雌、雄皺紋盤鮑內(nèi)臟脂肪酸及磷脂組成的比較分析

劉艷青，李兆杰*，李國云，劉小芳，薛長湖

(中國海洋大學食品科學與工程學院，山東 青島 266003)

鮑魚為海珍品之一，是非常名貴的藥食兩用海產(chǎn)品。鮑魚殼，即石決明，具有平肝潛陽、清熱益陰、明目解毒的功效，能治療頭暈?zāi)垦?、胃酸過多和失眠等癥狀[1]。鮑魚多糖具有增強免疫、抗腫瘤的功效[2-3]，從鮑魚臟器中提取的鮑魚內(nèi)臟多糖具有抗氧化，抗癌等活性[4-6]。鮑魚腹足與內(nèi)臟脂質(zhì)中多不飽和脂肪酸含量豐富[7]，且富含磷脂[8]。多不飽和脂肪酸能夠降低血中膽固醇及甘油三酯的水平，降低血液黏稠度，改善血液循環(huán)。磷脂對活化細胞、維持新陳代謝、增強人體免疫力和再生力方面發(fā)揮重要的作用。鮑魚內(nèi)臟為加工副產(chǎn)物，現(xiàn)多作為蛋白來源添加到飼料中，本實驗對雌、雄鮑魚內(nèi)臟脂質(zhì)進行比較分析，主要研究其脂肪酸及磷脂組成，以期對鮑魚內(nèi)臟脂質(zhì)研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

皺紋盤鮑 青島市鮑魚養(yǎng)殖場。

脂肪酸甲酯標準品、磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰絲氨酸(PS)標準品、甲醇、氯仿、甲酸(均為色譜純) 美國Sigma公司；甲醇、三氯甲烷、正己烷(均為分析純) 天津市科密歐化學試劑公司；總膽固醇(TC)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒 北京中生北控生物科技股份有限公司。

6980N型氣相色譜儀、高效液相色譜儀、蒸發(fā)光散射檢測器、ZORAX RX-SIL色譜柱 美國Agilent公司；Laborota 4000 efficient旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 德國海道爾夫公司；AB135-S型精密電子分析天平 瑞士梅特勒-托利多公司；Milli-Q Synthesis超純水系統(tǒng) 美國Millipore公司；氯仿活化氨丙基硅膠固相萃取小柱 天津艾杰爾科技公司。

1.2 方法

1.2.1 總脂的提取

將皺紋盤鮑(61.6g±3.1g)去殼，分離出肌肉和內(nèi)臟，冷凍干燥后粉碎。取內(nèi)臟樣品10g，用Folch法提取樣品總脂。

1.2.2 游離脂肪酸含量的測定

將所提總脂用氯仿溶解并定容至100mL，取一定的氯仿溶液，減壓干燥后，用4mL正庚烷溶解，并加入1mL脂肪酸顯色劑(5%醋酸銅溶液，用吡啶調(diào)節(jié)pH6.1)，充分振蕩后，離心取上層有機相于710nm波長處測定吸光度，并與標準曲線對照，計算總脂中的游離脂肪酸含量。

1.2.3 磷脂含量的測定

總脂用硝酸-高氯酸混合液(4：1，V/V)進行消化，使總脂中的有機磷轉(zhuǎn)變成無機磷，在VC條件下與鉬酸銨反應(yīng)生成鉬藍，于650nm波長處測定吸光度，并與標準曲線對照，計算總脂中的磷脂含量。

1.2.4 甘油三酯含量的測定

將所提總脂用氯仿溶解并定容至100mL，取一定的氯仿溶液，減壓干燥后，按照試劑盒的使用說明測定總脂中膽固醇和甘油三酯的含量。

1.2.5 脂肪酸的氣相色譜分析分別取脂肪酸標準品混合樣及雌雄總脂樣品，向具塞試管中加入1mL 10%硫酸-甲醇，60℃水浴15min。加入200μL正己烷漩渦振蕩，取正己烷層待氣相色譜分析。氣相色譜條件：H P-I N N O W a x 石英毛細管柱(30m×0.32mm，0.25μm)；進樣口溫度230℃；檢測器溫度250℃；柱溫以3℃/s由170℃升到210℃，在210℃條件下保持10mim。整個分析過程為43.3min。

1.2.6 磷脂的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射(high performance liquid chromatography-evaportive light scattering detector，HPLC-ELSD)組成分析

