我院2009－2011年老年真菌感染菌種分布及其對抗真菌藥敏感性分析

張慧兒，裘莉佩（1.寧波市鎮(zhèn)海區(qū)煉化醫(yī)院檢驗科，浙江寧波31507；.寧波市李惠利醫(yī)院檢驗科，浙江寧波 31507）

假絲酵母菌屬是一大類條件致病菌，可侵犯皮膚、黏膜和內(nèi)臟，表現(xiàn)為急性、亞急性或慢性炎癥，大多為繼發(fā)性感染，亦可進入血液引起敗血癥。近年來，由于各種侵襲性檢查治療手段的開展，如中心靜脈置管、介入治療、器官移植等以及免疫抑制劑和廣譜抗菌藥物的廣泛使用，深部真菌感染病例明顯上升，其中假絲酵母菌屬最為常見，已成為國內(nèi)、外醫(yī)院獲得性血流感染病原體和醫(yī)院感染致病菌的重要組成部分，真菌的感染越來越嚴(yán)重地威脅著患者的生命安全，關(guān)于真菌的研究已經(jīng)成為國內(nèi)、外的研究熱點[1-3]。寧波市鎮(zhèn)海區(qū)煉化醫(yī)院為國家級二級乙等醫(yī)院，其前身為中國石化鎮(zhèn)海煉化公司職工醫(yī)院，醫(yī)院核定床位128張，現(xiàn)有職工294人，日門診量150人左右，患者多為鎮(zhèn)海區(qū)煉化公司在職職工和離退休職工，其中60歲以上老人占1/3左右。目前國內(nèi)、外關(guān)于假絲酵母菌相關(guān)研究較多，但是從年齡階段進行分層研究的較少。老年人由于機體功能以及免疫功能相對較弱，其真菌感染情況以及真菌藥敏情況可能與青壯年有所差異。結(jié)合該院患者特點，現(xiàn)將該院2009－2011年從老年患者標(biāo)本中分離的213例假絲酵母菌的菌種分布及其對抗真菌藥的敏感性進行回顧性分析，以期為老年真菌感染的研究和臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

所有標(biāo)本來源于鎮(zhèn)海區(qū)煉化醫(yī)院臨床各科送檢標(biāo)本，患者年齡均≥60歲，臨床疑似深部真菌感染患者的標(biāo)本包括血液、尿液、膿液、傷口分泌物、泌尿生殖道分泌物、胸水和腹水等，不包括痰標(biāo)本和大便標(biāo)本。

1.2 儀器、設(shè)備及質(zhì)控菌株

A2型生物安全柜（美國Thermo公司）；HF90/HF240型CO2細菌培養(yǎng)箱[香港力康（Heal Force）公司]；哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基[梅里埃（上海）生物化學(xué)制品有限公司]；念珠菌顯色培養(yǎng)基（鄭州博賽生物技術(shù)研究所）；ATB-ID32 C酵母菌鑒定系統(tǒng)及ATB-Fungus 3真菌藥敏試條（法國生物梅里埃公司）。白假絲酵母質(zhì)控菌株為ATCC 64548。

1.3 假絲酵母菌的培養(yǎng)與鑒定

按常規(guī)方法，將臨床標(biāo)本接種于血瓊脂培養(yǎng)基及念珠菌顯色培養(yǎng)基，置于CO2細菌培養(yǎng)箱。24～48h后根據(jù)菌落形態(tài)，結(jié)合培養(yǎng)基說明，在顯色培養(yǎng)基上呈綠色的菌株為白假絲酵母菌，灰藍色者為熱帶假絲酵母菌，紫色者為光滑假絲酵母菌，粉紅色且邊緣有微毛者為克柔假絲酵母菌。其他顏色的菌株采用ATB-ID32 C酵母菌鑒定系統(tǒng)鑒定。

1.4 藥敏試驗

采用ATB-Fungus 3酵母樣真菌藥敏試條，包括5種常用抗真菌藥，即5-氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑，嚴(yán)格按試劑說明操作和結(jié)果判讀。其中，兩性霉素B以生長完全被抑制孔、其余4種藥物以生長明顯減弱孔為判讀折點?？巳峒俳z酵母菌對氟康唑天然耐藥，故無論體外試驗結(jié)果如何均報告為耐藥。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

用WHONET 5.6藥敏試驗統(tǒng)計軟件進行菌種分布及敏感性統(tǒng)計。敏感率的比較采用卡方檢驗，以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1213 株假絲酵母菌屬的分類構(gòu)成比

在213株假絲酵母菌中，白假絲酵母菌占42.3%（90/213），非白假絲酵母菌占57.7%（123/213），見表1。

表1 213株假絲酵母菌菌種分布及構(gòu)成比統(tǒng)計Tab 1 Distribution and constituent ratio of 213 strains of Candida

