松針總黃酮抗氧化調(diào)血脂作用研究

劉紅煜，劉樹民，于棟華，李偉，王加志

(1．黑龍江生物科技職業(yè)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150025;2．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;3．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

松針(Pineneedles)為松科(Pinaceae)松屬(Pinus)植物的針狀葉。現(xiàn)代研究表明，松針提取物中富含黃酮類化合物，有抗氧自由基作用［1－4］。本研究試圖通過探討松針總黃酮對飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠自由基和血脂代謝的影響，為松針的減肥作用機制的研究提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 實驗對象 清潔級Wistar(4月齡)大鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量(200±20)g，購于上海斯萊克實驗動物中心。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機分為4組，每組10只，分別為空白對照組(空白組)、膳食誘導(dǎo)肥胖組(模型組)、藥物治療組(治療組)和維生素E對照組(對照組)。

1．2 實驗材料 樟子松松針，采自黑龍江省大興安嶺塔河，經(jīng)植物專家檢驗、鑒定為樟子松松針。

1．3 總黃酮的制備 新鮮松針洗凈，干燥后稱取200g，置具塞圓底燒瓶中，加入70%乙醇10倍量回流提取2次，2h/次。減壓收干，熱蒸餾水分散，靜置后得棕黃色溶液及黑綠色沉淀，取棕黃色濾液減壓蒸干，經(jīng)聚酰胺柱處理，50%醇水洗脫組分為受試樣品［5］。蒸餾水溶解，配成含生藥1g/ml受試液備用。

1．4 動物實驗預(yù)處理 高脂飼料配方如下:基礎(chǔ)飼料50%、豬油10%、蔗糖20%、豬膽鹽1%、雞蛋10%、奶粉9%。每周稱重，飼養(yǎng)12周。松針總黃酮灌胃給藥4周，于末次給藥后，禁食不禁水12h，烏拉坦腹腔注射麻醉，門靜脈采血，4500 轉(zhuǎn)離心15min分離得血清，測定血脂水平;立即摘取肝臟并用預(yù)冷的生理鹽水洗凈血液，濾紙吸干，按體積比1:9 加入低溫預(yù)冷pH7．2的磷酸鹽緩沖液勻漿，4℃離心(5000r/min)15min，取上清液測定抗氧化酶水平。

1．5 檢測指標(biāo)和方法 丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)和過氧化氫酶(CAT)，血清總膽固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)、血清極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL－C)，測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供，嚴格按試劑盒說明進行測定。

1．6 統(tǒng)計學(xué)處理

用SPSS 13．0 軟件對所有實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，對數(shù)據(jù)進行方差分析和t檢驗，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。顯著性水平定為P＜0.05 或P＜0.01。

2 實驗結(jié)果

2．1 松針總黃酮對大鼠肝臟自由基代謝的影響

與模型組比較，治療組SOD、GSH－Px和CAT的活性顯著增強，MDA含量顯著降低(P＜0．05)。見表1。

表1 松針總黃酮對大鼠肝臟自由基代謝的影響(±s)

表1 松針總黃酮對大鼠肝臟自由基代謝的影響(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0．05。

nSOD(u/ml)GSH－Px(u/ml)MDA(μmol/L)CAT(u/mgprot)空白組 10 369．15 ±40．65393．75 ±45．16 4．80 ±0．11 269．66 ±29．70模型組 10 323．08 ±39．39356．16 ±42．12 6．01 ±0．13 142．82 ±26．33治療組 10 371．88 ±41．87*432．03 ±65．02*4．89 ±0．20*210．29 ±13．37*對照組 10 358．80 ±40．08*412．33 ±62．12*4．82 ±0．18*201．81 ±11．77*

2．2 松針總黃酮對大鼠血脂的影響

結(jié)果顯示，治療組大鼠血清血脂水平與模型組相比，LDL－C、VLDL－C、TC、TG 都顯著降低，差異顯著(P ＜0．05)。見表2。

表2 松針總黃酮對大鼠血脂的影響(±s)

