽孢桿菌膠囊（整腸生），口服蠟樣芽孢桿菌活菌片（促菌生），口服酪酸梭菌活菌片（米雅BM），雙歧三聯(lián)活菌膠囊（培菲康），口服雙歧桿菌、乳酸桿菌、嗜熱鏈球菌三聯(lián)活菌片（金雙歧），口服雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌、蠟樣芽孢桿菌四聯(lián)活菌片（威特四聯(lián)活菌片）等，也都是常用于胃腸道的疾病的調(diào)節(jié)治療。本實驗將雙歧桿菌和大腸桿菌在體外混合培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)雙歧桿菌可以體外抑制大腸桿菌的生長，而大腸桿菌不會影響雙歧桿菌的生長，證實體外環(huán)境下可以較好研究益生菌-雙歧桿菌與大腸桿菌的相互作用。

現(xiàn)臨床應(yīng)用的益生菌制劑幾乎均為口服制劑，益生菌需經(jīng)胃（酸性大）、十二指腸（堿性大，消化酶含量高）才能到達(dá)結(jié)腸，因此，益生菌的定植問題也是當(dāng)今益生菌發(fā)展的一個重點。同益生菌相比，益生元就不存在這些問題，益生元也更容易被人們所接受。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識到多糖具有極其重要的生物功能。多糖與免疫功能的調(diào)節(jié)、細(xì)胞與細(xì)胞的識別、細(xì)胞間物質(zhì)的轉(zhuǎn)運、癌癥的診斷與治療等都有著密切的關(guān)系，近年來又發(fā)現(xiàn)多糖的糖鏈能控制細(xì)胞的分裂和分化、調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和衰老[7]。隨著科技的發(fā)展，越來越多的多糖發(fā)現(xiàn)具有益生元作用，例如黃芪多糖、黨參多糖、馬齒莧多糖、枸杞多糖等[8-11]，但是對于其機(jī)制還都不太清楚。本實驗證實在體外環(huán)境下，香菇多糖在24 h可以促進(jìn)益生菌雙歧桿菌的生長，而抑制大腸桿菌的生長，是一個非常好的益生元。

乙酸是雙歧桿菌等厭氧菌的代謝產(chǎn)物，能夠降低腸道pH及氧化還原電勢，不僅能夠抑制外籍菌及腸道潛在致病菌過度生長繁殖，而且對營養(yǎng)和維持黏膜防御屏障功能具有重要意義[12]。在培養(yǎng)24 h后，與大腸桿菌對照組比較，大腸桿菌+香菇多糖組的乙酸含量顯著降低可能是由于香菇多糖抑制了大腸桿菌的生長導(dǎo)致的；而24 h時，由于香菇多糖已經(jīng)促進(jìn)了雙歧桿菌的增殖，因此可以檢測出大量乙酸，同時降低了生長環(huán)境的pH值，使得大腸桿菌的生長受到抑制。通過本實驗，筆者認(rèn)為益生菌和益生元聯(lián)用對于調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡的效果更加明顯，香菇多糖在充當(dāng)微生態(tài)調(diào)節(jié)劑方面應(yīng)用前景廣闊。

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（收稿日期：2013-06-05） （本文編輯：歐麗）