幾種殺菌劑及其復(fù)配劑對(duì)草莓灰霉病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

摘要：在室內(nèi)培養(yǎng)條件下，采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定腐霉利等6種商品殺菌劑及其復(fù)配劑對(duì)草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers.）的抑制作用。結(jié)果表明，不同殺菌劑對(duì)草莓灰霉病菌均表現(xiàn)出明顯的抑制作用，0.01～10.00 mg/L的腐霉利、嘧霉胺、苯醚甲環(huán)唑、乙蒜·丁子香酚、嘧菌環(huán)胺和武夷菌素的抑菌率分別為6.81%～70.93%、5.59%～69.06%、6.09%～72.93%、10.37%～100.00%、9.00%～42.04%、17.62%～48.37%；EC50分別為3.704、4.837、2.266、0.075、22.771、55.277 mg/L。復(fù)配劑嘧菌環(huán)胺∶腐霉利1∶1有特別明顯的增效作用；嘧菌環(huán)胺∶腐霉利1∶2、乙蒜素∶苯醚甲環(huán)唑1∶2和2∶1、嘧霉胺∶苯醚甲環(huán)唑1∶2有明顯的增效作用；武夷菌素∶嘧霉胺1∶1和2∶1、乙蒜素∶苯醚甲環(huán)唑1∶1等復(fù)配劑略有增效作用。

關(guān)鍵詞：殺菌劑；復(fù)配；草莓灰霉病菌（灰葡萄孢）；毒力測(cè)定

中圖分類號(hào)：S482.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）14-3299-03

草莓灰霉病病原為灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.），是保護(hù)地草莓生產(chǎn)中的主要病害。草莓灰霉病常造成花及果實(shí)腐爛，影響產(chǎn)量與品質(zhì)，嚴(yán)重時(shí)減產(chǎn)可達(dá)60%以上，甚至絕收[1]。帶菌果實(shí)在貯運(yùn)、銷售和消費(fèi)期間繼續(xù)發(fā)病，嚴(yán)重影響果品的商品性。草莓灰霉病菌除為害草莓外，還侵染茄子、辣椒、黃瓜、番茄、西葫蘆、萵苣、葡萄等多種園藝作物，防治非常困難[2]。由于草莓種質(zhì)資源中缺少高抗草莓灰霉病的品種，生產(chǎn)上草莓灰霉病的防治以化學(xué)防治為主，輔以農(nóng)業(yè)技術(shù)防治、生物防治及生態(tài)防治。目前防治草莓灰霉病的常用化學(xué)藥劑有苯胺基嘧啶類的嘧霉胺（施佳樂(lè)）、二甲酰亞胺類的腐霉利（速克靈）、苯并咪唑類的多菌靈、苯醚甲環(huán)唑類的捷菌等[3]。但灰葡萄孢具有繁殖快、遺傳變異大和適應(yīng)力強(qiáng)等特點(diǎn)，極易產(chǎn)生抗藥性[4]，使常用殺菌劑防治效果大大降低[5]。本試驗(yàn)旨在明確草莓灰霉病菌對(duì)幾種商品殺菌劑的抗藥性，篩選高效防治草莓灰霉病菌的復(fù)配劑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株 草莓灰霉病菌（灰葡萄孢）GYBc-1菌株。采集貴州省貴陽(yáng)市花溪區(qū)草莓種植大棚中的病果，經(jīng)單孢分離、純化獲得[6]。

1.1.2 供試藥劑 35%腐霉利懸浮劑（簡(jiǎn)稱腐霉利，宜賓川安農(nóng)藥有限公司），400 g/L嘧霉胺懸浮劑（簡(jiǎn)稱嘧霉胺，德國(guó)拜耳作物科學(xué)公司），10%苯醚甲環(huán)唑（世高）水分散粒劑（簡(jiǎn)稱苯醚甲環(huán)唑，山東曹達(dá)化工有限公司），50%嘧菌環(huán)胺（瑞鎮(zhèn)）水分散粒劑（簡(jiǎn)稱嘧菌環(huán)胺，瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司），2%武夷菌素原藥（簡(jiǎn)稱武夷菌素，山東濰坊萬(wàn)勝生物農(nóng)藥有限公司），20%乙蒜·丁子香酚可濕性粉劑（簡(jiǎn)稱乙蒜·丁子香酚，江蘇省綠盾植保農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)有限公司），80%乙蒜素乳油（簡(jiǎn)稱乙蒜素，河南啄木鳥農(nóng)化公司），均為市售商品殺菌劑。