2.2 假絲酵母菌屬的藥敏分析

213株假絲酵母菌對5-氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑的總體敏感率分別87.8%、100%、93.2%、85.9%和95.9%。以上數(shù)據(jù)顯示假絲酵母菌屬對兩性霉素B、氟康唑、伏立康唑敏感率均在90%以上，而對5-氟胞嘧啶、伊曲康唑敏感率低于90%。90株白假絲酵母菌對上述5種抗真菌藥敏感率均在90%以上，而123株非白假絲酵母菌的敏感率僅兩性霉素B、氟康唑和伏立康唑在90%以上，其余2種抗真菌藥敏感率低于90%。與白假絲酵母菌比較，除兩性霉素B敏感率相同外，非白假絲酵母菌對其他4種抗真菌藥敏感率均有所降低，其中5-氟胞嘧啶與伊曲康唑敏感率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），詳見表2。

表2 假絲酵母菌對5種抗真菌藥的敏感率統(tǒng)計（%%）Tab 2 Sensitive rate of Candida to 5antifungal agents（%%）

3 討論

國內(nèi)眾多醫(yī)學(xué)工作者研究表明，由于各種抗生素的不合理應(yīng)用以及免疫抑制劑的大量使用，使得患者感染真菌的機會大大增加[4-6]。其中假絲酵母菌屬感染在醫(yī)院感染中占有重要地位，且呈上升趨勢[6-7]，尤其以白假絲酵母菌為主，可能與該菌與哺乳動物宿主細胞有很強的親和力有關(guān)。本次從老年患者體內(nèi)分離的213例假絲酵母菌中仍以白假絲酵母菌為主（占42.3%），比起周捷等[8]報道的非老年患者白假絲酵母菌占臨床假絲酵母菌的70.3%，呈明顯降低。在非白假絲酵母菌中，光滑假絲酵母菌明顯升高，占全部假絲酵母菌的29.1%，這可能與標(biāo)本構(gòu)成以及患者構(gòu)成有所差異造成的[6-7]，也有可能與老年患者較青壯年患者更容易感染非白假絲酵母菌有關(guān)。具體原因有待于更加深入的研究。

從本次分析的213株假絲酵母菌藥敏試驗結(jié)果來看，兩性霉素B、氟康唑、伏立康唑?qū)τ诩俳z酵母菌屬敏感性均在90%以上，而5-氟胞嘧啶及伊曲康唑的敏感率相對較低，但敏感率依然保持在85%以上。提示上述抗真菌藥仍然是治療假絲酵母菌感染的有效藥[9]。對于白假絲酵母菌，5種抗真菌藥均具有較高的敏感性，除5-氟胞嘧啶及伊曲康唑外，其余3種藥物敏感率均在95%以上。對于非白假絲酵母菌，除兩性霉素B外，其余4種藥物的敏感性低于白假絲酵母菌，且5-氟胞嘧啶、伊曲康唑敏感率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。另外，分離的4株克柔假絲酵母菌在ATB-Fungus 3真菌藥敏試驗均表現(xiàn)為氟康唑固有耐藥，未見異常情況。

綜上所述，同其他非老年真菌感染者一樣，白假絲酵母菌雖然目前依舊是臨床老年真菌感染中排名首位的菌種，但其所占比例已經(jīng)較非老年患者有所下降，而非白假絲酵母菌中尤其是光滑假絲酵母菌顯著增加。對于白假絲酵母菌，常用5種抗真菌藥仍然高度敏感；而對于非白假絲酵母菌，5-氟胞嘧啶、伊曲康唑耐藥性明顯增加。究其原因，除了與真菌耐藥性固有的變異以外，亦可能與患者長期大量不合理使用抗生素有關(guān)。在調(diào)查中也發(fā)現(xiàn)大多數(shù)患者家中均備有抗生素，平時均有無醫(yī)囑情況下自行服用抗生素的現(xiàn)象。另外，從職業(yè)角度分析來看，本研究大多數(shù)患者年輕時均為煉化廠一線工人，據(jù)研究，從事煤礦、橡膠生產(chǎn)等相關(guān)工作人員與真菌感染存在關(guān)聯(lián)[10-11]。而石油煉化工作與真菌感染之間是否存在關(guān)系，尚未見相關(guān)報道，還有待進一步研究。總之，在患者中加大合理使用抗生素的宣傳力度，主動提高老年人自身免疫力，對于降低真菌感染具有重要現(xiàn)實意義；根據(jù)藥敏結(jié)果使用敏感的抗真菌藥物，對于降低真菌的耐藥性也具有重要意義。

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