氧氟沙星滴眼液無(wú)菌檢查方法的建立

趙雪衛(wèi) 王紅然 張西果(石家莊格瑞藥業(yè)有限公司)

氧氟沙星滴眼液具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)的特點(diǎn)，對(duì)革蘭氏陰性菌、陽(yáng)性菌群均有較強(qiáng)的抗菌作用。 對(duì)葡萄球菌、化膿性鏈球菌、溶血性鏈球菌、腸球菌、肺炎球菌、大腸桿菌、檸檬酸細(xì)菌屬、肺炎桿菌、腸菌屬、沙雷氏菌屬、變形桿菌屬、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、不動(dòng)桿菌屬、彎曲桿菌屬、衣原體屬敏感性菌種等感染有效。 因此被用于治療細(xì)菌性結(jié)膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、淚囊炎、術(shù)后感染等外眼感染。 《中國(guó)藥典》2010 年版二部將滴眼液的微生物限度檢查項(xiàng)目修訂為無(wú)菌檢查項(xiàng)目。 根據(jù)《中國(guó)藥典》2010 年版二部的規(guī)定當(dāng)建立藥品的無(wú)菌檢查方法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法的驗(yàn)證，以證明所采用的方法適用于該藥品的無(wú)菌檢查。針對(duì)氧氟沙星滴眼液的抑菌性質(zhì)采用適宜的方法消除其抑菌活性，建立了該品種的無(wú)菌檢查方法。

表1 陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)菌不同沖洗量的結(jié)果

一、 樣品與菌種

1.1 樣品：氧氟沙星滴眼液。 規(guī)格：5ml∶15mg；批號(hào)：121101、121102、121103

1.2 驗(yàn)證試驗(yàn)用菌種：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉六種陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)菌，菌種來(lái)源于中檢所。

二、 實(shí)驗(yàn)與結(jié)果

2.1 菌液制備：按《中國(guó)藥典》2010 年版二部附錄XI H 進(jìn)行。

2.2 供試品制備：取樣品原液作為供試品，每筒過(guò)濾供試品10 支。

2.3 薄膜過(guò)濾法：取一次性全封閉集菌三聯(lián)培養(yǎng)器，先用含0.5%聚山梨酯80 的PH7.0 無(wú)

菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液少量潤(rùn)濕濾膜。 將供試品30 支通過(guò)培養(yǎng)器， 供試品全部過(guò)濾完畢后， 用含0.5%聚山梨酯80 的PH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗， 細(xì)菌每筒分別沖洗400ml、500ml、600ml，真菌每筒分別沖洗300ml、400ml、500ml，每次沖洗100ml， 在最后一次沖洗液中加入小于100cfu 的各陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)菌，過(guò)濾，每筒培養(yǎng)器中加入100ml 含0.2mol/L 硫酸鎂5ml 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或改良馬丁培養(yǎng)基， 作為試驗(yàn)組筒。 另取已潤(rùn)濕的全封閉培養(yǎng)器加入陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)菌和相應(yīng)培養(yǎng)基，作為陽(yáng)性對(duì)照筒，再取已潤(rùn)濕的二聯(lián)全封閉培養(yǎng)器，加入相應(yīng)培養(yǎng)基，作為陰性對(duì)照筒。 按規(guī)定溫度培養(yǎng)3～5 天，觀察不同沖洗量對(duì)六種陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)菌的影響，結(jié)果見(jiàn)表1。

三、討論

3.1 氧氟沙星滴眼液是喹諾酮類(lèi)藥物，抗菌譜廣，抗菌性強(qiáng)，薄膜過(guò)濾時(shí)易吸附殘留于濾膜上，沖洗不干凈，即使?jié)舛鹊停惨种撇糠株?yáng)性試驗(yàn)菌的生長(zhǎng)。 因此在樣品過(guò)濾沖洗后與培養(yǎng)基中加入含F(xiàn)e+2、Mn+2、Mg+2 等離子的化合物， 這些離子與喹諾酮類(lèi)藥物絡(luò)合，能形成穩(wěn)定的六元環(huán)絡(luò)合物。 掩蓋氟喹諾酮類(lèi)藥物的抗菌活性基團(tuán)。使其抗菌活性消失。本文采用的是含0.5%聚山梨酯80 的PH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液作為沖洗液，沖洗后加培養(yǎng)基， 于100ml 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中加5ml 滅菌的0.2mol/L 硫酸鎂溶液，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌均生長(zhǎng)良好。 5ml 滅菌的0.2mol/L 硫酸鎂溶液對(duì)這四種菌的生長(zhǎng)也幾無(wú)影響。 培養(yǎng)基中加滅活劑硫酸鎂，可減少?zèng)_洗量。

3.2 氧氟沙星滴眼液對(duì)真菌也幾無(wú)抑制作用，但滴眼液中含羥苯乙酯等防腐劑，因此白色念珠菌、黑曲霉驗(yàn)證也要進(jìn)行適當(dāng)?shù)臎_洗，才能保證對(duì)其無(wú)抑菌作用。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)；中華人民共和國(guó)藥典（二部）；北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010 年版，附錄：103-107。

[2]高紅 李凱 朱慧琴；鹽酸左氧氟沙星滴眼液無(wú)菌檢查方法的建立；中國(guó)科技縱橫雜志，2011, 21（6）：357-357。