優(yōu)化注射用頭孢西丁鈉含量測定方法研究

律蘭鳳

【摘 要】目的：采用離子對色譜法測定注射用頭孢西丁鈉的含量，為完善注射用頭孢西丁鈉質(zhì)量標準提供依據(jù)。方法：采用離子對色譜法，色譜柱為AgilentZORBAX80AExtendC18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為5mmol·L-1氫氧化四丁基銨溶液乙腈（體積比750∶250）；檢測波長254nm；流速為1mL·min-1。結(jié)果：頭孢西丁的質(zhì)量在0.310 1～3.1010μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.99998；平均回收率為100.2%，RSD為1.05%。結(jié)論：本文方法簡單、準確、重復性好，為完善注射用頭孢西丁鈉含量測定方法提供了依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】頭孢西丁鈉；離子對色譜法；含量測定

頭孢西丁為β內(nèi)酰胺類抗生素，由美國默沙東公司開發(fā)并于1974年上市。頭孢西丁抗菌作用和抗菌譜同第二代頭孢菌素，但對厭氧菌特別是脆弱擬桿菌的作用更強，對β內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定。臨床上用于腹膜炎和其他腹腔內(nèi)、盆腔內(nèi)、婦科感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎、尿路感染（包括淋?。⒑粑栏腥?、骨關(guān)節(jié)軟組織感染。采用注射用頭孢西丁鈉的國家標準及相關(guān)文獻方法測定頭孢西丁的含量，結(jié)果頭孢西丁的理論塔板數(shù)較低，色譜峰拖尾較嚴重。本文采用離子對色譜（IPC）法測定頭孢西丁的含量，能較大程度地提高頭孢西丁的理論塔板數(shù)，改善色譜峰拖尾現(xiàn)象，且操作簡便易行，結(jié)果重現(xiàn)性好，專屬性強。

1.儀器與試藥

島津LC2010A/C型高效液相色譜儀，ClassVP色譜工作站，METTLER TOLEDO十萬分之一電子天平。

乙腈為色譜純，實驗用水為超純水，磷酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、10%四丁基氫氧化銨溶液為分析純。頭孢西丁對照品（批號130572 200701，質(zhì)量分數(shù)為95.3%，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所），注射用頭孢西丁鈉（康田制藥（中山）有限公司，批號0711011、0711012、0711013）。

2.測定方法的建立

2.1色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX 80A Extend?C18柱（150mm×4.6mm，5 μm）；流動相：5mmol·L-1氫氧化四丁基銨溶液（取10%四丁基氫氧化銨溶液13.2mL，加水900mL后，用1mol·L-1磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0，再用水稀釋至1000mL）乙腈（體積比750∶250）；檢測波長254nm；流速為1mL·min-1；進樣量5μL。

2.2供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物，精密稱取適量（約相當于頭孢西丁15mg）置50 mL量瓶中，用磷酸鹽緩沖液（稱取磷酸二氫鉀1.0g和磷酸氫二鈉1.8 g，加水900mL使溶解，用磷酸或10mol·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.0，再用水稀釋至1000mL，搖勻）溶解并稀釋至刻度，制成每1mL中約含頭孢西丁0.3mg的溶液，作為供試品溶液。

2.3對照品儲備液的制備

取頭孢西丁對照品適量，精密稱定，加磷酸鹽緩沖液制成0.6mg·mL-1的對照品儲備液。

2.4線性關(guān)系

分別精密量取質(zhì)量濃度為0.6202mg·mL-1頭孢西丁對照品儲備液1、2、5、6、8mL，加磷酸鹽緩沖液稀釋成質(zhì)量濃度為0.06202～0.6202 mg·mL-1的對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行測定。以質(zhì)量（m）為橫坐標，各自峰面積（A）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程為A=1.277×106m+9.774×103，r=0.9999（n=6）

結(jié)果表明頭孢西丁的質(zhì)量在0.3101～3.1010μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗

取質(zhì)量濃度為0.3mg·mL-1的對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，重復進樣5次，測得頭孢西丁峰面積的RSD為0.57%，表明試驗精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗

取同一批號供試品溶液于0、1、2、3、4、5、6 h內(nèi)按“2.1”項下的色譜條件進行測定，測得頭孢西丁峰面積的RSD為0.98%，表明供試品溶液在6h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7重復性試驗

取同一批號樣品，分別按“2.2”項下的方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，頭孢西丁的平均含量為94.26%，RSD為0.29%，表明方法重復性良好。

2.8回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品5份，按“2.2”項下的方法制成每1mL中約含頭孢西丁1mg的供試品溶液，分別精密吸取3mL供試品溶液置5個20mL的容量瓶中，再分別精密加入已知濃度的對照品溶液10mL，加磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，結(jié)果頭孢西丁的平均回收率為100.4%，RSD為1.05%。

2.9樣品測定

取3批樣品，按“2.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，以外標法計算頭孢西丁的含量。結(jié)果3批樣品中頭孢西丁的平均百分含量分別為94.43%，94.71%，93.59%。

3.討論

3.1檢測波長的選擇

參照注射用頭孢西丁鈉的國家標準，選擇254nm為檢測波長。

3.2流動相中氫氧化四丁基銨濃度的選擇

以水乙腈（體積比750∶250）為流動相，分別考察流動相中氫氧化四丁基銨濃度依次為0、2.5、5、10及20mmol·L-1時對頭孢西丁色譜行為的影響。結(jié)果表明，當流動相中氫氧化四丁基銨濃度為5mmol·L-1時，頭孢西丁的理論塔板數(shù)和拖尾因子最理想，故氫氧化四丁基銨濃度采用5mmol·L-1。

3.3流動相的pH值選擇

以5mmol·L-1氫氧化四丁基銨溶液乙腈（體積比750∶250）為流動相，改變其pH值，考察pH值對頭孢西丁的色譜行為的影響。結(jié)果表明，在pH4.0時頭孢西丁峰的理論塔板數(shù)最大及拖尾因子最小，故流動相的pH值選擇4.0。

3.4方法耐用性考察

分別對不同廠牌型號的色譜柱進行考察，并與國家藥品標準的色譜條件進行比較。由結(jié)果可見，采用國家藥品標準的流動相試驗達不到國家標準所規(guī)定的要求（理論塔板數(shù)按頭孢西丁峰計算應不低于2 800，拖尾因子應不大于1.5）；只有使用新的色譜柱才能達到要求；用改進后的方法測定，使用不同的色譜柱和不同的高效液相色譜儀均能達到國家標準的規(guī)定，表明本文方法耐用性、重現(xiàn)性良好。 [科]

【參考文獻】

[1]謝英新，房玉蘭.HPLC法測定注射用頭孢西丁鈉頭孢西丁含量[J].黑龍江科技信息，2007，21：226.

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