分散固相萃取凈化超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法研究茶葉與茶湯中茚蟲威殘留降解規(guī)律

張新忠，羅逢健，陳宗懋* ，劉光明，樓正云

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究中心，浙江 杭州 310008;2.農(nóng)業(yè)部茶及飲料植物產(chǎn)品加工與質(zhì)量控制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310008;3.農(nóng)業(yè)部茶葉產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310008)

噴施化學(xué)農(nóng)藥是防治茶樹病蟲害最快、最有效的方法。隨著科學(xué)家對(duì)茶葉中水溶性農(nóng)藥殘留認(rèn)識(shí)的日益清晰，茶園使用較多的有機(jī)磷類、吡蟲啉、啶蟲脒等農(nóng)藥，因水溶性強(qiáng)易在茶湯中浸出，其在茶葉中殘留的安全性受到越來越多的關(guān)注［1］。近年來國家正在大力發(fā)展茶園替代農(nóng)藥的研究，茚蟲威是其中一種對(duì)茶樹假眼小綠葉蟬等有很好防治效果的低毒殺蟲劑，用于替代吡蟲啉等農(nóng)藥［2］。

茚蟲威(Indoxacarb，CAS No.:144171－61－9，C22H17ClF3N3O7)化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1A，其水溶解度小，具有觸殺和胃毒作用，能阻斷鈉離子通道使昆蟲神經(jīng)細(xì)胞喪失功能，殺蟲譜廣對(duì)各齡期幼蟲有效［3－4］。近年來已有文獻(xiàn)報(bào)道了茚蟲威在甘藍(lán)［5］、小白菜［4，6］、棉花［7］、菜用大豆［8］等作物上的殘留檢測方法及消解動(dòng)態(tài)研究，及其在多種動(dòng)植物源食品、飼料中殘留的檢測方法［9－11］，方法多采用氣相色譜測定，亦有對(duì)茶葉中茚蟲威殘留檢測方法的報(bào)道［9，12－14］，但尚未見有關(guān)茶湯中茚蟲威殘留檢測及其在茶園茶葉中的消解動(dòng)態(tài)、最終殘留的研究，以及茶葉－茶湯過程的浸出率及飲用安全性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究。目前我國大陸、國際食品法典委員會(huì)(CAC)等國家和地區(qū)組織均未制訂茚蟲威在茶葉中的最大殘留限量(MRL)值，而歐盟和我國臺(tái)灣省規(guī)定為0.05 mg/kg，日本為0.02 mg/kg［15］。因此有必要進(jìn)行茶園茶葉、茶湯中茚蟲威殘留降解的研究，明確茚蟲威在茶葉生長及飲用過程中的遷移降解規(guī)律，并進(jìn)行安全性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，為茚蟲威在茶園的安全使用和茶葉飲用安全提供科學(xué)依據(jù)。

本文采用分散固相萃取技術(shù)凈化茶葉，固相萃取柱富集凈化茶湯，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC－MS/MS)測定，建立了茶葉成茶、鮮葉和茶湯中茚蟲威殘留的分析方法，并利用該方法首次研究了2010～2011年150 g/L茚蟲威乳油在湖南永定、福建松溪兩地茶園的殘留消解動(dòng)態(tài)和最終殘留試驗(yàn)，以及茚蟲威在茶葉－茶湯沖泡過程的浸出率并進(jìn)行相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究。

圖1 茚蟲威的化學(xué)結(jié)構(gòu)式(A)及ESI+MS/MS質(zhì)譜圖(B)Fig.1 Chemical structure(A)and ESI+MS/MS spectrum(B)of indoxacarb

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

UPLC/Quattra PremierXE超高效液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(UPLC－MS/MS)，配有電噴霧電離(ESI)源，MassLynx 4.1質(zhì)譜工作站(美國Waters公司);高速離心機(jī)(德國Sigma公司);電子分析天平(0.000 1 g和0.01 g，瑞士Mettler－Toledo公司);R－210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司);KQ－250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);T－18高速均質(zhì)勻漿器(德國IKA公司);DFT－200手提式高速萬能粉碎機(jī)(浙江溫嶺市林大機(jī)械有限公司);Vortex Genie2型渦旋振蕩器(美國Scientific Industries);MZ 2C型真空抽氣泵(德國Vaccubrand公司);6位玻璃大體積負(fù)壓固相萃取裝置、0.22 μm Filter Unit濾膜(天津博納艾杰爾科技有限公司);Bond Elut C18－SPE柱(500 mg/6 mL，美國Agilent公司)。

