三參丹沖劑對異丙腎上腺素誘導(dǎo)大鼠心肌缺血模型的保護(hù)作用研究

丁瑩，孔菲，梁雪，高彥宇，段富津

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

心肌缺血，是指心臟的血液灌注減少，導(dǎo)致心臟的供氧減少，心肌能量代謝不正常，不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)。心肌缺血是冠心病最基本的病理生理過程［1］。三參丹沖劑為名老中醫(yī)段富津教授的經(jīng)驗(yàn)方，經(jīng)臨床驗(yàn)證，其具有益氣養(yǎng)血，活血化瘀，改善心肌缺血之功。本研究用腹腔注射異丙腎上腺素(ISO)的方法制備大鼠心肌缺血模型，觀察三參丹沖劑是對天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性的影響，進(jìn)一步探討三參丹抗心肌缺血的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1．1 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑

鹽酸異丙腎上腺素(上海禾豐制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H31021344，批號070503);白參、黃芪、川芎、丹參、三七、血竭、當(dāng)歸(購于黑龍江中藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院);硝酸異山梨酯片(太原市振興制藥有限責(zé)任公司，規(guī)格:5mg/片，國藥準(zhǔn)字 H14021755);烏拉坦(上海山浦化工有限公司，批號20050228);生理鹽水(哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司，批號100102A10);丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑盒(速率法)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑盒(速率法)(中北控生物科技股份有限公司)。

1．2 動物

Wistar大鼠90只，雌雄各半，體質(zhì)量180～200g購自北京通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，許可證編號:SCXK(京)2012－0001。

1．3 主要儀器

Medlab生物信號采集處理系統(tǒng)(南京美易科技有限公司，型號:u/4c501);KDC－40 低速離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中加分公司);自動生化分析儀(Glamour 2000);酶標(biāo)儀(anthos 2010)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2．1 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法

將90只實(shí)驗(yàn)大鼠腹腔注射20%烏拉坦(0．5ml/100g)麻醉，連接Ⅱ?qū)?lián)心電圖，篩選出心率正常的大鼠60只。按照體表面積換算法確定三參丹沖劑相對于鼠的用量，將大鼠按照性別和體質(zhì)量隨機(jī)分為兩組，每組再采取同樣的方法分為6組，即三參丹沖劑高、中、低劑量組分別給予 10．08g/kg、5．04g/kg、2．52g/kg，陽性藥組給予硝酸異山梨酯5．40g/kg，模型組給予等量的生理鹽水，每組10只，連續(xù)灌胃給藥14天，給藥體積為1ml/100g。

2．2 造模方法

末次給藥1h后，實(shí)驗(yàn)大鼠腹腔注射20%烏拉坦(0．5ml/100g)麻醉，連接Ⅱ?qū)?lián)心電圖機(jī)，模型組和各給藥組動物腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素溶液(ISO)30mg/kg，正常組給等容量生理鹽水。

2．3 心電圖正常大鼠篩選方法

大鼠給藥后測定 5、10s，1、2、3、5、10、20、30min 各個時間點(diǎn)心電圖，觀察心電圖ST段、T波是否異常，從而篩選心電圖正常的大鼠。

2．4 測定生化指標(biāo)方法

將心電圖正常的大鼠6h后眼眶靜脈取血，4℃離心(3500rpm，15min)后分離血清，測定天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST Kit)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT Kit)。

2．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3．1 三參丹沖劑對大鼠心電圖的影響

空白對照組大鼠心電圖未見異常。模型組大鼠的心電圖可見明顯心肌缺血樣改變，三參丹沖劑高、中、低劑量組及硝酸異山梨酯片組大鼠心電圖較模型組緊急缺血樣改變減輕。結(jié)果表明，腹腔注射異丙腎上腺素(ISO)能夠?qū)е麓笫笮碾妶D出現(xiàn)心肌缺血樣改變，而三參丹沖劑對心肌缺血大鼠的異常心電圖具有改善作用。

3．2 實(shí)驗(yàn)各組小鼠血清中AST、ALT活性比較

結(jié)果如表1所示，心肌缺血模型組大鼠AST、ALT活性明顯高于空白組，有顯著性差異(P＜0．01)。與模型組比較，三參丹沖劑高、中、低劑量組和陽性藥組AST、ALT活性顯著差異(P＜0．01)，三參丹沖劑高劑量組活性明顯降低(P＜0．05 或P＜0．01)。結(jié)果表明，三參丹沖劑能顯著降低心肌缺血模型大鼠血清中AST、ALT 活性。

