原發(fā)性ITP患兒外周血血小板相關(guān)抗體和淋巴細胞亞群的變化及臨床意義

常濤濤 郝國平

原發(fā)性免疫性血小板減少癥，過去也稱為特發(fā)性血小板減少性紫癜是一種獲得性自身免疫性疾病，以沒有明顯原因的單純性血小板減少（血小板計數(shù)<100×109/L）為特征[1]。目前研究普遍認為，原發(fā)性ITP發(fā)病機制不僅與抗血小板抗體所介導(dǎo)的血小板破壞有關(guān)，同時血小板生成減少、T細胞的介導(dǎo)影響也發(fā)揮了重要作用[2]，但確切機制仍未完全明確。本文就血小板相關(guān)抗體、淋巴細胞亞群與原發(fā)性ITP發(fā)生的關(guān)系及其臨床意義進行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 89例原發(fā)性ITP患兒均為2011年9月-2012年8月本院收治的住院患兒，診斷符合文獻診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。其中男54例，女35例，年齡2個月～14歲，平均（4.69±2.79）歲，均為初次發(fā)病。新診斷組（診斷后3個月以內(nèi)血小板減少）66例，持續(xù)性組（診斷后3～12個月血小板持續(xù)減少）23例。選擇25例體檢健康兒童作對照組，男15例，女10例，年齡9個月～12歲，平均（5.07±2.12）歲。兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 主要試劑與儀器 單克隆抗體CD41-PE、FITC標(biāo)記的羊F（ab’）2抗 IgG（陰性對照）、羊 F（ab’）2抗人 IgG（γ）FITC、羊F（ab’）2抗人IgM（μ）FITC、羊F（ab’）2抗人IgA（α）FITC單克隆抗體均為Coulter公司產(chǎn)品。CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5、CD3-FITC/CD（16+56）-PE、CD19-PC5及溶血素均為Coulter公司產(chǎn)品。FC500型流式細胞儀為美國Coulter公司。

1.3 方法

1.3.1 流式細胞術(shù)檢測血小板相關(guān)抗體 將EDTA抗凝全血經(jīng)低速離心富集、洗滌血小板后，以CD41-PE進行熒光標(biāo)記處理，然后分別以FITC標(biāo)記的羊F（ab’）2抗IgG（陰性對照）、羊F（ab’）2抗人IgG（γ）FITC、羊F（ab’）2抗人IgM（μ）FIT、羊F（ab’）2抗人IgA（α）FITC標(biāo)記血小板，洗滌后上機測定。

1.3.2 流式細胞術(shù)檢測淋巴細胞亞群 采集空腹靜脈血2ml（EDTA抗凝）取2支流式細胞儀專用試管分別標(biāo)記1、2，管1加5μl CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5，管2分別加5μl CD3-FITC/CD（16+56）-PE、CD19-PC5，在每支試管中再加入20 μl抗凝全血，充分混勻，室溫避光孵育30 min后，加入溶血素100 μl使紅細胞溶解，1200 r/min離心5 min，棄上清液，PBS洗滌1次，最后以500 μl PBS緩沖液懸浮，上機測定。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以（±s）表示，首先對檢測數(shù)據(jù)采用非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗，組間比較采用秩變換分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 原發(fā)性ITP患者外周血PAIg檢測結(jié)果 新診斷組與持續(xù)性組PAIg（G、M）水平顯著高于對照組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）；新診斷組與持續(xù)性組間血小板抗體水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 原發(fā)性ITP患者外周血淋巴細胞亞群檢測結(jié)果 新診斷性ITP組與持續(xù)性ITP組和對照組比較，CD3+T細胞、CD4+/CD8+T細胞比值、CD3-CD（16+56）+NK細胞降低，CD3+CD8+T細胞、CD19+B細胞升高，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；新診斷性ITP組與持續(xù)性ITP組比較，組間CD3+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD4+/CD8+T細胞比值、CD19+T細胞、CD3+CD8+T細胞差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），兩組CD3-CD（16+56）+NK細胞比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

表1 原發(fā)性ITP患兒與對照組血小板抗體檢測結(jié)果比較（±s）%

表1 原發(fā)性ITP患兒與對照組血小板抗體檢測結(jié)果比較（±s）%

*與對照組比較，P<0.01

表2 原發(fā)性ITP患兒淋巴細胞亞群水平與對照組比較（±s） %

表2 原發(fā)性ITP患兒淋巴細胞亞群水平與對照組比較（±s） %

*與對照組比較，P<0.05，△與新診斷組比較，P<0.05

3 討論

原發(fā)性ITP是兒童期好發(fā)的一種自身免疫性出血性疾病，以自身抗體產(chǎn)生導(dǎo)致血小板破壞增多而致外周血血小板減少。關(guān)于ITP的發(fā)病機制復(fù)雜多樣，其中單核-巨噬細胞系統(tǒng)中自身抗體介導(dǎo)的血小板破壞增加、骨髓巨核細胞損傷或功能異常使血小板生成減少，被認為是經(jīng)典的ITP發(fā)病機制[4]。這些抗體主要表現(xiàn)為IgG增高，有時表現(xiàn)為IgM或IgA增高[5]。本文實驗結(jié)果顯示，新診斷組與持續(xù)性組PAIgG、PAIgM和對照組相比顯著增高（P<0.001），而持續(xù)性組PAIg水平與新診斷組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），這與文獻[6]報道基本一致，提示PAIg檢測無法鑒別新診斷ITP與持續(xù)性ITP，但可作為ITP診斷的輔助指標(biāo)。

近年來隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)ITP患者體內(nèi)存在著多種T淋巴細胞異常，Cines D B等[7]認為T細胞異常導(dǎo)致B細胞激活可能才是ITP真正的發(fā)病機制。本文結(jié)果顯示，新診斷組與持續(xù)性組CD3+T細胞、CD4+/CD8+T細胞比值細胞明顯低于正常兒童，CD3+CD8+T細胞、CD19+B細胞明顯高于正常兒童，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；持續(xù)性組與新診斷組比較，除NK細胞差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）外，其他淋巴細胞亞群差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。NK細胞對B細胞分化有抑制作用，能調(diào)節(jié)吞噬作用和抗體依賴細胞介導(dǎo)的細胞毒作用。研究發(fā)現(xiàn)激活的NK細胞能夠抑制ITP的自身免疫反應(yīng)[8]。ITP患兒NK細胞數(shù)量和對照組相比顯著降低（P<0.05）提示其對B細胞激活、增殖、分化和抗體應(yīng)答抑制能力下降，從而使B細胞異常活化，體液免疫過強而發(fā)病。

綜上所述，細胞免疫與體液免疫在ITP發(fā)病中起了重要作用，血小板相關(guān)抗體和淋巴細胞亞群水平檢測的聯(lián)合使用對ITP的診斷及療效觀察有較好的實用價值，在治療上要注意糾正免疫失衡，運用免疫調(diào)節(jié)手段治療ITP。

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