六種腫瘤相關抗原自身抗體聯(lián)合CA125檢測對卵巢癌早期診斷的價值*

李留霞 ，張?zhí)m蘭，李秀芳，張建營，王凱娟，代麗萍，王 鵬，張 毅

1)鄭州大學第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 鄭州450052 2)鄭州大學公共衛(wèi)生學院;鄭州大學蛋白質(zhì)組學應用研究中心 鄭州450001 3)鄭州大學第一附屬醫(yī)院生物細胞治療中心;鄭州大學生物工程系 鄭州450052

#通訊作者，女，1962年6月生，博士，教授，主任醫(yī)師，研究方向:婦科腫瘤、婦科內(nèi)分泌疾病及不孕不育，E-mail:llxia698@163.com

卵巢癌(ovarian cancer，OC)病死率居婦科惡性腫瘤之首，發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌，位居第3［1］。目前協(xié)助診斷卵巢癌的腫瘤標志物主要是血清CA125，但其敏感性和特異性均不理想，尤其是對早期卵巢癌診斷價值不大。研究［2-4］發(fā)現(xiàn)腫瘤患者血清中存在各種類型的抗腫瘤細胞自身抗原的抗體，這些與腫瘤發(fā)生有關的抗原被稱為腫瘤相關抗原(tumor-associated antigen，TAA)。有研究［5-8］顯示P53、Survivin、IMP1、Cyclin D1、C-myc 和Cyclin E 在OC組織中呈現(xiàn)高表達，理論上推測這些抗原應該能刺激機體產(chǎn)生特異性抗體。該研究通過對卵巢癌患者血清中上述6 種TAAs 抗體及CA125 進行檢測，探討TAAs 抗體聯(lián)合CA125 檢測對診斷早期卵巢癌的應用價值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 該研究中使用的血清標本來自2011年1月至2012年1月在鄭州大學第一附屬醫(yī)院、鄭州大學第三附屬醫(yī)院首次住院治療的卵巢腫瘤患者，經(jīng)知情同意后收集血清，立即凍存于－20℃冰箱，所有病例均經(jīng)術后組織病理學證實。①OC組78例，患者年齡23～79 歲;包括漿液性囊腺癌63例，黏液性囊腺癌15例;FIGO 臨床分期:Ⅰ、Ⅱ期28例，Ⅲ、Ⅳ期50例。②卵巢良性上皮性腫瘤組60例，患者年齡26～71 歲。③正常對照組血清100例，采集于在鄭州大學第一附屬醫(yī)院進行健康體檢并證實無任何腫瘤相關疾患的健康女性，年齡21～65 歲。

1.2 主要試劑及儀器 P53、Survivin、IMP1、Cyclin D1、C-myc 和Cyclin E 抗體由美國德克薩斯州大學生命科學系腫瘤免疫和腫瘤分子流行病學研究室提供。96 孔酶標板系Gibico 公司產(chǎn)品。酶標儀為美國Tecan 公司Sunrise 酶標儀。其他試劑如過氧化氫尿素顯色液(TMB)、辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG(HRP-APS)等均由鄭州大學蛋白質(zhì)組學應用研究中心饋贈。

1.3 6 種TAAs 抗體的ELISA 法檢測 采用Zhang 等［9-15］建立的間接ELISA 法:將各種抗原以0.5 g/L 的質(zhì)量濃度包被96 孔板;一抗與待測血清按1:100 稀釋，PBS 作為空白對照，每孔加100 μL，37℃孵育1 h，PBST 洗板3 次;二抗辣根過氧化物酶標記的葡萄球菌A 蛋白(HRP-APS，按1:4 000 稀釋)，每孔100 μL，37℃孵育1 h，PBST 洗板3 次，PBS 洗板1 次;每孔加入TMB 顯色液100 μL，37℃避光反應至充分顯色;加終止液50 μL，立即在自動酶標儀上讀取450 nm 吸光度(A)值，空白孔調(diào)零。結(jié)果判定:樣品血清每份做2 孔，取平均值判斷結(jié)果，空白孔調(diào)零;選擇7 個正常血清和2 個卵巢癌患者血清作為判斷每批ELISA 試驗之間可靠性的指標;100例正常人血清A 值的平均值加2 個標準差為判斷臨界值，即截斷值，高于此值為陽性，低于此值為陰性。

