甲醛對小鼠造血功能影響的試驗(yàn)研究

摘要：為了探討甲醛對小鼠造血功能的影響，將昆明小鼠30只隨機(jī)分為5組，分別為低、中、高濃度甲醛組，鹽酸苯肼試驗(yàn)組和空白對照組，試驗(yàn)期間連續(xù)腹腔用藥，第二天起每天檢測紅細(xì)胞數(shù)量、白細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量以及網(wǎng)織紅細(xì)胞比例等參數(shù)的改變，試驗(yàn)第十天檢測后處死小鼠取肝臟和骨髓常規(guī)石蠟切片HE染色。結(jié)果表明，用藥第二天小鼠即出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，第八天時(shí)，與空白對照組相比高濃度組小鼠紅細(xì)胞數(shù)量降低了32.47%，血紅蛋白含量降低了44.14%，網(wǎng)織紅細(xì)胞比例高達(dá)22.86%；肝臟、骨髓切片可見較多破壞的紅細(xì)胞。甲醛對小鼠有致溶血作用，能嚴(yán)重影響小鼠的造血功能。

關(guān)鍵詞：小鼠；甲醛；鹽酸苯肼；造血功能

中圖分類號：TS201.6 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）16-3905-03

隨著人們對居室環(huán)境的重視程度越來越高，家居裝修也越來越受到重視，甲醛作為室內(nèi)裝飾材料中普遍存在的物質(zhì)，家居裝修材料中的甲醛含量超標(biāo)會嚴(yán)重危害人們的身體健康[1-6]。本試驗(yàn)以昆明小鼠為試驗(yàn)對象，采用低、中、高濃度甲醛進(jìn)行試驗(yàn)，研究了甲醛對小鼠造血功能的影響，以便為提高人們在日常生活中的防護(hù)能力和臨床診治相關(guān)的溶血性疾病提供一定的理論支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動物 試驗(yàn)動物采用出生后8周齡的昆明小鼠30只，體重25 g左右，由濰坊學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，雌雄不限，正常喂食。

1.1.2 藥品與試劑

主要藥品：甲醛、鹽酸苯肼，由上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供。

主要試劑：10 g/L煌焦油藍(lán)乙醇溶液、HiCN轉(zhuǎn)化液均按照常規(guī)方法配制；Hayem液、白細(xì)胞稀釋液、0.1 mol/L鹽酸、10 mg/mL甲醛、1 mg/mL鹽酸苯肼生理鹽水液現(xiàn)配現(xiàn)用；石蠟制片HE染色各種試劑均常規(guī)配制使用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 藥物注射 參考甲醛、鹽酸苯肼的毒理作用確定用量[7]，腹腔注射，低、中、高濃度組10 mg/mL甲醛用量分別為1、2、3 mL/kg體重，鹽酸苯肼每天注射5 mL/kg體重，首日加倍10 mL/kg，空白對照組注射生理鹽水，0.1 mL/只。

1.2.2 檢測方法 血常規(guī)檢測采用常規(guī)方法[8，9]，處理后次日開始每組每天隨機(jī)取1只斷尾采血1次。

紅細(xì)胞和白細(xì)胞采用改良Neubauer計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)采用Hayem稀釋液，白細(xì)胞稀釋液采用1%龍膽紫染色；血紅蛋白含量的測定使用HiCN轉(zhuǎn)化液，用TU-1800PC型紫外可見分光光度計(jì)測定吸光度；網(wǎng)織紅細(xì)胞比例的測定用10 g/L煌焦油藍(lán)乙醇溶液為染料，制成血涂片后在低倍鏡下選擇紅細(xì)胞分布均勻的部位于油鏡下計(jì)數(shù)1 000個(gè)紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)胞并換算為百分比[10]。

石蠟制片染色方法：處死小鼠后取小塊肝臟組織迅速固定于中性甲醛，常規(guī)脫水、浸蠟制片，HE染色后高倍鏡觀察；切斷小鼠股骨兩端使用注射器沖洗出骨髓，參照上法固定制片，HE染色觀察。

2 結(jié)果與分析

結(jié)果顯示，甲醛能促進(jìn)紅細(xì)胞溶解，小鼠表現(xiàn)典型的急性溶血性貧血癥狀，循環(huán)血中網(wǎng)織紅細(xì)胞明顯增多，骨髓片中紅細(xì)胞碎片增多（圖1），肝臟中央靜脈見大小不等的紅細(xì)胞，周圍白細(xì)胞浸潤明顯（圖2）。