乙腈、甲酸、無水MgSO4、NaCl、氨水(25%～28%)(分析純，上海試四赫維化工有限公司);甲醇(色譜純，韓國SK Chemicals公司);純凈水(杭州娃哈哈有限公司);5%氨水乙腈:取95 mL乙腈，加入5 mL氨水配制而成;Cleanert SCX、C18－N、NH2、PSA、C18填料(40～60 μm)及 Cleanert Pesti-Carb填料(即石墨化炭黑GCB，38～124 μm)均購自天津博納艾杰爾科技有限公司;取0.30 g C18與0.050 g GCB裝至10 mL離心管制成 C18與GCB混合分散萃取管;茚蟲威標(biāo)準(zhǔn)品(98%，德國Dr.Ehrenstorfer公司);150 g/L茚蟲威乳油(凱恩，美國杜邦公司)。

1.2 殘留實(shí)驗(yàn)

1.2.1 消解動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn) 在福建松溪和湖南永定兩地選擇長勢均勻的茶園，分別于2010年、2011年的7～8月以制劑500 mL/hm2(有效成分75.0克/公頃)劑量，每畝兌水60 L，噴霧茶園茶葉1次，施藥后間隔2 h(原始沉積量)、1、2、3、5、7、10、14、21 d，采用隨機(jī)法15點(diǎn)采摘茶葉鮮葉，－18℃下存放備用，分別測定鮮葉上的茚蟲威殘留量，獲得對(duì)應(yīng)的消解動(dòng)態(tài)曲線和半衰期。設(shè)3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)小區(qū)面積為22 m2。施藥前，采集茶葉樣品，用作空白對(duì)照。

1.2.2 最終殘留實(shí)驗(yàn) 在“1.2.1”的相同地點(diǎn)和相同時(shí)間按照制劑333.33 mL/hm2(有效成分50.0克/公頃，推薦劑量)和制劑500 mL/hm2(有效成分75.0克/公頃)兩個(gè)劑量濃度，每畝兌水60 L，藥液質(zhì)量濃度分別為833.33 mg/L和1 250.00 mg/L，采用手動(dòng)背負(fù)式噴霧器施藥1～2次，每次施藥間隔7 d，最后一次施藥后5、7、10、14 d分別以隨機(jī)法15點(diǎn)采摘茶葉鮮葉一芽二葉、三葉，將鮮葉按常規(guī)方法加工制成成茶，－18℃下存放備用，測定樣品中茚蟲威的殘留量。每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)小區(qū)面積為22 m2，并設(shè)空白對(duì)照。

1.2.3 成茶－茶湯沖泡過程中茚蟲威殘留的浸出率研究 取3份茚蟲威最終殘留成茶樣，各稱取3.00 g，按照茶葉感官評(píng)審方法標(biāo)準(zhǔn)［16］采取1∶50比例加入100℃沸水150 mL，沖泡10 min(2倍標(biāo)準(zhǔn)要求)，制得茶湯，第一次沖泡后濾出茶湯，再加入100℃沸水150 mL，依次沖泡3次，分別按照“1.3.2”方法測定原始成茶樣、3次沖泡所得茶湯中的茚蟲威含量，計(jì)算成茶－茶湯沖泡過程中茚蟲威的浸出率，進(jìn)行飲用安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

1.3 分析方法

1.3.1 檢測條件 色譜條件:色譜柱Acquity UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm);柱溫40℃;進(jìn)樣量5 μL;樣品盤溫度8℃;流量0.20 mL/min;采用0.10%甲酸甲醇－水(2∶98，體積比)溶液(A)和0.10%甲酸的乙腈溶液(B)組成的流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，洗脫程序:0→1.0min，40%A保持1 min;1.0→3.0 min，40% A→10.0% A;3.0→5.5 min，10.0% A→5.0% A;5.5→8.1 min，5.0%A→1.0%A;8.1→8.2 min，1.0%A→40%A，然后保持1.8 min。茚蟲威保留時(shí)間為3.98 min。

