6—BA對大豆愈傷組織誘導影響的初步研究

摘要：以大豆（Glycine max）品種吉農(nóng)21的胚軸、子葉、子葉節(jié)、胚根為外植體，探討了不同濃度6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）對大豆愈傷組織誘導的影響。結(jié)果表明，對于大豆無菌苗不同組織部位的外植體，MS+1.0 mg/L IAA +1.0 mg/L 6-BA 均為最佳的愈傷組織誘導培養(yǎng)基。

關(guān)鍵詞：大豆（Glycine max）；吉農(nóng)21；6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）；愈傷組織

中圖分類號：Q813.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）16-3999-03

大豆（Glycine max）屬于蝶形花科大豆屬，別名黃豆，是古老的栽培作物之一，至今大約有四、五千年的種植歷史。我國不僅種植大豆歷史悠久，而且是栽培大豆的起源地，世界上其他國家的大豆大多是直接或間接從我國傳播出去的。大豆的組織培養(yǎng)研究始于20世紀60年代，但各種外植體的組織培養(yǎng)與再生植株都十分困難。直到80年代中后期，大豆的組織培養(yǎng)工作才有了突破性的進展，大豆的組織培養(yǎng)常用外植體包括真葉、下胚軸、子葉、子葉節(jié)、胚軸和胚等[1-9]。近年來，也有報道可以通過胚尖誘導形成再生植株[10-12]，但多數(shù)再生體系再生頻率低、重復性差，而愈傷組織再生體系與直接再生體系相比具有重復性好、出芽率高等特點。然而迄今為止，通過大豆愈傷組織途徑獲得再生植株的報道較少。本研究探討不同濃度的6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）對愈傷組織誘導的影響，篩選出愈傷組織誘導的最佳培養(yǎng)基，進而能建立一個高效的大豆愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)。

1 材料與方法

1.1 材料

大豆種子吉農(nóng)21由吉林農(nóng)業(yè)大學生物技術(shù)中心提供。

1.2 方法

1.2.1 種子的萌發(fā) 選取飽滿成熟的大豆吉農(nóng)21的種子，用體積分數(shù)為70%的乙醇消毒30 s，再用質(zhì)量分數(shù)為0.1%的升汞溶液消毒10 min，用無菌水沖洗3～5次后接種到MS基本培養(yǎng)基上，溫度（25±2） ℃，光照度2 000 lx條件下進行培養(yǎng)。

1.2.2 愈傷組織的誘導 以培養(yǎng)7 d后的無菌實生苗的胚軸、子葉、子葉節(jié)、胚根為外植體，分別接種于不同愈傷組織誘導的培養(yǎng)基中，放入黑暗條件下進行培養(yǎng)，20 d后統(tǒng)計其愈傷組織誘導情況。愈傷組織誘導培養(yǎng)基分別為A培養(yǎng)基：MS+ 1.0 mg/L IAA + 1.0 mg/L 6-BA；B培養(yǎng)基：MS+ 1.0 mg/L IAA + 2.0 mg/L 6-BA；C培養(yǎng)基：MS+ 1.0 mg/L IAA + 3.0 mg/L 6-BA。

2 結(jié)果與分析

2.1 大豆胚軸愈傷組織的誘導

取培養(yǎng)7 d后的無菌苗的胚軸為外植體，分別接種到A、B、C 3種培養(yǎng)基上，黑暗條件下培養(yǎng)20 d（表1）。從表1中可以看出，對于胚軸來說，A培養(yǎng)基的誘導效果最好，愈傷組織誘導率達到98.1%，并且形成的愈傷組織顏色呈淡黃色，比較致密，狀態(tài)良好（圖1），而其他兩種培養(yǎng)基上形成的愈傷組織褐化很多，可能是因為6-BA濃度過高引起的。

2.2 大豆子葉愈傷組織的誘導

取培養(yǎng)7 d后的無菌苗的子葉為外植體，分別接種到A、B、C 3種培養(yǎng)基上，黑暗條件下培養(yǎng)20 d（表2）。從表2中可以看出， 對于子葉來說，A培養(yǎng)基的誘導效果最好，愈傷組織誘導率可以達到100.0%，并且形成的愈傷組織顏色呈淡黃色，比較致密，狀態(tài)良好（圖2）。

2.3 大豆子葉節(jié)愈傷組織的誘導

取培養(yǎng)7 d后的無菌苗的子葉節(jié)為外植體，分別接種到A、B、C 3種培養(yǎng)基上，黑暗條件下培養(yǎng)20 d（表3）。從表3中可以看出來，對于子葉節(jié)來說，A培養(yǎng)基的誘導效果最好，愈傷組織誘導率可以達到97.4%，形成的愈傷組織顏色呈淡黃色，比較致密，狀態(tài)良好（圖3）。其他兩種培養(yǎng)基較A培養(yǎng)基形成的愈傷組織褐化增多，愈傷組織的生長受到阻礙。

2.4 大豆胚根愈傷組織的誘導

取培養(yǎng)7 d后的無菌苗的胚根為外植體，分別接種到A、B、C 3種培養(yǎng)基上，黑暗條件下培養(yǎng)20 d（表4）。從表4中可以看出，對于胚根來說，A培養(yǎng)基的誘導效果最好，愈傷組織誘導率可以達到68.2%，形成的愈傷組織顏色呈淡黃色，比較致密，狀態(tài)良好（圖4）。其他兩種培養(yǎng)基較A培養(yǎng)基形成的愈傷組織數(shù)目明顯減少，褐化嚴重，愈傷組織的生長受到嚴重阻礙，可能由于根部對于細胞分裂素濃度更為敏感所致，高濃度的細胞分裂素抑制了根部愈傷組織的形成。

3 小結(jié)與討論

在愈傷組織的誘導過程中，生長素和細胞分裂素的配合使用均能誘導4種外植體產(chǎn)生愈傷組織。不同的外植體對于激素的反應(yīng)水平不同，胚根對細胞分裂素的濃度變化更為敏感，子葉，子葉節(jié)和胚軸則不敏感，高濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑均能使外植體出現(xiàn)褐化。本研究以吉農(nóng)21的無菌苗不同部位為外植體，利用不同培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。結(jié)果表明，MS+1.0 mg/L IAA+1.0 mg/L 6-BA為最佳的愈傷組織誘導培養(yǎng)基，與李大瑋[13]的結(jié)論基本一致。

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