HPLC法測(cè)定新咳靈合劑中黃芩苷的含量

★ 許偉英 張繼全 沈潔 任世禾*（.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)院 上海0007；.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥現(xiàn)代制劑技術(shù)教育部工程研究中心 上海003）

新咳靈合劑為我院自制制劑，處方由黃芩、浙貝母、麻黃、夏枯草等中藥組成，具有宣肺止咳的作用，臨床用于感冒后咳嗽，咽癢及慢性支氣管炎等。本制劑長(zhǎng)期在臨床使用，療效確切。鑒于該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚未建立含量測(cè)定項(xiàng)，本文參考《中國(guó)藥典》2010 版一部黃芩苷含量測(cè)定等有關(guān)文獻(xiàn)[1-3]，采用高效液相色譜法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定。該方法簡(jiǎn)便，快速，重現(xiàn)性好，可為完善新咳靈合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100 高效液相儀，VWD 檢測(cè)器（Agilent公司，美國(guó)）；Shiseido Capcell pak MG C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；XS-105 電子分析天平（Sartorius，瑞士）；超純水器（上海賽鴿電子科技有限公司）；T890∕H超聲波清洗器（Elma，德國(guó)）。

1.2 試藥

黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110715-201016 供含測(cè)用）；新咳靈合劑（自制，批號(hào)：110923、111005、111022）；乙腈為色譜純（Merck，德國(guó)），其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)

色譜柱：Shiseido Capcell pak MG C18（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈-水（96：4），流速：1mL∕分，柱溫：25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm，進(jìn)樣量：10μL。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品5.02mg，置50mL 的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成0.1004mg∕mL的黃芩苷對(duì)照品溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

精密吸取本品1mL，加流動(dòng)相稀釋，定容至5mL，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中處方比例制成缺黃芩的樣品，制備陰性對(duì)照溶液，依法測(cè)定。結(jié)果表明，新咳靈合劑中其他成分對(duì)黃芩中黃芩苷的測(cè)定無干擾。

圖1 對(duì)照品、供試品色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取以上黃芩苷對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10mL 至10mL 容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，按以上色譜條件測(cè)定，以峰面積（y）對(duì)進(jìn)樣量（x），進(jìn)行線性回歸，得回歸性方程y=2503.7x+3.6958，r=0.9998，線性范圍為：0.1004-1.0040μg，說明在其線性范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為60.2μg∕mL 對(duì)照品溶液，按以上色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積A值，RSD=0.31%，結(jié)果表明本方法精密度良好。結(jié)果見表2。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取同一批號(hào)為111005 的供試品溶液6份，按2.3 項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣10uL，計(jì)算新咳靈合劑中黃芩苷的含量，結(jié)果RSD 為0.15%，表明供試品溶液重復(fù)性良好。結(jié)果見表3。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.7 項(xiàng)下1 號(hào)樣品溶液，照上述色譜條件，于0、2、4、6、8小時(shí)分別進(jìn)樣，測(cè)定黃芩苷峰面積A值，計(jì)算RSD 為0.39%（n=5），結(jié)果表明供試品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。結(jié)果見表4。

表2 供試品精密度試驗(yàn)結(jié)果

表3 供試品重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表4 供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取0.5mL 已知含量的批號(hào)為111005 的供試品9 份，分別加入濃度為0.1004mg∕mL 的對(duì)照品適量，按照供試品溶液制備項(xiàng)下方法處理，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見表5。

2.10 樣品的含量測(cè)定

取3 批新咳靈合劑，分別按照供試品項(xiàng)下方法制備，按上述色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算黃芩苷的含量。結(jié)果見表6。

表6 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)果討論

3.1 供試品處理方法的選擇，由于本品為合劑，直接稀釋后即可測(cè)定，試驗(yàn)中對(duì)供試品采用不同稀釋倍數(shù)后進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明供試品在稀釋5 倍后目標(biāo)成分的峰面積與對(duì)照品相當(dāng)，故選擇供試品處理方法為，取本品1mL，加流動(dòng)相稀釋定容至5mL。

3.2 流動(dòng)相選擇，實(shí)驗(yàn)過程中曾用文獻(xiàn)[2-3]報(bào)道的黃芩苷的含量測(cè)定方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，采用甲醇：水：磷酸：三乙胺（60：40：0.2：0.2）和乙腈：0.25%磷酸（24：76）作為流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)其分離效果不是很理想，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)，確定乙腈：水（96：4）作為流動(dòng)相。

3.3 本法樣品處理方法簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性及分離度好，能較好測(cè)定新咳靈合劑中黃芩苷的含量，為完善和提高新咳靈合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].第1部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：282-283.

[2]錢穎.HPLC 法測(cè)定清肺合劑中黃芩苷含量[J].首都醫(yī)藥，2011，2：53-54.

[3]胡大強(qiáng)，楊曉軍，傅若秋.HPLC法測(cè)定養(yǎng)咽合劑中黃芩苷的含量[J].中國(guó)藥師，2012，15（3）：332-334.