景洪哥納香醇提物對(duì)兩株人腫瘤細(xì)胞體外細(xì)胞毒作用初探

摘要：目的：觀察景洪哥納香醇提物體外抗腫瘤活性。方法：通過(guò)改良MTT法，考察不同濃度的洪哥納香醇提物體外對(duì)人胃癌細(xì)胞MKN-28及人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的細(xì)胞毒作用。結(jié)果：100μg/mL景洪哥納香醇提物對(duì)MKN-28、SMMC-7721的細(xì)胞增殖抑制率可達(dá)95%以上。在一定的劑量范圍內(nèi)，洪哥納香醇提物對(duì)MKN-28的增殖抑制能力具有一定的劑量依賴性，而對(duì)SMMC-7721則不明顯。其IC50分別為3102μg/mL、1888μg/mL。結(jié)論：景洪哥納香醇提物體外對(duì)MKN-28、SMMC-7721具有顯著的抗腫瘤活性。

關(guān)鍵詞：醇提物、細(xì)胞毒、MKN-28、SMMC-7721

中圖分類號(hào)：R9694文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2013）02-0048-02

惡性腫瘤嚴(yán)重的威脅著人類生命和健康，其發(fā)病率和死亡率在世界許多國(guó)家和地區(qū)居首位。據(jù)WHO預(yù)測(cè)，到2020年全球腫瘤發(fā)病率將上升50%，癌癥病人將增加的近1500萬(wàn)，惡性腫瘤將成為21世紀(jì)危害人類健康的頭號(hào)殺手。目前已上市的抗腫瘤藥物缺乏細(xì)胞毒性特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，往往無(wú)選擇地殺傷正常細(xì)胞，特別是增生活躍的造血干細(xì)胞，正常細(xì)胞的損傷常導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥，影響治療效果和患者依從性。而近年來(lái)，從天然藥物中尋找高效低毒的抗腫瘤藥物成為研究熱點(diǎn)[1]。

景洪哥納香系蕃荔枝科哥納香屬植物，全世界約50種，分布于熱帶及亞熱帶地區(qū)[2]。我國(guó)產(chǎn)10種，分布于西南、華南、臺(tái)灣等省區(qū)。在民間主要用于清熱、殺蟲(chóng)、抗癌、抗瘧等[3]。筆者通過(guò)體外觀察景洪哥納香醇提物對(duì)兩株人腫瘤細(xì)胞株的抗增殖作用，初步判斷其抗腫瘤活性。為將景洪哥納香抗腫瘤活性的進(jìn)一步研究提供必要的前期基礎(chǔ)。

1材料與方法

11材料人胃癌細(xì)胞MKN-28、人肝癌細(xì)胞SMMC-7721購(gòu)自于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)；RMPI-1640培養(yǎng)基購(gòu)自于GIBCO公司；新生牛血清購(gòu)自于杭州四季青試劑公司；胰蛋白酶、二甲基亞砜（DMSO）、噻唑藍(lán)（MTT）購(gòu)自于Sigma公司；三聯(lián)液（10mL SDS，5mL異丁醇，012mL HCL，定容至100mL）由實(shí)驗(yàn)室自己配置。注射用青霉素鈉、注射用硫酸鏈霉素購(gòu)自于大連美羅大藥廠。

12細(xì)胞培養(yǎng)用RPMI-1640培養(yǎng)液含10%新生牛血清、100 kU/L青霉素、100 kU/L鏈霉素，在37 ℃、5 %的二氧化碳培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，25 g/L胰酶+02 g/L EDTA消化傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

13體外抗增殖作用采用改良MTT法，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以4×104/mL、90 μL /孔接種于96孔板中，分別加入陰性對(duì)照組生理鹽水（NS）、陽(yáng)性對(duì)照組（終濃度為01、1、10 μg/mL的順鉑）及終濃度分別為1、3、10、30、100 μg/mL的各種景洪哥納香醇提物，每個(gè)濃度均設(shè)4個(gè)平行孔，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h，每孔加入5 g/ L MTT 10 μL，振蕩混勻，4h后，每孔加入100 μL三聯(lián)液，12 h后，輕輕振蕩15 min，在酶標(biāo)儀上于490 nm/570 nm雙波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率：

