金蕎麥果實中有效成分的分析

唐 宇，賈洪鋒，孫俊秀，鐘志惠，邵繼榮

金蕎麥(Fagopyrum cymosum)是蓼科(Polygonaceae)蕎麥屬(Fagopyrum Mil1.)，為多年生野生蕎麥種之一。金蕎麥富含表兒茶素、蘆丁和槲皮素等有效活性成分，具有顯著的抗癌、抑制腫瘤細胞侵襲和轉移，以及消炎抗菌等重要作用［1－2］，是生產(chǎn)多種重要的抗癌藥物和癌預防藥物(如復方金蕎麥顆粒、金蕎麥片、和威麥寧膠囊等)的主要原料植物［3－4］，需求量較大。目前金蕎麥的利用主要是其根莖，其研究也多限于根莖，地上部分的研究和利用報道甚少。而由于金蕎麥屬于多年生類型，大量采挖其地下根莖，勢必對其資源造成極大的破壞，極不利于資源的可持續(xù)利用。為此，我們對金蕎麥的果實有效成分進行研究，以期為合理利用金蕎麥野生資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

金蕎麥(F.cymosum)成熟果實，采自于四川省涼山州普格縣五道箐鄉(xiāng)。果實脫殼后，將種子(果仁)和殼(果皮)干燥，于研缽研磨成粉狀備用。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 試劑

表兒茶素標準品:中國藥品生物制品鑒定所，純度98%;蘆丁標準品，中國藥品生物制品鑒定所，純度90.5%;槲皮素標準品:中國食品藥品檢定研究院，純度96.5%。甲醇(西隴化工股份有限公司，HPLC級)，乙腈(西隴化工股份有限公司，HPLC級)，磷酸(西隴化工股份有限公司，AR級)。

1.2.2 實驗儀器

普析通用L9高效液相色譜儀北京普析通用儀器有限責任公司(配有可變波長紫外檢測器和Pgrandsil－STC －C18，150 mm ×4.6 mm ，5 μm 色譜柱);SHIMADZU，AUW220D電子天平 日本島津公司;KQ－5200E超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 表兒茶素的測定

表兒茶素的測定參照袁建平等［5］的方法。精密稱取經(jīng)研細的金蕎麥樣品1.000 0 g，放入100 mL三角瓶中，加入20 mL乙腈，用保鮮膜封口，超聲波(250 W)提取10 min，過濾后的殘渣按照上述方法再提取1次，合并兩次提取液，轉入50 mL容量瓶中定容，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進行分析。色譜分析條件:色譜柱:(150 mm ×4.6 mm ，5 μm);流動相:乙腈 －0.01 mol/L 磷酸溶液(8∶92);流速:1.0 mL/min;柱溫:35.0℃;檢測波長:280 nm;進樣量:20 μL。

1.3.2 蘆丁和槲皮素的測定

蘆丁和槲皮素的測定參照張麗靜［6］和方玲芬［7］的方法。精密稱取經(jīng)研細的金蕎麥樣品1.300 0 g，放入100 mL三角瓶中，加入40 mL甲醇，用保鮮膜封口，超聲波(250 W)提取60 min，過濾后定容至50 mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進行分析。色譜分析條件:色譜柱:(150 mm ×4.6 mm ，5μm);流動相:甲醇 －0.4% 磷酸溶液(1∶1);流速:1.0 mL/min;柱溫:30.0℃;檢測波長:360 nm;進樣量:10μL。

1.3.3 表兒茶素標準溶液的配制及標準曲線

精密稱取0.020 0 g表兒茶素標樣，用乙腈的水溶液(乙腈與水體積比=1∶9)定容至50 mL，作為標準貯備液(表兒茶素400μg/mL)。以標準貯備液為基礎，以乙腈的水溶液(乙腈與水體積比=1∶9)為溶劑，配制表兒茶素梯度稀釋標準溶液，濃度從5 μg/mL到 160 μg/mL(5，10，20，40，80，120，160 μg/mL)，以峰面積 Y為縱坐標，對照品質量濃度(μg/mL)X為橫坐標做圖，繪制標準曲線，獲得其回歸方程為Y=6 071.8X－17 995，表兒茶素在5～160μg/mL的范圍內線性關系良好，相關系數(shù)為R=0.999 6。色譜分析條件同 1.3.1。

1.3.4 蘆丁和槲皮素混合標準溶液的配制及標準曲線

精密稱取0.005 3 g蘆丁標樣，0.005 1 g槲皮素標樣，用甲醇定容至50 mL，作為標準貯備液(蘆丁106μg/mL，槲皮素102μg/mL)。以標準貯備液為基礎，以甲醇為溶劑，配制蘆丁和槲皮素混合梯度稀釋標準溶液，蘆丁濃度從5.3μg/mL到53μg/mL(5.3，10.6，21.2，31.8，42.4，53 μg/mL)，槲皮素濃度從 5.1 μg/mL 到 51 μg/mL(5.1，10.2，20.4，30.6，40.8，51 μg/mL)，以峰面積 Y 為縱坐標，對照品質量濃度(μg/mL)X為橫坐標做圖，繪制標準曲線。色譜分析條件同1.3.2。