1.2 方法

1.2.1 6種殺菌劑毒力測(cè)定 將6種商品殺菌劑同培養(yǎng)基充分混勻，配制成0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00 mg/L系列濃度的含藥PDA培養(yǎng)基。用打孔器從在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)3 d的草莓灰霉病菌菌落邊緣取直徑5 mm的菌餅，菌絲面向下接種在含藥PDA培養(yǎng)基上，每皿一個(gè)菌餅，25 ℃倒置培養(yǎng)，每處理3個(gè)重復(fù)，以無(wú)藥平板作為對(duì)照。接種后5 d檢查菌絲生長(zhǎng)情況并用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算（相對(duì)）抑菌率。借助SPSS軟件，以藥劑濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)（x），抑菌率為縱坐標(biāo)（y），求得6種殺菌劑對(duì)草莓灰霉病菌的毒力回歸方程、EC50和相關(guān)系數(shù)[7]。

1.2.2 復(fù)配殺菌劑的聯(lián)合毒力測(cè)定及增效研究 結(jié)合商品殺菌劑的交互抗性，對(duì)商品殺菌劑進(jìn)行復(fù)配組合，配制終濃度為1.00、5.00 mg/L的含藥PDA培養(yǎng)基，以不加藥劑的PDA培養(yǎng)基作為對(duì)照，每處理3個(gè)重復(fù)。以腐霉利、嘧霉胺、苯醚甲環(huán)唑?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)藥劑，參照文獻(xiàn)[6-8]的方法，計(jì)算復(fù)配劑實(shí)際毒力指數(shù)（ATI）、理論毒力指數(shù)（TTI）和共毒系數(shù)（CTC），評(píng)價(jià)增效作用、確定最佳配比。

2 結(jié)果與分析

2.1 6種商品殺菌劑抑菌作用

腐霉利、嘧霉胺、苯醚甲環(huán)唑、乙蒜·丁子香酚、嘧菌環(huán)胺、武夷菌素6種殺菌劑在濃度為0.01～10.00 mg/L時(shí)，對(duì)灰葡萄孢的抑菌率分別為6.81%～70.93%、5.59%～69.06%、6.09%～72.93%、10.37%～100.00%、9.00%～42.04%、17.62%～48.37%（表1）。

2.2 6種商品殺菌劑毒力

6種殺菌劑對(duì)草莓灰霉病菌的毒力回歸方程、EC50和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。乙蒜·丁子香酚、苯醚甲環(huán)唑?qū)移咸焰叩囊种菩Ч茫珽C50分別為0.075、2.266 mg/L；其次是腐霉利、嘧霉胺，EC50分別為3.704、4.837 mg/L，武夷菌素的抑制效果最差，EC50高達(dá)55.277 mg/L。

2.3 復(fù)配殺菌劑的聯(lián)合毒力

不同組合、不同配比的復(fù)配殺菌劑對(duì)草莓灰霉病菌的抑制作用和毒力不同，具體情況見(jiàn)圖1、表3、表4。1.00 mg/L苯醚甲環(huán)唑∶腐霉利的抑菌效果比單劑好，抑菌率分別為67.48%、73.08%、74.21%；5.00 mg/L 2∶1時(shí)抑菌率為74.05%。5.00 mg/L乙蒜素∶苯醚甲環(huán)唑的抑菌效果比苯醚甲環(huán)唑單劑好，抑菌率分別為77.94%、74.16%、64.92%。嘧菌環(huán)胺∶腐霉利1∶1抑菌效果比單劑好，抑菌率分別為70.01%、73.14%；1.00 mg/L 2∶1復(fù)配抑菌率為71.67%。計(jì)算6種復(fù)配藥劑對(duì)草莓灰霉病菌的毒力回歸方程及EC50，嘧菌環(huán)胺∶腐霉利1∶1抑菌效果最好，其EC50為0.062 mg/L；草莓灰霉病菌對(duì)乙蒜素∶苯醚甲環(huán)唑1∶1、1∶2、2∶1敏感，EC50分別為0.875、0.065、0.833 mg/L；嘧霉胺∶苯醚甲環(huán)唑1∶ 2也表現(xiàn)較高的抑菌活性，EC50為1.927 mg/L。

