抗?fàn)倥＜?xì)菌性腹瀉中藥顆粒劑的藥效學(xué)研究

（河北省石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心，河北石家莊 050041）

犢牛腹瀉病是世界范圍內(nèi)犢牛的常發(fā)病，給養(yǎng)牛業(yè)帶來很大損失。以往細(xì)菌性犢牛腹瀉治療主要用抗生素，見效快，但細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，也可能出現(xiàn)獸藥殘留等。鑒于中草藥具有毒副作用小的優(yōu)勢，開發(fā)高效、新型中藥制劑，勢在必行。

1 儀器與材料

1.1 主要儀器設(shè)備

①賽多利斯電子分析天平，型號：BS210S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司制造；②高頻數(shù)控超聲波清洗器，型號：KQ-250TDV，昆山市超聲儀器有限公司制造；③旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，型號：R205，上海申勝生物技術(shù)有限公司制造。

1.2 藥材與試劑

①試驗用黃連、烏梅、白術(shù)、木香、甘草、黃芪及番瀉葉均購于黑龍江省中藥材批發(fā)市場。②乙醚（分析純），批號：20111014（天津市福晨化學(xué)試劑廠）；硫酸阿托品注射液，批號：1007091（天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司）；醋酸地塞米松片，批號：100413（天津藥業(yè)集團(tuán)有限公司；98%乙醇。

1.3 試驗動物

昆明小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，購自河北醫(yī)科大學(xué)。

2 試驗方法

2.1 抗?fàn)倥＜?xì)菌性腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液制備

①取木香10 g、白術(shù)10 g、甘草10 g、黃芪15 g，加8倍量的蒸餾水，用超聲法提取，提2次，每次1 h。過濾：濾液用70%乙醇進(jìn)行醇沉、過濾，濾液回流除醇、濃縮。②取烏梅15 g、黃連40 g，加8倍量的60%乙醇，用超聲法提取，提2次，每次1 h。過濾，濾液回流除醇、濃縮。③最后將上述提取液合并，濃縮成1 g/ml（即1 ml藥液含有1 g生藥）、2 g/ml（即1 ml藥液含有2 g生藥）、3 g/ml（即1 ml藥液含有3 g生藥）3個濃度梯度，作為藥量高、中、低3個劑量組。

2.2 番瀉葉混懸液制備

取番瀉葉干燥葉片，加沸騰的蒸餾水調(diào)和，再加冷蒸餾水配成8%的混懸液，不必久煮，過濾即得。

2.3 主要藥效學(xué)試驗

2.3.1 對正常小鼠胃腸蠕動的影響[1]

取50只體重在18～22 g的昆明種小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為高、中、低藥物組、空白對照組、阿托品組。飼養(yǎng)觀察1～2 d，有腹瀉的小鼠淘汰。試驗前禁食24h，不禁水。試驗時，每只小鼠按0.1～0.2 ml/10g·bw的劑量灌服對應(yīng)組藥物，空白對照組灌服等量的生理鹽水，0.5 h后每只小鼠灌服5%墨水0.3 ml。0.5 h后頸椎脫臼處死小鼠，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端至幽門、下端至回盲部的腸管，放在托盤中。輕輕將小腸擺成直線，測量腸管長度作為“小腸總長度”。從幽門至墨汁前沿的距離作為“墨汁在腸內(nèi)推進(jìn)距離”。用公式計算墨汁推進(jìn)百分率。

2.3.2 對番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響

取50只昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為高、中、低藥物組、模型對照組、阿托品組。試驗前先飼養(yǎng)觀察1～2d，有腹瀉的小鼠淘汰。試驗前禁食12 h，試驗時，小鼠按0.2 ml/10 g·bw的劑量灌服對應(yīng)組藥物，模型對照組灌服等量的生理鹽水，0.5 h后，小鼠按0.25 ml/10g·bw的劑量灌服8%番瀉葉混懸液，灌服完畢將小鼠單個放在墊有報紙的鼠籠內(nèi)，觀察腹瀉情況。小鼠每腹瀉1次換1次墊紙，每隔1 h累積計算小鼠稀便率及稀便級，連續(xù)觀察5 h。按公式計算腹瀉指數(shù)。

腹瀉指數(shù)=稀便率（每只動物所排稀便數(shù)與總便數(shù)之比）×稀便級（以稀便污染濾紙形成污跡面積的大小定級，分為4級：1級為污染直徑小于1cm；2級污染直徑1～1.9 cm；3級污染直徑2～3 cm；4級污染直徑大于3 cm）。

統(tǒng)計時先逐個統(tǒng)計每1堆稀便的級數(shù)，然后將該鼠所有稀便級數(shù)相加除以稀便次數(shù)，得到稀便的平均級數(shù)為稀便級。

級數(shù)直徑的測量：糞便形狀為圓形，則直接量直徑；若糞便形狀為橢圓形則測量橢圓長軸和短軸的長度，相加除以2為糞便直徑。

觀察時間：給藥后的5 h內(nèi)。

干便與稀便的區(qū)分：以濾紙上有無污跡為標(biāo)準(zhǔn)。糞便次數(shù)以每?；蛎慷眩ú荒芊智辶?shù)者）為1次。

3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用SPSS12.0軟件及Excel數(shù)據(jù)處理工具進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，以平均值（）±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示。