細(xì)胞抑制率=（1-實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值）×100%

并利用Gwbasic軟件計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50）。

2結(jié)果

21形態(tài)學(xué)觀察不同濃度的景洪哥納香醇提物用于兩種人腫瘤細(xì)胞48h后，光學(xué)顯微鏡下觀察可見(jiàn)細(xì)胞增殖被顯著抑制（見(jiàn)圖1、圖2）。高濃度景洪哥納香醇提物與正常組比較，細(xì)胞貼壁能力下降，由不規(guī)則形狀逐漸變圓、皺縮、折光性降低，細(xì)胞數(shù)量顯著減少，可見(jiàn)大量細(xì)胞碎片。且發(fā)現(xiàn)景洪哥納香醇提物對(duì)兩株人腫瘤細(xì)胞增殖抑制能力有一定的劑量依賴性。

22體外細(xì)胞增殖抑制作用改良MTT法觀察景洪哥納香醇提物對(duì)細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，發(fā)現(xiàn)景洪哥納香醇提物在一定的劑量范圍內(nèi)，可以顯著的抑制MKN-28細(xì)胞的增殖能力，且具有顯著的劑量依賴性，其IC50為3102μg/mL。而其對(duì)SMMC-7721同樣具有顯著的細(xì)胞毒作用，但是劑量依賴性不明顯，其IC50為1888μg/mL。觀察發(fā)現(xiàn)，100μg/mL景洪哥納香醇提物對(duì)這兩株人腫瘤細(xì)胞增殖抑制率可達(dá)95%以上。隨著濃度的降低，其細(xì)胞毒作用也逐漸降低。（見(jiàn)圖3）

3討論

中醫(yī)藥在治療癌癥方面有其獨(dú)到之處。近年來(lái)，從中藥中篩選抗癌活性成分以及抗癌先導(dǎo)化合物已成為這一領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，來(lái)源于植物藥的抗癌制劑，占總抗癌藥的1/3左右[4]。紫杉醇、喜樹(shù)堿、長(zhǎng)春新堿等已作為許多腫瘤的首選藥。我國(guó)的藥用植物種質(zhì)資源豐富，如果能將中藥中抗腫瘤有效成分分離出來(lái)，明確其抗腫瘤作用及機(jī)理，對(duì)于抗腫瘤藥物的研制開(kāi)發(fā)以及腫瘤治療具有非常重要的意義。[JP]

番荔枝科屬植物抗腫瘤活性顯著，在上世紀(jì)90年代就被多位國(guó)內(nèi)外學(xué)者所關(guān)注[5]。景洪哥納香是番荔枝科哥納香屬植物，其抗腫瘤活性近年也開(kāi)始引起學(xué)者的關(guān)注[6]。筆者對(duì)景洪哥納香的醇提物在體外進(jìn)行了初步細(xì)胞毒活性測(cè)試，光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)景洪哥納香醇提物高濃度時(shí)可以顯著抑制細(xì)胞增殖，且發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞碎片，提示筆者其抗MKN-28增殖作用的機(jī)制可能是直接殺死細(xì)胞，而不僅僅是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。改良MTT法研究發(fā)現(xiàn)其抗腫瘤活性顯著，且具有一定的劑量依賴性。提示筆者可以進(jìn)一步觀察其對(duì)其它人腫瘤細(xì)胞株細(xì)胞毒作用如何、以及其細(xì)胞毒活性是否存在時(shí)間依賴性及其抗腫瘤機(jī)制。

筆者通過(guò)體外觀察兩株人腫瘤細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)，對(duì)景洪哥納香醇提物抗腫瘤活性進(jìn)行初探，以期為景洪哥納香的抗腫瘤活性研究提供必要的前期基礎(chǔ)。[KH*1D]

參考文獻(xiàn)：

[1]范治軍，崔英中草藥抗腫瘤的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘（腫瘤學(xué)），2005 02：152-153

[2]中國(guó)科學(xué)院編輯委員會(huì)中國(guó)植物志[M].第30 卷北京：科學(xué)出版社，1978：64

[3]中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所云南植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1991：51

[4]劉延澤，陳士林，馬培，等中草藥中發(fā)現(xiàn)新抗癌藥物的途徑[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2012，04：323-337

[5]楊根金，顧正兵，梁華清，等用核磁共振研究和確定景洪哥納香中一種新生物堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)[A].第十屆全國(guó)波譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C].中國(guó)物理學(xué)會(huì)波譜學(xué)專業(yè)委員會(huì)：1998：2

[6]姜苗苗，馮毅凡，張雪，等景洪哥納香根的化學(xué)成分研究（Ⅱ）[J].中草藥，2011，12：2386-2388[JX*1]