1.4 CA125 的測定 采用電化學發(fā)光免疫測定法(ECLIA)，按說明書提供的實驗程序檢測血清CA125 的水平。儀器:德國寶靈曼公司Elecsys 2010全自動免疫分析儀。檢測指標采用正常值上限，即CA125 ＞35 kU/L 為陽性。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0 進行分析，應用χ2檢驗及精確概率法分析不同組合間各種率的差異，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 6 種TAAs 抗體原的檢測結(jié)果及真實性評價見表1。由表1可知，卵巢癌患者血清中每種TAA抗體陽性率均明顯高于正常人血清。這6 種TAAs的抗體陽性率最低為11.5%，最高為35.9%。而正常人抗體陽性率均較低，為2.0%～6.0%。

2.2 不同TAAs 抗體組合的檢測結(jié)果及評價 見表2。6 種TAAs 聯(lián)合CA125 檢測時其約登指數(shù)為0.722，陽性似然比為4.01，陰性似然比為0.05，一致率為84.83%，Kappa 值為0.701。

表1 6 種TAAs 抗體的檢測結(jié)果及真實性評價

2.3 6 種TAAs 抗體聯(lián)合CA125 檢測的結(jié)果及綜合性評價 見表3、4。由表3可知，CA125 陰性的10例早期卵巢癌患者中，6 種TAAs 抗體聯(lián)合檢測陽性者為7例。6 種TAAs 聯(lián)合CA125 檢測對早期卵巢癌的檢測陽性率明顯高于單獨應用CA125 檢測的陽性率，兩者差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.909，P=0.027)。由表4可知，6 種TAAs 聯(lián)合CA125 檢測對卵巢癌的檢測陽性率明顯高于卵巢良性腫瘤組和正常對照組。

表2 不同TAA 抗體組合的檢測結(jié)果評價

表3 不同分期卵巢癌患者中TAAs 抗體及CA125 的檢測結(jié)果 陽性例數(shù)(%)

表4 3組對象6 種TAAs 抗體聯(lián)合CA125 檢測結(jié)果分析

3 討論

腫瘤標志物由腫瘤組織自身產(chǎn)生，是一類可反映腫瘤存在和生長的生化物質(zhì)，它對于腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、病情監(jiān)測及靶向性治療具有重要意義。卵巢癌患者死亡率居婦科惡性腫瘤之首，其總體5 a 生存率為45%，且其發(fā)病率呈上升趨勢［14］。在普通女性人群中，發(fā)生卵巢癌的風險為1.4%，而在某些高危婦女中風險更高。由于大多數(shù)卵巢癌臨床診斷時已處于晚期，迫切需要一種能夠早期臨床診斷的方法。雖然目前已經(jīng)找到了一些腫瘤標記物，而且在超聲輔助下可明顯增加診斷的靈敏度和特異性，但仍未達到滿意結(jié)果［16］。

在卵巢癌細胞中CA125 有高度表達，并能分泌入血液，目前已作為一種常規(guī)的血清標志物應用于卵巢癌患者的病情監(jiān)測，并已成為臨床上應用最廣的卵巢癌腫瘤標志物，但由于在排卵期、子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤、盆腔炎癥等生理及病理情況下也會導致CA125 升高，所以應用CA125 診斷卵巢癌的特異性不高，而且早期卵巢癌CA125 檢測陽性率僅27%～66%［16］。有學者［17］提出采用TAAs 抗體作為血清標志物來診斷癌癥，但是研究結(jié)果顯示單個TAAs 抗體檢測的靈敏度比較低，一般為10%～30%，不宜作為臨床檢測指標，Zhang［9-15］等采用精心篩選出的TAAs 抗體聯(lián)合檢測，可使檢測的靈敏度提高到63.6%。

該研究選取6 種TAAs 抗體聯(lián)合CA125 來檢測卵巢癌，結(jié)果顯示單個抗體檢測的靈敏度較低，而聯(lián)合檢測可顯著提高檢測的靈敏度，6 種TAAs 聯(lián)合檢測的靈敏度達到55.1%，特異度為87.0%。6 種TAAs 抗體聯(lián)合CA125 的檢測靈敏度為96.2%，特異度為76.0%，該組合檢測的陽性似然比為4.01，陰性似然比為0.05，陽性預測值為75.8%，陰性預測值為96.2%，提示該方法的診斷價值較高;Kappa值為0.701，提示該試驗的檢測結(jié)果與真實值高度一致;6 種TAAs 抗體聯(lián)合CA125 檢測對早期卵巢癌的檢測陽性率為89.3%，明顯高于單獨應用CA125 檢測的陽性率，表明6 種TAAs 抗體與CA125 聯(lián)合可彌補CA125 單獨應用時診斷早期卵巢癌陽性率較低的不足，起到了互補作用，可望成為早期卵巢癌的診斷方法。

綜上所述，采用篩選出的6 種TAAs 抗體聯(lián)合CA125 檢測對卵巢癌的早期診斷可能具有重要的參考價值。

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