表1 三參丹沖劑對心肌缺血模型大鼠血清生化指標(biāo)的影響(±s，n=10)

表1 三參丹沖劑對心肌缺血模型大鼠血清生化指標(biāo)的影響(±s，n=10)

注:與模型組比較，▲P ＜0．05，▲▲P＜0．01。

高劑量組 10．08 366．23±58．18▲ 95．97±7．78▲▲中劑量組 5．04 347．62±40．04▲▲ 91．40±5．58▲▲低劑量組 2．52 304．54±22．69▲▲ 85．54±5．06▲▲陽性藥組 5．40 288．69±45．36▲▲ 67．82±6．62▲▲組模型組－423．84±62．45 111．3±15．44空白對照組－100．37±10．44▲▲ 48．46±4．82▲▲

4 討論

冠心病的臨床特點(diǎn)與中醫(yī)學(xué)中的“胸痹”癥候關(guān)系密切，病機(jī)有虛實(shí)兩方面，實(shí)為寒凝、血瘀、氣滯、痰濁，痹阻胸陽，阻滯心脈;虛為氣虛、陰傷、陽衰，肺、脾、肝、腎虧虛，心脈失養(yǎng)。在本病癥的形成和發(fā)展過程中，大多先實(shí)而后致虛，亦有先虛而后致實(shí)者。后世醫(yī)家總結(jié)了前人的經(jīng)驗(yàn)，提出了活血化瘀的治療方法。三參丹沖劑具有益氣養(yǎng)血，活血化瘀的功能，是根據(jù)段富津教授多年治療冠心病、心絞痛臨床經(jīng)驗(yàn)方，通過現(xiàn)代提取工藝制成的顆粒劑。目前對冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的防治研究多采用心肌缺血動物模型，廣泛采用的有冠狀動脈左前降支結(jié)扎誘導(dǎo)左室心肌缺血模型、異丙腎上腺素(isopioterenol，ISO)誘導(dǎo)全心缺血模型和Langendorff體外灌流全心缺血模型。ISO誘導(dǎo)心肌缺血模型因制作簡單，不需要特殊設(shè)備，近年來廣泛應(yīng)用于藥理、藥效學(xué)的研究。用于心肌缺血損傷的造模劑量一般在60mg/kg以下［2］。ISO誘導(dǎo)的心肌缺血模型對心肌酶(谷草轉(zhuǎn)氨酶AST、谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT)水平明顯升高。

“三參丹沖劑”為段富津教授的經(jīng)驗(yàn)方，由白參、黃芪、川芎、丹參、三七、血竭、當(dāng)歸組成。方中白參為人參焯燙浸糖后干燥者，人參具有益氣固脫功效，其藥理作用為強(qiáng)心、擴(kuò)張血管、調(diào)節(jié)血壓、抗休克、抗心肌缺血等作用。黃芪具有強(qiáng)心作用，黃芪多糖是其主要成分，可對抗急性心肌缺血。川芎、當(dāng)歸在《本草匯言》記載:“芎?，上行頭目，下調(diào)經(jīng)水，中開郁結(jié)，血中氣藥，嘗為當(dāng)歸所使，非第活血有功，而活氣亦神驗(yàn)也”。丹參具有祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩之功效。三七具有散瘀止血，消腫定痛之功效。血竭散瘀定痛，共助三七活血化瘀止痛之效，且活血而不傷血。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，三參丹沖劑對異丙腎上腺素引起的心肌缺血模型大鼠的血清中AST、ALT的活性具有降低作用，從而為進(jìn)一步研究其作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

［1］ 劉瑜，林榮．補(bǔ)陽還五湯對異丙腎上腺素誘導(dǎo)大鼠心肌缺血的保護(hù)作用［J］．中藥材，2009，32(3):380．

［2］ 張?jiān)?，王階，郭麗麗．異丙腎上腺素誘導(dǎo)心肌缺血損傷模型的研究進(jìn)展［J］．醫(yī)學(xué)綜述，2010，16(23):3527－3530．