結(jié)核酶聯(lián)免疫斑點試驗、結(jié)核分枝桿菌DNA測定和痰涂片檢測在肺結(jié)核診斷中的比較研究

唐碩潤 梁 珍

湖南省結(jié)核病醫(yī)院，長沙 410000

結(jié)核?。╰uberculosis，TB）被列為國內(nèi)重大傳染病之一，是目前傳染病中的頭號殺手，是嚴(yán)重危害人類健康的呼吸道傳染病，同時也是單因素致死率最高的傳染性疾病[1-2]。近年來，隨著人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染、艾滋病的流行、移民增加、人口流動性增大以及結(jié)核菌耐藥性的加重，TB的發(fā)病率有上升趨勢。中國是TB高負(fù)擔(dān)國家之一，2010年第五次全國結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查顯示，活動性TB患者459/10萬，菌陽患者66/10萬，提示TB的診治仍然是國家TB控制策略中的重要措施。目前臨床診斷TB的金標(biāo)準(zhǔn)只有結(jié)核菌培養(yǎng)，但其缺乏敏感性，易漏診。本研究選取 2010年 5月～2013年1月在本院做結(jié)核檢測的患者，采用結(jié)核酶聯(lián)免疫斑點試驗（T－SPOT．TB）、結(jié)核分枝桿菌 DNA（TB－DNA）測定和痰涂片方法分別檢測，探討其診斷肺結(jié)核的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年5月～2013年1月在本院做結(jié)核檢測的患者，其中確診肺結(jié)核的患者95例，男60例，女35例，年齡 25～70 歲，平均 （50．17±11．41）歲。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

以肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)（WS288－2008）為標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)核桿菌培養(yǎng)陽性（金標(biāo)準(zhǔn)）或痰檢抗酸桿菌陽性；肺外結(jié)核以癥狀、體征、涂片抗酸桿菌和結(jié)核分支桿菌培養(yǎng)陽性為標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.3 方法

1.3.1 T-SPOT.TB試驗 采集患者外周血，應(yīng)用上海復(fù)興長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供的結(jié)核感染T細(xì)胞斑點診斷試劑盒,按試劑盒說明書判讀檢測結(jié)果。

1.3.2 痰涂片檢測 清晨收集膿性痰，進(jìn)行抗酸桿菌染色，在顯微鏡下觀察染色結(jié)果，以每100個視野抗酸桿菌≥3個為陽性。

1.3.3 TB-DNA的檢測 采用實時熒光定量PCR技術(shù)，應(yīng)用上海克隆生物高技術(shù)有限公司TB-DNA熒光PCR檢測試劑盒，操作和診斷標(biāo)準(zhǔn)參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用 t檢驗，計數(shù)資料采用 χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA的陽性率分別為87.37%、23.16%、64.12%，敏感性分別為 92.22%、24.44%、67.78%，痰涂片敏感性最低，T-SPOT.TB 最高（P＜0.05）（表 1）。

表1 T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA敏感性的比較

3 討論

TB是一個全球性公共衛(wèi)生問題，近年來TB疫情呈明顯上升趨勢?，F(xiàn)在中國成為全球22個TB高負(fù)擔(dān)國家之一，成為僅次于印度的結(jié)核大國。對于感染結(jié)核的患者進(jìn)行早期診斷和治療是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵，也是控制結(jié)核播散的重要環(huán)節(jié)[4]。早期診斷對于控制TB的快速蔓延十分重要，但初期的檢測困難。檢測結(jié)核的方法很多，包括結(jié)核菌素皮膚試驗、結(jié)核菌培養(yǎng)、結(jié)核菌素純蛋白衍化物（PPD）實驗、痰涂片和TB-DNA測定、T-SPOT.TB檢測等，但皮試假陽性和假陰性非常多，檢測不準(zhǔn)確。結(jié)核菌培養(yǎng)則有周期長，假陰、假陽性比例高，難于診斷肺外結(jié)核等缺點；PPD實驗受免疫力及交叉反應(yīng)的影響，敏感性和特異性較低[5-6]。本研究采用痰涂片、TB-DNA測定、T-SPOT.TB方法檢測肺結(jié)核患者，以期為臨床檢測提供依據(jù)。

痰涂片抗酸染色雖然操作簡單、診斷快速、費用低廉，但檢測結(jié)果受技術(shù)人員水平的影響，檢測率低，且無法對肺外結(jié)核及不咯痰的兒童肺結(jié)核作出診斷。TB-DNA測定具有快速檢測、高準(zhǔn)確率等優(yōu)點，但其標(biāo)本來源（如漿膜腔液體、病灶分泌物等）難以獲取[7-8]；T-SPOT.TB則是利用ELISPOT法檢測特異性T細(xì)胞來診斷結(jié)核的一種新方法，它是利用結(jié)核桿菌感染者外周血單核細(xì)胞（PBMC）中存在結(jié)核感染特異性 T細(xì)胞，這些T細(xì)胞在受到致病性結(jié)核桿菌特異抗原刺激后分泌IFN-γ而設(shè)計的 T細(xì)胞免疫斑點試驗，其特異性及靈敏度高。

本研究結(jié)果顯示，T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA敏感性分別為92.22%、24.44%、67.78%，痰涂片敏感性最低，T-SPOT.TB最高，說明T-SPOT.TB檢測結(jié)核具有非常高的敏感性。目前，隨著T-SPOT.TB檢測技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，其可以減少結(jié)核的漏檢率，是一種有效的檢查TB的手段[9]。

綜上所述，T-SPOT.TB較較痰涂片和TB-DNA檢測對TB的診斷有高度的敏感性，值得臨床推廣。

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[9]彭春仙，鄭曉，錢峰，等.T細(xì)胞斑點試驗技術(shù)在結(jié)核病診斷方面的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2011，21（4）：18-20.