鏡下可見紅細(xì)胞形態(tài)改變以及較多紅細(xì)胞碎片。中央靜脈內(nèi)可見大小不等的成熟紅細(xì)胞（粗↑），周圍的炎性細(xì)胞（細(xì)↑）增多。

試驗(yàn)小鼠各項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)也有較大變化，檢測結(jié)果見表1。用藥第二天小鼠即出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，在第八天時(shí)，與空白對照組相比，高濃度組小鼠紅細(xì)胞數(shù)量降低了32.47%。

血液中血紅蛋白的含量在一定程度上反映了紅細(xì)胞數(shù)量，表2中血紅蛋白含量的變化與表1中紅細(xì)胞數(shù)量變化趨勢相同，在第八天時(shí)，與空白對照組相比，高濃度組小鼠血紅蛋白含量降低了44.14%?？傮w上是隨甲醛劑量的增加而減少。

由表3可知，使用鹽酸苯肼或甲醛后白細(xì)胞的數(shù)量是明顯增加了，這可能是由于甲醛、鹽酸苯肼的毒理作用，注射后引發(fā)炎癥，導(dǎo)致組織發(fā)生一系列炎性反應(yīng)，表現(xiàn)為血液中的白細(xì)胞數(shù)目增多。

由表4可知，使用甲醛后隨注射劑量的增加和時(shí)間的推移，網(wǎng)織紅細(xì)胞的比例逐漸升高。在第八天時(shí)，高濃度組網(wǎng)織紅細(xì)胞比例高達(dá)22.86%，這是因?yàn)檠h(huán)血紅細(xì)胞數(shù)量減少、血紅蛋白含量降低時(shí)，機(jī)體的代償性反應(yīng)使骨髓中幼稚的紅細(xì)胞提前進(jìn)入血液循環(huán)，表現(xiàn)為血液中網(wǎng)織紅細(xì)胞比例增加[11]。

3 小結(jié)與討論

甲醛的用途非常廣泛，塑料、橡膠、造紙、紡織、制藥以及建筑材料和消毒、防腐過程中均要用到甲醛，各種人造板材中也含有甲醛，因此新裝修的房間總會有甲醛釋放，長期接觸低劑量甲醛可引起慢性呼吸道疾病、女性月經(jīng)紊亂等，也可使新生兒體質(zhì)降低、染色體異常，高濃度甲醛對神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、肝臟等都有毒害作用[12]。國際癌癥研究機(jī)構(gòu)IARC已經(jīng)于2004年將甲醛上升為第一類致癌物質(zhì)，有足夠的證據(jù)可以證明甲醛能引起人類的鼻咽癌、鼻腔癌和鼻竇癌，并能引發(fā)白血病。

試驗(yàn)表明，甲醛能使動物骨髓、肝臟等器官內(nèi)紅細(xì)胞破裂，紅細(xì)胞碎片增加，造成動物急性溶血性貧血，溶血的程度與注入的劑量呈正相關(guān)，但溶血程度較鹽酸苯肼弱。其原因是甲醛可破壞紅細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，促使紅細(xì)胞崩潰，造成溶血性貧血，因此外周血中紅細(xì)胞數(shù)量降低，血紅蛋白含量隨之減少，加快了未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)的速度，結(jié)果使血液中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量迅速增加。同時(shí)，中等濃度甲醛組小鼠在第七天、高濃度甲醛在第四天、第七天、第九天各有1只小鼠死亡，其他試驗(yàn)組小鼠也出現(xiàn)不同程度的腹部塌陷、變硬等癥狀，急性中毒作用明顯。

有相關(guān)調(diào)查資料顯示，室內(nèi)空氣污染已經(jīng)成為危害城鎮(zhèn)居民生命健康的一大“ 隱形殺手”，目前中國4%的疾病與居室污染有關(guān)，每年有11.1萬人死于室內(nèi)污染，而新裝修家庭中甲醛已成為主要的污染物[13，14]。本試驗(yàn)即基于此對比觀察研究甲醛對小鼠造血功能的影響，并初步觀察了造血器官骨髓及肝臟內(nèi)紅細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，以期提高人們在日常生活中的防護(hù)意識和能力，為臨床診治相關(guān)的疾病提供一定的試驗(yàn)支持。

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