質(zhì)譜條件:電噴霧正電離模式多反應(yīng)監(jiān)測掃描方式，ESI+－MRM;電噴霧電壓2.5 kV;離子源溫度120℃;脫溶劑氣溫度300℃;錐孔反吹氣N2，流速50 L/h;脫溶劑氣N2，流速500 L/h;碰撞氣Ar，流速0.15 mL/min;倍增電壓650 V;二級(jí)質(zhì)譜母離子駐留時(shí)間0.100 s;錐孔電壓25 V;定量離子對(duì):母離子m/z 528，子離子m/z 150，碰撞裂解電壓35 V;定性離子對(duì):母離子m/z 528，子離子m/z 218，碰撞裂解電壓30 V。

1.3.2 提取凈化 茶鮮葉、成茶:分別稱取磨碎后的樣品鮮葉10.00 g(成茶5.00 g)，置于100 mL塑料離心管中，加10 mL水渦旋混合均勻，10 min后，加入10 mL 5%氨水乙腈渦旋混勻，浸泡過夜，超聲15 min，加入5 g NaCl混勻，均質(zhì)1 min，5 000 r/min離心5 min，分取上層乙腈層4 mL至裝有0.30 g C18+0.05 g GCB的10 mL離心管中，混勻渦旋1 min，5 000 r/min離心5 min，過0.22 μm濾膜，UPLC－MS/MS進(jìn)樣5 μL，基質(zhì)外標(biāo)法測定。

茶湯:稱取茶葉3 g，按照茶葉感官評(píng)審方法標(biāo)準(zhǔn)［16］以1∶50比例加入沸水150 mL，沖泡10 min(2倍標(biāo)準(zhǔn)要求)，制得茶湯，待冷卻后，分取100 mL茶湯上樣至Bond Elut C18－SPE柱，5 mL水－甲醇(7∶3)淋洗，抽干5 min，加入20 mL甲醇洗脫，接收洗脫液濃縮近干，加入1 mL甲醇－水(9∶1)超聲溶解，渦旋混勻，過0.22 μm濾膜，UPLC－MS/MS進(jìn)樣5 μL，基質(zhì)外標(biāo)法測定。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制與標(biāo)準(zhǔn)曲線 稱取0.010 0 g茚蟲威標(biāo)準(zhǔn)品至燒杯中，乙腈溶解并轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶，定容，配制成200 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于－18℃下避光保存。將儲(chǔ)備液用乙腈稀釋成20.0、5.0、1.0、0.5、0.1、0.05、0.01 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，UPLC－MS/MS進(jìn)樣5 μL測定，以濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，獲得茚蟲威的標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)及儀器檢出限。

1.3.4 加標(biāo)回收率與精密度 稱取經(jīng)測定不含茚蟲威的茶鮮葉(成茶、茶湯)空白樣品，分別添加0.1、1.0、20.0 mg/L(茶湯為0.04、0.40、4.0 mg/L)的標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL，渦旋混勻后放置過夜12 h(茶湯為30 min)以更接近于實(shí)際樣品農(nóng)藥殘留情況，然后按照“1.3.2”方法加入水和乙腈進(jìn)行提取與凈化，每個(gè)加標(biāo)濃度重復(fù)5～6次;同時(shí)將按照“1.3.2”處理后得到的空白茶鮮葉(成茶、茶湯)樣品溶液，加入相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液后定容，作為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測定，計(jì)算加標(biāo)回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差及方法定量下限。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜質(zhì)譜條件優(yōu)化