蘆丁的回歸方程為Y=74 374X－184 393，蘆丁在5.3～53μg/mL的范圍內線性關系良好，相關系數(shù)為 R=0.999 7;槲皮素的回歸方程為 Y=128 445X－339 760，槲皮素在5.1～51 μg/mL的范圍內線性關系良好，相關系數(shù)為R=0.999 2。

2 結果與分析

2.1 金蕎麥果實中表兒茶素含量

表兒茶素具有抑制腫瘤細胞的侵襲和轉移、抑制腫瘤細胞增殖過程和顯著的抗氧化、清除自由基，抗致突變作用，對痢疾、傷寒、金黃色葡萄球菌等細菌也有極強的抑制作用［8］。是金蕎麥根莖提取物的主要成分，在地上部分的莖、葉中含量很低，在果實中則未見相關報道［9－12］。金蕎麥果實中表兒茶素的HPLC測定結果見圖1、圖2，分析結果見表1。從結果可看出，在金蕎麥果實中含有表兒茶素，但含量很低，且僅僅只在種子部分，果皮中則完全沒有。

圖1 表兒茶素標準品色譜圖

圖2 金蕎麥果實中表兒茶素色譜圖

表1 金蕎麥果實中表兒茶素含量分析結果

2.2 金蕎麥果實中蘆丁和槲皮素的含量

蘆丁具有抗氧化性、抑制脂質過氧化反應、維持血管舒張、減少血管脆性、防止心血管疾病發(fā)生等功能［13－14］。槲皮素是蘆丁的苷元，其作用與蘆丁相似。蘆丁和槲皮素的HPLC測定結果見圖3、圖4，分析結果見表2。從圖3看，蘆丁的保留時間是2.683 min，槲皮素的保留時間是 6.183 min，蘆丁和槲皮素在此條件下能夠達到完全分離。測定結果表明，金蕎麥果實中含有較高的蘆丁含量，但種子和果皮中蘆丁含量分布不同，種子中蘆丁含量大大高于果皮，是果皮含量的2倍多。而槲皮素在果實中含量則很低，種子和果皮中均只有少量槲皮素，是蘆丁含量的幾分之一至十幾分之一(表2)。

圖3 蘆丁和槲皮素標準品色譜圖

圖4 金蕎麥果實中蘆丁和槲皮素色譜圖

表2 金蕎麥果實中蘆丁和槲皮素的分析結果

3 討論

金蕎麥為多年生宿根草本植物，株高0.5～1.5 m，花期7～9月，果期8～10月。其果實為卵狀三棱形瘦果［15］。金蕎麥果實較大，在蕎麥屬各個種中，僅次于栽培蕎麥種甜蕎居第二位，千粒重可達30 g左右，每個單株約結實5～20 g。果實中蛋白質、脂肪、微量元素及維生素的含量均較豐富［16］，有很高的利用價值。

我們先前的研究表明，金蕎麥果實中含有較高的總黃酮［17－19］，但總黃酮中有哪些成分尚不清楚。通過本實驗表明，金蕎麥果實中含有蘆丁、槲皮素和表兒茶素等有效成分，但其中主要以蘆丁為主，槲皮素、表兒茶素等含量甚微。我國古時即將金蕎麥根莖作為中藥入藥，近年來通過對金蕎麥大量的研究，發(fā)現(xiàn)其提取物具有抗菌、抗感染、解熱抗炎、抗癌細胞侵襲和轉移的作用，而其主要成分為表兒茶素，且主要集中在地下根莖部分，地上部分的莖、葉含量則很低［9－12］。本次實驗發(fā)現(xiàn)金蕎麥的果實中也含有少量表兒茶素，值得進一步研究。

在栽培蕎麥種中，由于苦蕎麥營養(yǎng)和藥用價值高，種子中富含蘆丁等黃酮成分，由此被廣泛開發(fā)制成多種保健產(chǎn)品［20］。從本研究結果看，金蕎麥果實中也含有較高的蘆丁含量，因此，金蕎麥果實可開發(fā)利用的潛力巨大。雖然金蕎麥果實中表兒茶素、槲皮素等含量較低，但由于果實中蛋白質含量高、氨基酸組分全，必需氨基酸含量高，富含有效成分蘆丁和維生素、微量元素等，具有很高的經(jīng)濟價值，可將其進行綜合利用，例如果皮可用來制保健枕芯，果仁(種子)可用來生產(chǎn)茶、糕點、面食制品等多種保健產(chǎn)品，既能充分利用資源，又能達到可持續(xù)利用的目的。

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