豬偽狂犬病野毒抗體不同檢測(cè)單位的比對(duì)試驗(yàn)

摘要：在種豬群偽狂犬病野毒（gE）抗體監(jiān)測(cè)的第一階段，進(jìn)行了不同檢測(cè)單位的比對(duì)試驗(yàn)。對(duì)來(lái)自71個(gè)個(gè)體間隔1周的兩次血清樣本進(jìn)行檢測(cè)，2個(gè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)之間的gE抗體陽(yáng)性符合率分別為35.71%、45.45%，總體檢測(cè)符合率分別為87.32%、91.55%；2個(gè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)各自的gE抗體陽(yáng)性符合率分別為40.00%、75.00%，總體檢測(cè)符合率分別為87.32%、97.18%。表明在豬群進(jìn)行偽狂犬病野毒感染鑒定的初期，有必要對(duì)檢測(cè)單位進(jìn)行篩選。

關(guān)鍵詞：偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）；野毒抗體；對(duì)比試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：S828 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）24-6124-02

偽狂犬病是由偽狂犬病毒（Pseudorabies virus， PRV）引起的多種動(dòng)物共患傳染病，以發(fā)熱、奇癢（豬除外）及腦脊髓炎為主要癥狀[1]。豬感染偽狂犬病毒后主要表現(xiàn)為母豬流產(chǎn)、死胎等繁殖障礙[2]，哺乳仔豬尖叫、腹瀉和轉(zhuǎn)圈、大量發(fā)病死亡，保育豬神經(jīng)癥狀，育肥豬呼吸道癥狀、生長(zhǎng)發(fā)育緩慢。豬偽狂犬病對(duì)養(yǎng)豬生產(chǎn)的影響很大，給中國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)特別是集約化養(yǎng)豬造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。

國(guó)家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系疫病控制研究室“十二五”重點(diǎn)任務(wù)“偽狂犬病、豬瘟凈化與藍(lán)耳病綜合防控”中要求，在偽狂犬病凈化任務(wù)結(jié)束時(shí)，參與試驗(yàn)的種豬場(chǎng)（或生產(chǎn)線）應(yīng)全部為野毒gpI（gE）抗體陰性。根除和凈化措施分為普查、強(qiáng)化免疫控制、檢測(cè)淘汰、全群清群與引種、監(jiān)測(cè)認(rèn)證與維持等5個(gè)階段，在實(shí)施過(guò)程中，檢測(cè)結(jié)果將影響凈化的具體方案和實(shí)施細(xì)節(jié)。本研究在種豬群偽狂犬病野毒感染狀況監(jiān)測(cè)的第一階段，進(jìn)行了豬偽狂犬病野毒抗體不同檢測(cè)單位檢測(cè)結(jié)果的比對(duì)試驗(yàn)，現(xiàn)將試驗(yàn)情況及建議報(bào)告如下，以供養(yǎng)豬生產(chǎn)中豬群偽狂犬病等疾病檢測(cè)、凈化時(shí)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試劑

試驗(yàn)豬為湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)原種豬育種場(chǎng)基礎(chǔ)母豬520頭，種公豬19頭，自繁自養(yǎng)。gE基因缺失弱毒疫苗（K-61株自然缺失基因苗），德國(guó)柏林格茵格翰公司。后備豬在70日齡和配種前各免疫1次，種母豬每年普免3次，普免時(shí)避免在分娩前7 d內(nèi)接種，以減少接種應(yīng)激對(duì)分娩的影響，并在母豬分娩后補(bǔ)免；公豬采用集中普免的方式，每年免疫3次。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 血樣采集 用保定器套住種豬上顎，用20 mL一次性注射器前腔靜脈采血。母豬按群體數(shù)量10%的比例進(jìn)行采樣，種公豬進(jìn)行全群采樣。

1.2.2 樣品制備 取編好號(hào)的血樣離心管放入離心機(jī)，4 000 r/min離心2～5 min，將上層血清用吸管慢慢吸出，每個(gè)樣品分別放入2支離心管，加蓋編號(hào)登記，全部樣品隨機(jī)分為2個(gè)平行組。

1.2.3 樣品送檢 將2組平行樣品分別送至具備檢測(cè)與分析條件的2家專業(yè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)（以下分別簡(jiǎn)稱甲單位、乙單位），獨(dú)立檢測(cè)樣品中偽狂犬病野毒感染情況。

