桃核承氣緩釋片的穩(wěn)定性研究Δ

杜 清，劉 文，徐 劍，湯 瑾（貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴陽(yáng) 550002）

桃核承氣湯出自張仲景《傷寒論》，是活血化瘀的名方。現(xiàn)代藥理研究表明，桃核承氣湯具有降低血黏度、血膽固醇、纖維蛋白原[1]，擴(kuò)張血管，改善微循環(huán)的作用[2]；方中大黃能降低血管阻力、增加血流量、阻滯細(xì)胞鈣內(nèi)流、提高心肌對(duì)氧的利用率、防止血栓形成、改善體循環(huán)功能[3]，適用于預(yù)防和治療血栓性疾病。本課題組將原劑型改為緩釋制劑后，提高了藥物的療效和生物利用度，并采用經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)法對(duì)其有效期進(jìn)行預(yù)測(cè)，了解影響其穩(wěn)定性的因素，為制劑生產(chǎn)工藝、包裝和貯藏條件提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

LC-20 A型高效液相色譜（HPLC）儀、SPD-20 A型紫外-可見檢測(cè)器、Auy220型電子天平（日本島津公司）；HT-20型柱溫箱（天津恒奧科技發(fā)展有限公司）；LRH-150 S型恒溫恒濕培養(yǎng)箱（廣東省醫(yī)療器戒廠）；RC8 D型智能式溶出儀（天津天光光學(xué)儀器有限公司）；DZ-28 C型真空干燥箱（天津泰斯特儀器有限公司）；JZX-DH.300-BS-Ⅱ型電熱恒溫干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療儀器廠）；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）；TDL-5 A型低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（湖南星科科學(xué)儀器公司）；SK8210 HP型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

桃核承氣緩釋片（筆者自制）；大黃酸、大黃素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為200206、200110）；甲醇（色譜純，江蘇漢邦科技有限公司）；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定方法

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：迪馬Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（85∶15，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：431 nm[4]；流速：1.0 ml/min；柱溫：30℃；理論板數(shù)按大黃酸或大黃素峰計(jì)算均不低于7000。

2.1.2 溶液的制備 ①對(duì)照品溶液的制備：精密稱取對(duì)照品大黃酸2.61 mg、大黃素3.12 mg，分別置于25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度分別為0.1044、0.1248 mg/ml的大黃酸對(duì)照品溶液、大黃素對(duì)照品溶液。分別吸取大黃酸對(duì)照品溶液3 ml、大黃素對(duì)照品溶液1 ml，置于同一10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度分別為0.03132、0.01248 mg/ml的混合對(duì)照品溶液。②供試品溶液的制備：取本品適量，置乳缽中研細(xì)，精密稱定0.5 g，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超聲處理（功率：500 W，頻率：53 kHz）20 min使溶解，加甲醇定容，搖勻，即得。進(jìn)樣前過(guò)0.45μm微孔濾膜。③陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例及工藝取不含大黃的其他藥材制成陰性制劑，再按供試品溶液的制備方法制備成陰性對(duì)照溶液。

2.1.3 專屬性考察 取對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性對(duì)照溶液各10μl，注入HPLC儀測(cè)定。結(jié)果表明，供試品溶液在與大黃酸、大黃素對(duì)照品溶液相同出峰時(shí)間處出峰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，置于1 ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，即得系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液。取各混合對(duì)照品溶液10μl注入HPLC儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積積分值（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（x）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得大黃酸、大黃素的回歸方程分別為y＝73533 x+7859.3（r＝0.9999，n＝5）、y＝24352 x+806.1（r＝0.9999，n＝5）。結(jié)果表明，大黃酸和大黃素的進(jìn)樣量分別在0.06264～0.31320、0.02496～0.12480μg范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果，大黃酸和大黃素的RSD分別為0.88%和0.84%（n均為6），表明儀器精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液適量，分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，大黃酸和大黃素的RSD分別為1.35%和1.33%（n均為6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品適量，共6份，分別按“2.1.2②”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定大黃酸和大黃素的峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果，每1g樣品平均含大黃酸1.2451mg，RSD＝1.82%（n＝6）；每1g樣品平均含大黃素0.3382mg，RSD＝1.50%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知大黃酸（1.2543 mg/g）和大黃素（0.3421 mg/g）含量的本品細(xì)粉0.25 g，共9份，分別置25 ml量瓶中。每3份為一組，3組之間按照低質(zhì)量濃度∶中質(zhì)量濃度∶高質(zhì)量濃度＝0.8∶1.0∶1.2的比例分別加入大黃酸（0.1044mg/ml）和大黃素（0.1248mg/ml）的對(duì)照品溶液，按“2.1.2②”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，大黃酸和大黃素的平均加樣回收率分別為99.35%、99.06%，RSD分別為1.25%、1.47%（n均為9）。

2.2 經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)

取桃核承氣緩釋片適量，分裝入干燥潔凈的稱量瓶中，封口，分成4組，分別置60、70、80、90℃恒溫水浴中，按設(shè)定時(shí)間依次定時(shí)取樣，分別測(cè)定含量[5]，計(jì)算不同時(shí)間的相對(duì)百分含量及其對(duì)數(shù)值（lgc），結(jié)果見表1。

