正交試驗(yàn)法優(yōu)選固衛(wèi)合劑的工藝研究

★ 陳璐 馬儒清 陳曉明（1.廣西陸川縣人民醫(yī)院 陸川537700；.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院南寧53003）

固衛(wèi)合劑為廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院的制劑品種，由黃芪、桂枝、防風(fēng)、白術(shù)、丹皮等14味藥組成，全方具有宣肺散寒、祛風(fēng)固表的功效。方中黃芪為君藥，黃芪甲苷為黃芪的主要活性成分，其測(cè)定方法較多[1-3]。本實(shí)驗(yàn)以黃芪甲苷含量和出膏量為考核指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選固衛(wèi)合劑的工藝，為固衛(wèi)合劑制備工藝提供科研依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津DGU-20A5 高效液相色譜儀；SPD-20A 紫外檢測(cè)儀；GH-252電子分析天平（廣州市艾安得儀器有限公司）；CD-UPT-II-10L超純水制造系統(tǒng)（成都越純科技有限公司）；KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

黃芪甲苷對(duì)照品（批號(hào)110781-200613）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。固衛(wèi)合劑（100 mL/瓶，批號(hào)20120508、20120527、20120620）由廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室制備。乙腈（J.T.Baker）、甲醇（J.T.Baker）均為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備固衛(wèi)合劑的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用L9（34）正交表進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，對(duì)提取次數(shù)、加水量、提取時(shí)間進(jìn)行考察，以黃芪甲苷含量和出膏量為考察指標(biāo)進(jìn)行提取，試驗(yàn)方案見(jiàn)表1。

表1 固衛(wèi)合劑提取條件因素和水平

2.2 樣品溶液的制備

按處方量稱取固衛(wèi)合劑各藥材，牡丹皮、白芷、細(xì)辛、荊芥提取芳香水約200 mL，藥渣與余藥混合，按L9（34）試驗(yàn)列號(hào)各條件分別提取，濾過(guò)，定容至1 000 mL，放置備用。

2.3 出膏量測(cè)定

精密量取各樣品溶液50 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴上蒸干，在105℃干燥3小時(shí)，移至干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，計(jì)算出膏量。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4 黃芪甲苷含量測(cè)定

色譜條件：色譜柱：WondaSil C18 Superb（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（33：67）；檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm；流速1.0 mL/分，進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30℃。理論塔板數(shù)不低于3 000。

2.5 溶液制備

（1）對(duì)照品溶液制備：取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg黃芪甲苷的對(duì)照品溶液；（2）供試品溶液的制備：精密吸取固衛(wèi)合劑3 mL，用水飽和的正丁醇萃取3 次，每次10 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2 次，每次8 mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液。即得。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液各0.1、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL，置10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。吸取上述溶液，各進(jìn)樣20 μL，連續(xù)進(jìn)樣3次。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制工作曲線?；貧w方程為Y=3342X+359.38，r=0.9998，線性范圍在2.0-40.0 μg/mL呈良好的線性關(guān)系。

2.7 樣品測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定并計(jì)算樣品中黃芪甲苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

表2 固衛(wèi)合劑提取工藝正交試驗(yàn)安排

表3 固衛(wèi)合劑提取工藝方差分析

2.8 提取條件

根據(jù)各因素的極差值（R）顯示，影響固衛(wèi)合劑提取效果的因素順序?yàn)锽＞A＞C，即溶劑用量＞提取次數(shù)＞提取時(shí)間。其中因素B對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響（P＜0.05），因素A 與C 對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較小；結(jié)合節(jié)約能源、時(shí)間等因素，最終確定固衛(wèi)合劑提取最優(yōu)工藝條件為A2B2C1，即加10 倍量水提取2次，每次1小時(shí)。

2.9 驗(yàn)證試驗(yàn)

按固衛(wèi)合劑提取最佳工藝條件提取，制備3 批樣品進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，測(cè)定出膏量、黃芪甲苷的含量，結(jié)果出膏量為4.3527±0.0274（g/瓶）；黃芪甲苷含量為4.69±0.0917（mg/瓶）。使用最佳驗(yàn)證工藝參數(shù)，出膏量和黃芪甲苷含量接近正交試驗(yàn)結(jié)果的最高值，說(shuō)明正交試驗(yàn)結(jié)果可靠。

3 討論

固衛(wèi)合劑為我院常用院內(nèi)制劑，多年臨床應(yīng)用于過(guò)敏性鼻炎，表陽(yáng)虛等證效果良好。為保證固衛(wèi)合劑的質(zhì)量及應(yīng)用安全，應(yīng)對(duì)其制劑工藝進(jìn)行優(yōu)化。本文通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出固衛(wèi)合劑的最佳提取條件為加水10 倍量提取2 次，每次1 小時(shí)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該方法可行，可為其制劑工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供科研依據(jù)。

[1]雷曦，秦劍.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)脈定顆粒劑中黃芪甲苷的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2002，13（7）：402-403.

[2]郭洪祝，劉曉峰，于侹，等.高效液相色譜法測(cè)定胰復(fù)康膠囊中黃芪甲苷含量[J].中國(guó)中藥雜志，2000，25（10）：609-611.

[3]錢廣生，劉三康，李章萬(wàn).HPLC測(cè)定黃芪注射液中黃芪甲苷的含量[J].華西藥學(xué)雜志，2002，17（1）：41-42.