1.2.4 檢測(cè)方法 采用偽狂犬病野毒抗體檢測(cè)試劑盒（gE-ELISA試劑盒，IDEXX公司）進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.5 偽狂犬病gE抗體判定標(biāo)準(zhǔn) S/N≤0.60，判定為陽(yáng)性；0.600.70，判定為陰性。

2 結(jié)果與分析

由表1可知，甲單位gE抗體陽(yáng)性豬為12頭，陽(yáng)性率為16.90%（12/71），乙單位gE抗體陽(yáng)性豬為7頭，陽(yáng)性率為9.86%（7/71），兩單位的共同陽(yáng)性豬為5頭，陽(yáng)性符合率為35.71%（5/14）。兩單位的共同非陽(yáng)性豬為57頭，共同陽(yáng)性豬為5頭，總體符合率為87.32%（62/71）。

由表2可知，甲單位gE抗體陽(yáng)性豬為9頭，陽(yáng)性率為12.68%（9/71），乙單位gE抗體陽(yáng)性豬為7頭，陽(yáng)性率為9.86%（7/71），兩單位的共同陽(yáng)性豬為5頭，陽(yáng)性符合率為45.45%（5/11）。兩單位的共同非陽(yáng)性豬為60頭，共同陽(yáng)性豬為5頭，總體符合率為91.55%（65/71）。

由表3和表4可知，甲單位兩次gE抗體檢測(cè)中共同陽(yáng)性豬為6頭，共同非陽(yáng)性豬為56頭，兩次檢測(cè)陽(yáng)性符合率為40.00%（6/15），總體符合率為87.32%（62/71）。乙單位兩次gE抗體檢測(cè)中共同陽(yáng)性豬為6頭，共同非陽(yáng)性豬為63頭，兩次檢測(cè)陽(yáng)性符合率為75.00%（6/8），總體符合率為97.18%（69/71）。

3 小結(jié)與討論

1）用具有糖蛋白gE基因缺失背景的疫苗進(jìn)行豬偽狂犬病免疫，用gE-ELISA試劑盒能區(qū)分疫苗接種豬和野毒感染豬，且敏感性很高[4]。2個(gè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)之間，兩次檢出gE抗體陽(yáng)性樣本的共同符合率分別為35.71%、45.45%，顯示PRV gE抗體S/N值存在著偏差，但兩單位兩次檢測(cè)的總體符合率分別為87.32%和91.55%，說(shuō)明對(duì)群體野毒感染陽(yáng)性個(gè)體還是能夠確定檢出的。本試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，為得到豬群偽狂犬病野毒感染較確定的檢測(cè)結(jié)論，檢測(cè)樣本量不能低于10頭。

2）偽狂犬病的根除是通過(guò)使用基因標(biāo)志疫苗與相應(yīng)的鑒別診斷來(lái)進(jìn)行的，通過(guò)逐步隔離和淘汰自然感染豬，建立和擴(kuò)大健康豬群，從而達(dá)到根除偽狂犬病的目的。兩個(gè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)兩次檢測(cè)gE抗體陽(yáng)性結(jié)果各自的符合率分別為40.00%、75.00%，各自的總體檢測(cè)符合率分別為87.32%、97.18%。在進(jìn)行豬群偽狂犬病野毒感染鑒定時(shí)，有必要進(jìn)行檢測(cè)單位的篩選；同時(shí)，對(duì)可疑豬有必要進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)加以確認(rèn)。

3）本試驗(yàn)受檢豬群健康狀況相對(duì)良好，豬偽狂犬病野毒感染檢出率為9.86%～16.90%，且檢測(cè)出偽狂犬病野毒感染陽(yáng)性的豬只相對(duì)集中于2010年留種群，表明此階段留種群在疫苗的制備、運(yùn)輸以及免疫注射等操作過(guò)程中存在著操作失誤的可能。因此，也證明合理的免疫程序和規(guī)范的免疫操作可有效地阻止豬偽狂犬病野毒感染，有必要將該病納入常規(guī)免疫程序?qū)ωi群進(jìn)行免疫保護(hù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 殷 震，劉景華.動(dòng)物病毒學(xué)[M]. 第二版.北京：科學(xué)出版社，1997.

[2] 胡 杰，磨龍春，黃 夏，等.豬偽狂犬病gpI抗體鑒別ELISA方法在豬偽狂犬病控制與凈化中的效果分析[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，39（5）：678-680.

[3] 金升藻，陳煥春，熊 符.偽狂犬病基因缺失疫苗研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002，35（1）：89-93.

[4] 李春蕾，田召芳，柳 林，等.偽狂犬病檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2010，27（6）：64-66.