表2 松針總黃酮對大鼠血脂的影響(±s)

注:與模型組相比，*P ＜0．05。

組別 nLDL－C(mmol/L)VLDL－C(mmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)10 0．20 ±0．09 1．04 ±0．11 1．27 ±0．15 0．24 ±0．11模型組 10 1．74 ±0．71 8．94 ±2．6810．21 ±2．49 1．93 ±0．66治療組 10 0．79 ±0．07*5．35 ±1．37*6．27 ±1．70*0．77 ±0．39*對照組 10 0．36 ±0．10*2．96 ±0．67*3．36 ±0．72*0．42 ±0．29空白組*

3 討論

肥胖癥是一種機體能量代謝障礙性疾病，是心腦血管疾病和糖尿病的高發(fā)危險因素，因為生活習(xí)慣的改變而在發(fā)達國家中高發(fā)［6］。

有研究顯示，肥胖本身會造成自由基生成過多和消除不足［7－8］，氧自由基使細胞產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化，進一步導(dǎo)致其功能受損，產(chǎn)生多種臟器功能障礙。通過體外培養(yǎng)3T3 脂肪細胞的研究顯示，H2O2 作用于培養(yǎng)的脂肪細胞，會使細胞氧化應(yīng)激標(biāo)記物上升［9］。而機體內(nèi)存在著自由基防御酶，通過SOD歧化O－2 生成的H2O2，并在CAT作用下分解為H2O和O2，阻斷毒性更強的羥自由基產(chǎn)生，GSH－Px主要作用是以GSH為底物，與SOD、CAT協(xié)同作用清除機體內(nèi)的各種氧自由基，以減輕或阻斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護細胞免受氧化損傷。

本實驗采用飲食性高脂血癥動物模型實驗方法。主要用于降血脂藥物的篩選和評價，以及對人類高脂血癥的研究。因大鼠對外源性膽固醇的吸收率高，對血脂的清除能力低，且便于采血和飼養(yǎng)管理，是一種比較理想的研究模型。

天然抗氧化劑松針總黃酮可以使大鼠抗氧化酶SOD、GSH－Px、CAT活性上升，MDA 含量下降，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和自由基產(chǎn)生，并能調(diào)節(jié)血脂代謝，對諸如糖尿病、高血壓、動脈硬化等一系列并發(fā)癥有較好的防治作用。

［1］ 邢雁霞，劉斌鈺，李麗芬．松針對小鼠應(yīng)激能力和自由基代謝的影響［J］．中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2010，11(3):298－300．

［2］ 曾明，李守漢，郭層城，等．松針提取液對小鼠骨骼肌自由基代謝和運動能力的影響［J］．北京體育大學(xué)學(xué)報，2006，29(4):484－485．

［3］ 孔慶峰，楊金宇，潘西芬．松針?biāo)幚碜饔醚芯窟M展［J］．中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，7(26):16－17．

［4］ 俞靈鶯，李向榮．植物黃酮類抗糖尿病及其并發(fā)癥的研究進展［J］．國外醫(yī)學(xué)·衛(wèi)生學(xué)分冊，2000，27(6):331－335．

［5］ 樊鐵波，劉紅煜，湯青，等．HPLC法測定松針中二氫槲皮素含量［J］．中國藥師，2009，12(8):1046－1048．

［6］ 支滌靜，沈水仙．肥胖的危害及預(yù)后［J］．中國全科醫(yī)學(xué)，2003，6(4):2821－2822．

［7］ 王焰山．松針提取液對實驗性高脂血癥及過氧化作用的影響［J］．北京中醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2001，24(2):35－37．

［8］ 羅蓉．肥胖與自由基［J］．國外醫(yī)學(xué)·內(nèi)分泌分冊，2004，31(24):9－10．

［9］ JeBailey L．Ceramide－and oxidant－induced insulin resistanceinvolve loss of insulin－dependent rac－activation and actinremodeling in muscle cells［J］．Diabetes，2007，56:394－403．