4 結(jié)果

4.1 對正常小鼠胃腸蠕動的影響

抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液高、中、低劑量組和阿托品組對小鼠正常胃腸蠕動均有抑制作用，抑制率分別為15.8%、12.0%、7.3%和22.2%。

抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液高、中、低劑量組和阿托品組與空白對照組相比較，差異極顯著（p<0.01）；抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液高、中、低劑量組與阿托品組相比較，差異極顯著（p<0.01）。結(jié)果詳見表1。

表1 抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液對正常小鼠胃腸蠕動的影響（±s，n =10）

表1 抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液對正常小鼠胃腸蠕動的影響（±s，n =10）

a 與空白對照組比較：**p<0.01b 與阿托品組比較：##p<0.01

組別 動物數(shù)（只） 推進(jìn)率（%） 抑制率（%）空白對照組 10 80.18±3.61 -阿托品組 10 62.34±2.98** 22.2低劑量組 10 74.34±2.56** ## 7.3中劑量組 10 70.56±3.76** ## 12.0高劑量組 10 67.49±4.27** ## 15.8

4.2 對番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響

抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液高、中、低劑量組及阿托品組在2h內(nèi)的腹瀉指數(shù)與模型對照組相比較，差異極顯著（p<0.01），低劑量組與阿托品組比較，差異顯著（p<0.05）；3 h內(nèi)阿托品組和中劑量組腹瀉指數(shù)與模型對照組比較，差異極顯著（p<0.01），高劑量組和低劑量組與模型對照組比較差異顯著（p<0.05）。結(jié)果詳見表2。

表2 抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液對番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響（ ±s，n =10）

表2 抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液對番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響（ ±s，n =10）

a 2h內(nèi)與模型對照組比較：**p<0.01；與阿托品組比較：#p<0.05b 3h內(nèi)與模型對照組比較：**p<0.01，*p<0.05

腹瀉指數(shù)1h 2h 3h 4h 5h模型對照組 10 0.61±0.70組別 動物數(shù)（只）0.76±0.39阿托品組 10 0.23±0.42 2.05±0.65 1.87±0.66 1.04±0.42 0.65±0.46低劑量組 10 0.54±0.52 0.65±0.50**0.99±0.49**0.88±0.46 0.74±0.34中劑量組 10 0.30±0.48 1.24±0.56**#1.26±0.44*0.93±0.47 0.61±0.29高劑量組 10 0.23±0.32 0.91±0.45**1.09±0.41**0.91±0.38 0.60±0.33 0.70±0.56**1.11±0.52*0.83±0.47

5 討論

本試驗通過抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液對胃腸蠕動的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液高、中、低劑量組對胃腸蠕動均有明顯抑制作用（p<0.01）與空白對照組相比，抑制率分別為15.8%、12.0%和7.3%。

本試驗通過給小鼠灌服番瀉葉混懸液造成急性腹瀉。在給藥1～5h內(nèi)觀察小鼠的腹瀉指數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠腹瀉指數(shù)在2h內(nèi)達(dá)到最高，隨后逐漸降低，這可能是因為動物在經(jīng)過12 h的禁食之后，排便高峰期主要在造模后2 h以內(nèi)，隨后排便的次數(shù)和數(shù)量都減少了?？辜?xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液高、中、低劑量組在2h內(nèi)腹瀉指數(shù)與模型對照組相比差異極顯著（p<0.01），3h內(nèi)差異顯著（p<0.01，p<0.05），1h、4h、5h內(nèi)無差異。

本試驗中導(dǎo)致試驗性腹瀉的番瀉葉是刺激大腸性致瀉劑[2]，番瀉葉所含蒽甙在大腸內(nèi)細(xì)菌酶的作用下還原成蒽酮（或蒽酚），后者刺激腸粘膜并能抑制鈉離子從腸腔向腸粘膜上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)，使大腸內(nèi)水分增加、蠕動亢進(jìn)而致腹瀉[3]。

綜上所述，抗細(xì)菌性犢牛腹瀉中藥顆粒劑原料藥復(fù)方提取液有明顯抑制胃腸蠕動和抗腹瀉的作用，且隨劑量增加其作用加強(qiáng)。但其具體抑制胃腸蠕動和抗腹瀉的作用機(jī)制是抑制膽堿能神經(jīng)、5-HT神經(jīng)興奮及遞質(zhì)釋放；抑制內(nèi)源性、外源性刺激誘導(dǎo)的肌漿網(wǎng)鈣離子釋放，降低平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平，促進(jìn)腸管舒張；抑制胃腸平滑肌上的H1受體興奮還是促進(jìn)腸道對水、鈉的吸收，降低腸內(nèi)壓，維持腸道內(nèi)水、電解質(zhì)的平衡，起到緩瀉有必要做進(jìn)一步的研究討論。

[1] 徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學(xué)[M].第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001.

[2]張明發(fā).小檗堿的抗腹瀉和抗炎作用[J].中國藥理學(xué)報.1989,10(2):174-176.

[3]陳正倫.獸醫(yī)中藥藥理學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1995.