根據(jù)García等[9]的方法，分別稱取20.0mg雌雄鮑魚內(nèi)臟總脂，用1.0mL氯仿溶解。先用1mL氯仿活化氨丙基硅膠固相萃取小柱，取0.5mL脂質(zhì)氯仿溶液移入固相萃取小柱中；并依次用8mL氯仿溶液(2：1，V/V)和3mL 2%乙酸-乙醚溶液洗脫小柱，棄去洗脫液；最后用3.0mL甲醇溶液洗出磷脂并收集；減壓干燥后用甲醇溶解。

PE、PC、PS標準品及雌雄磷脂樣品通過HPLC-ELSD進行組分分離及分析。色譜條件[10]：色譜柱：ZORAX RXSIL正相色譜柱(250m×4.0mm，5μm)；柱溫40℃；流動相A：氯仿-甲醇-水(1mol/L甲酸-三乙胺，pH3)(87.5：12：0.5，V/V)，流動相B：氯仿-甲醇-水(1mol/L甲酸-三乙胺，pH3)(28：60：12，V/V)；洗脫梯度：時間0～20min內(nèi)，流動相B由0%增至100%，100%B洗脫保持5min后，在5min內(nèi)恢復(fù)到初始100%A洗脫；蒸發(fā)光散射檢測器：溫度70℃，氮氣霧化，氣體流速2L/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 脂質(zhì)基本組成含量分析

表 1 雌、雄性鮑魚內(nèi)臟中脂質(zhì)基本組成含量Table 1 Lipid composition of viscera of female and male Haliotis discus hannai Ino%

由表1可以看出，雌性鮑魚內(nèi)臟中甘油三酯與磷脂含量明顯高于雄性內(nèi)臟，而雄性內(nèi)臟中游離脂肪酸含量要遠高于雌性內(nèi)臟。

2.2 雌、雄鮑魚內(nèi)臟脂質(zhì)脂肪酸的組成

表 2 雌、雄鮑魚內(nèi)臟脂質(zhì)脂肪酸組成Table 2 Visceral fatty acid composition of female and male Haliotis discus hannai Ino

不同組分比較采用SPSS 18.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。由表2可知，雌、雄鮑魚內(nèi)臟脂質(zhì)脂肪酸組成具有顯著性差異。雄性鮑魚內(nèi)臟的總飽和脂肪酸及單不飽和脂肪酸總量高于雌性鮑魚內(nèi)臟脂質(zhì)，且存在顯著性差異(P＜0.01)；而雌性鮑魚內(nèi)臟的多不飽和脂肪酸及二甲基縮醛含量要高于雄性。

2.3 雌、雄鮑魚內(nèi)臟脂質(zhì)磷脂的組成

圖 1 雌性鮑魚內(nèi)臟磷脂HPLC-ELSD圖譜Fig.1 HPLC-ELSD profile of phospholipids in female Haliotis discus hannai Ino viscera

圖 2 雄性鮑魚內(nèi)臟磷脂HPLC-ELSD圖譜Fig.2 HPLC-ELSD profile of phospholipids in male Haliotis discus hannai Ino viscera

雌、雄鮑魚內(nèi)臟脂質(zhì)中磷脂組成主要有磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酰膽堿(PC)、鞘磷脂(SM)、溶血卵磷脂(LPC)以及3種未知組分X1，X2，X3組成。雌、雄鮑魚內(nèi)臟脂質(zhì)不同磷脂組分含量差異較大(圖1、2)，雄性鮑魚內(nèi)臟中幾乎沒有PG，雄性鮑魚內(nèi)臟中PE、PC、PS這3種常見磷脂含量較高。

3 討 論

鮑魚內(nèi)臟脂質(zhì)中含有大量的不飽和脂肪酸，可以用于預(yù)防和治療高血脂癥以及與高血脂癥密切相關(guān)的心腦血管疾病，是理想的油脂替代品[11]。皺紋盤鮑內(nèi)臟脂質(zhì)中磷脂含量豐富，磷脂作為功能性脂質(zhì)在生命代謝活動中有極其重要的作用，可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，降低血脂中甘油三酯和膽固醇水平。皺紋盤鮑內(nèi)臟磷脂主要由PE、PC、PS組成，PS具有提高認知力，改善老年人的阿耳茨海默(氏)癥的功效[12-15]。雌性鮑魚內(nèi)臟中不飽和脂肪酸及二甲基縮醛的含量要高于雄性，雄性鮑魚內(nèi)臟在磷脂組成方面較雌性簡單，PG、未知磷脂組分X1基本未檢測到。

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