表1 經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of classical constant temperature accelerated test

根據(jù)表1中的數(shù)據(jù)，以lgc對(duì)t進(jìn)行線性回歸，得各溫度下的回歸方程，詳見表2。

表2 經(jīng)典恒溫加速試驗(yàn)線性回歸考察結(jié)果Tab 2 Linear regression of classic constant temperature test

表2 結(jié)果表明，各回歸方程線性關(guān)系良好，大黃酸和大黃素的降解變化過(guò)程為一級(jí)反應(yīng)。由此得到相應(yīng)溫度的反應(yīng)速度常數(shù)（K），結(jié)果見表3。

表3 樣品在不同溫度中的KTab 3 Reaction rate constant of samples at different temperatures

根據(jù)Arrhenius指數(shù)定律，將各溫度下K的對(duì)數(shù)lgK對(duì)各熱力學(xué)溫度的倒數(shù)1/T作線性回歸，分別得到回歸方程：lgK＝－5813.8/T+14.192（r＝－0.9844）及l(fā)gK＝－5820.6/T+14.22（r＝－0.9766）。則室溫（25℃）下，大黃酸的有效期t0.9＝0.1054/K25℃＝2.42年；大黃素的有效期t0.9＝0.1054/K25℃＝2.40年。因此，暫定桃核承氣緩釋片的有效期為2年。

2.3 穩(wěn)定性考察

2.3.1 穩(wěn)定性考察項(xiàng)目 包括性狀、脆碎度、溶出度、相對(duì)百分含量。其中，相對(duì)百分含量（＝樣品t時(shí)刻的含量/樣品0時(shí)刻的含量×100%）作為重點(diǎn)考察項(xiàng)目。

2.3.2 強(qiáng)光照射試驗(yàn) 取桃核承氣緩釋片適量，分裝入干燥潔凈的開口稱量瓶中，于溫度為25℃、光照度為4500 lx條件下放置10 d，于第5、10天取樣，按穩(wěn)定性考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，特別要注意外觀變化，結(jié)果見表4。

表4 強(qiáng)光照射試驗(yàn)結(jié)果Tab 4 Results of strong light experiment

表4 結(jié)果表明，桃核承氣緩釋片經(jīng)10 d強(qiáng)光照射后，外觀與0 d比較無(wú)明顯變化，脆碎度和溶出度均符合規(guī)定，而有效成分大黃酸和大黃素的相對(duì)百分含量有下降趨勢(shì)。因此，在生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中應(yīng)采用避光措施，將其裝于棕色瓶中，更有利于藥物的穩(wěn)定。

2.3.3 高溫試驗(yàn) 取桃核承氣緩釋片適量，分裝入干燥潔凈的開口稱量瓶中，在60℃的恒溫箱中放置10 d，于第5、10天取樣，按穩(wěn)定性考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表5。

表5 高溫試驗(yàn)結(jié)果Tab 5 Results of high-temperature experiment

表5 結(jié)果表明，桃核承氣緩釋片經(jīng)10 d高溫（60℃）放置后，其性狀考察項(xiàng)目均符合規(guī)定，大黃酸和大黃素的相對(duì)百分含量變化不大，說(shuō)明高溫對(duì)其穩(wěn)定性影響很小。

2.3.4 高濕度試驗(yàn) 取桃核承氣緩釋片適量，分裝入干燥潔凈的開口稱量瓶中，放置在底部為KNO3飽和溶液（相對(duì)濕度約92.5%RH）的干燥器中10 d，于第5、10天取樣，按穩(wěn)定性考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表6（實(shí)時(shí)準(zhǔn)確稱量試驗(yàn)前后供試品的質(zhì)量，以考察供試品的吸濕潮解性能）。

表6 結(jié)果表明，桃核承氣緩釋片經(jīng)10 d高濕度（相對(duì)濕度約92.5%）放置后，大黃酸和大黃素的相對(duì)百分含量均無(wú)明顯變化，性狀等考察項(xiàng)目均符合規(guī)定，說(shuō)明高濕度對(duì)其穩(wěn)定性影響很小。

3 討論

本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定桃核承氣緩釋片中大黃酸和大黃素的相對(duì)百分含量，發(fā)現(xiàn)其相對(duì)百分含量的對(duì)數(shù)和時(shí)間呈線性關(guān)系，說(shuō)明大黃酸和大黃素的降解遵從一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，由此得到相應(yīng)溫度的K；再根據(jù)Arrhenius指數(shù)定律，推得大黃酸的有效期為2.42年，大黃素的有效期為2.40年，故暫定桃核承氣緩釋片在室溫下的有效期為2年。

各種影響穩(wěn)定性的因素試驗(yàn)結(jié)果表明，強(qiáng)光照射對(duì)桃核承氣緩釋片的穩(wěn)定性有一定的影響，高溫和高濕度對(duì)其穩(wěn)定性影響不大。因此，為了有利于該制劑的質(zhì)量、安全性和有效性，生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中應(yīng)采用適當(dāng)?shù)谋芄獯胧?/p>

本試驗(yàn)為桃核承氣緩釋片的加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)應(yīng)采用的溫度和濕度等條件提供了依據(jù)。

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