已有文獻(xiàn)對(duì)蔬菜、水果和土壤中的茚蟲威殘留分析時(shí)，多采用 GC/ECD［4，6－11，17］、GC － SIM/MS［18］和 HPLC［19］方法，較少采用 LC － MS/MS［17，20］或 UPLC － MS/MS［5］。茶葉基質(zhì)復(fù)雜，研究時(shí)常采用色譜質(zhì)譜分析［12－14］，本文采用UPLC－ESI+MS/MS對(duì)茚蟲威進(jìn)行分析，優(yōu)化了錐孔電壓和噴霧電壓，得到準(zhǔn)分子離子峰［M+H］+(m/z 528)，對(duì)準(zhǔn)分子離子峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜子離子掃描，得到碎片離子信息，優(yōu)化碰撞裂解能量，20 V碰撞電壓下茚蟲威的ESI+MS/MS質(zhì)譜圖見圖1B，最終的優(yōu)化條件見“1.3.1”，選擇子離子m/z 150作為定量離子，m/z 218用來輔助定性，分別表示準(zhǔn)分子離子可能經(jīng)過斷裂生成(m/z 262)之后，再經(jīng)過六元過渡態(tài)重排、中心丟失后而生成的碎片離子(m/z 218)和(m/z 150)。

研究中以BEH C18色譜柱和保留能力更強(qiáng)的HSS T3色譜柱進(jìn)行分析，由于茚蟲威本身保留較強(qiáng)，分析時(shí)采用BEH C18色譜柱即能獲得很好的效果，因此最終選擇BEH C18色譜柱用于茚蟲威分離，選擇0.10%甲酸/甲醇－水(2∶98)、0.10%甲酸/乙腈溶液作為流動(dòng)相，其中流動(dòng)相中添加甲酸有助于樣品的離子化。

2.2 前處理方法優(yōu)化

文獻(xiàn)［5］的研究結(jié)果表明，相對(duì)于乙酸乙酯、二氯甲烷和丙酮對(duì)蔬菜中茚蟲威殘留的提取效果，用乙腈提取的回收率最好，且引入雜質(zhì)較少。前期研究［21］亦表明，乙腈比丙酮更適合茶葉中茚蟲威殘留提取，而且采用5%氨化乙腈溶液，還可降低茶葉中茶多酚、咖啡堿的影響。

分散固相萃取凈化技術(shù)在樣品前處理方面具有快速、簡單、便宜、高效等優(yōu)點(diǎn)，近年來在茶葉農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用增多［22－24］，凈化吸附填料多采用PSA和GCB，同時(shí)加以MgSO4吸附殘余水分。本研究中考察了0.30 g不同填料(SCX、C18、C18－N、NH2、PSA)、0.20 g GCB、0.50 g MgSO4對(duì)1 mL 0.10 mg/L茚蟲威標(biāo)準(zhǔn)溶液(乙腈溶劑)的吸附效果，回收率分別為107%、101%、103%、110%、98%、21%、107%;當(dāng)茚蟲威濃度降低為0.020 mg/L時(shí)，分別采用0.20 g SCX、C18、C18－N、NH2、PSA和0.10 g GCB填料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，回收率分別為89%、96%、93%、99%、110%和54%，除GCB和SCX外，均有較好的回收效果?？紤]到后續(xù)采用BEH C18色譜柱進(jìn)行分析，為減少色譜柱的負(fù)載，采用C18填料作為凈化吸附劑，并加入GCB除去色素類雜質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)最終采用0.30 g C18與0.05 g GCB填料混合凈化4 mL提取液，獲得了較好的萃取效果。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線、靈敏度、回收率與精密度

在優(yōu)化條件下，考察了方法的線性關(guān)系，結(jié)果顯示，在0.01～20.0 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，茚蟲威的線性方程為Y=8 723.6X+4 333.9，相關(guān)系數(shù)r為0.993 7，該方法對(duì)茚蟲威的檢出限為0.025 ng。圖2A為0.010 mg/L茚蟲威標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖。

按照“1.3.4”進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，同時(shí)配制相應(yīng)濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定量，回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，茚蟲威在低、中、高加標(biāo)濃度下，平均回收率為96%～107%，RSD為1.3%～7.8%，其中成茶中平均回收率為102%～107%，RSD為4.4%～7.8%;鮮葉中平均回收率為102%～103%，RSD為1.7%～4.4%;茶湯中平均回收率為96%～103%，RSD為1.3%～4.1%。本方法中茚蟲威在茶鮮葉、成茶中的定量下限為5 μg/kg，茶湯中的定量下限為0.10 μg/L。圖2B～C為加標(biāo)樣品的色譜圖。