復(fù)配劑的聯(lián)合毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5、表6、表7。嘧菌環(huán)胺∶腐霉利1∶1的增效作用最為顯著；復(fù)配劑嘧菌環(huán)胺∶腐霉利1∶2、乙蒜素∶苯醚甲環(huán)唑1∶2和2∶1、嘧霉胺∶苯醚甲環(huán)唑1∶2有明顯的增效作用；武夷菌素∶嘧霉胺1∶1和2∶1、嘧菌環(huán)胺∶腐霉利2∶1、乙蒜素∶苯醚甲環(huán)唑1∶1略有增效作用。嘧菌環(huán)胺與腐霉利按1∶1的比例復(fù)配抑制草莓灰霉病菌效果明顯好于單劑，嘧菌環(huán)胺與腐霉利1∶2、乙蒜素與苯醚甲環(huán)唑1∶1、1∶2和2∶1、嘧霉胺與苯醚甲環(huán)唑1∶2復(fù)配等抑制草莓灰霉病菌效果也好于單劑。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)測(cè)定了腐霉利、嘧霉胺、苯醚甲環(huán)唑、乙蒜·丁子香酚、嘧菌環(huán)胺和武夷菌素及部分復(fù)配劑對(duì)草莓灰霉病菌的抑制效果。結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑、乙蒜·丁子香酚對(duì)草莓灰霉病菌抑制效果較好。使用復(fù)配殺菌劑可以達(dá)到比殺菌劑單用更好的防治效果，減少病原菌產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)[9]。草莓灰霉病菌是一種非常容易產(chǎn)生抗藥性的病原菌，不同作用機(jī)理且無(wú)正交互抗性的藥劑復(fù)配有增效作用，為防止或減緩抗藥性的產(chǎn)生，不同殺菌機(jī)理的藥劑復(fù)配或交替使用對(duì)草莓灰霉病菌防治具有重要意義。嘧霉胺是一種內(nèi)吸性新型殺菌劑，屬苯胺基嘧啶類，結(jié)構(gòu)新穎，作用機(jī)理獨(dú)特，通過(guò)抑制病原菌侵染酶的產(chǎn)生，從而阻止病菌的侵染并殺死病菌，該藥與防治草莓灰霉病的主要?dú)⒕鷦o(wú)交互抗性。苯醚甲環(huán)唑是真菌甾醇合成抑制劑，廣譜、高效而和其他藥劑不易產(chǎn)生交互抗性，研究證明，苯醚甲環(huán)唑與嘧霉胺、腐霉利之間不存在交互抗性。二甲酸亞胺類殺菌劑腐霉利屬于多作用位點(diǎn)殺菌劑，嘧菌環(huán)胺對(duì)多種作物病原真菌和部分細(xì)菌有很強(qiáng)的抑殺作用，不同作用機(jī)制的腐霉利和嘧菌環(huán)胺可以復(fù)配。

根據(jù)殺菌劑的作用機(jī)理及交互抗性，設(shè)計(jì)不同組合的藥劑復(fù)配，結(jié)果表明，復(fù)配劑嘧菌環(huán)胺∶腐霉利1∶1、嘧菌環(huán)胺∶腐霉利1∶2、乙蒜素∶苯醚甲環(huán)唑1∶2、嘧霉胺∶苯醚甲環(huán)唑1∶2都有明顯的增效作用。嘧菌環(huán)胺與腐霉利1∶2、乙蒜素與苯醚甲環(huán)唑1∶1和2∶1、嘧霉胺與苯醚甲環(huán)唑1∶2復(fù)配及武夷菌素與嘧霉胺1∶1復(fù)配抑制草莓灰霉病菌效果也好于單劑。這些試驗(yàn)效果很好的復(fù)配劑及其復(fù)配比的選定，為草莓灰霉病菌田間防治的殺菌劑選用、復(fù)配或混用提供了理論依據(jù)。

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