表1 茚蟲威在茶鮮葉、成茶和茶湯中的加標(biāo)回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差及定量下限Table 1 Spiked recoveries，relative standard deviations(RSDs)and limits of quantitation(LOQs)of indoxacarb in fresh tea leaves，made tea and tea infusion

2.4 茚蟲威在茶鮮葉上的消解動(dòng)態(tài)

按照“1.2.1”進(jìn)行150 g/L茚蟲威乳油在茶鮮葉上的消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)，依照“1.3”測定鮮葉中茚蟲威的殘留量，結(jié)果見表2。結(jié)果表明:噴藥7 d后，消解率均達(dá)到90%以上;2010年茚蟲威在湖南永定和福建松溪茶園茶鮮葉上的消解動(dòng)態(tài)方程分別滿足方程y=10.960 5e－0.3663x和y=11.938 1e－0.4895x，相關(guān)系數(shù)r分別為0.941 6和0.991 0，半衰期分別為1.89 d和1.42 d;2011年茚蟲威在湖南永定和福建松溪茶園茶鮮葉上的消解動(dòng)態(tài)方程分別為y=4.167 4e－0.2803x和y=1.761 1e－0.4284x，相關(guān)系數(shù)r分別為0.958 6和0.974 0，半衰期分別為2.47 d和1.62 d。兩年兩地試驗(yàn)表明茚蟲威在茶園鮮葉上的半衰期為1.42～2.47 d，屬于易降解農(nóng)藥。

表2 150 g/L茚蟲威乳油在茶鮮葉上的消解動(dòng)態(tài)平均值數(shù)據(jù)Table 2 The average dynamic degradation data of 150 g/L indoxacarb emulsifiable concentrates in fresh tea leaves

2.5 茚蟲威在成茶茶葉中的最終殘留結(jié)果

按照“1.2.2”進(jìn)行150 g/L茚蟲威乳油在成茶茶葉中的最終殘留試驗(yàn)，依照“1.3”分析測定成茶中茚蟲威的殘留量，數(shù)據(jù)結(jié)果見表3。數(shù)據(jù)顯示，按照推薦劑量制劑333.33 mL/hm2(有效成分50.0克/公頃)施藥1次，間隔5 d后成茶中茚蟲威殘留量為0.918～2.520 mg/kg，7 d后殘留量為0.389～1.173 mg/kg，10 d后殘留量為0.028～0.319 mg/kg，14 d后殘留量為0.019～0.096 mg/kg;施藥2次，間隔5 d后成茶中茚蟲威殘留量為0.956～6.884 mg/kg，7 d后殘留量為0.447～2.611 mg/kg，10 d后殘留量為0.074～1.973 mg/kg，14 d后殘留量為0.010～0.219 mg/kg。

按照高劑量(1.5倍推薦劑量)制劑500 mL/hm2(有效成分75.0克/公頃)施藥1次，間隔5 d后成茶中茚蟲威殘留量為0.874～3.193 mg/kg，7 d后殘留量為0.518～1.490 mg/kg，10 d后殘留量為0.153～0.561 mg/kg，14 d后殘留量為0.012～0.165 mg/kg;施藥2次，間隔5 d后成茶中茚蟲威殘留量為0.804～5.004 mg/kg，7 d后殘留量為0.425～2.908 mg/kg，10 d后殘留量為0.103～2.236 mg/kg，14 d后殘留量為0.011～0.391 mg/kg。

表3 150 g/L茚蟲威乳油在茶葉成茶上的最終殘留試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Final residues of 150 g/L indoxacarb emulsifiable in made tea

實(shí)驗(yàn)表明，按照推薦劑量和1.5倍推薦劑量施藥1～2次，10 d后成茶茶葉中的茚蟲威殘留量均小于3 mg/kg。

2.6 茚蟲威在成茶－茶湯沖泡過程中的浸出率

取3份田間最終殘留試驗(yàn)成茶樣(整葉樣)，并將其部分粉碎后得“碎末樣”，分別按照“1.2.3”制得茶湯，按照“1.3.2”測定成茶樣和茶湯中的茚蟲威殘留量，計(jì)算成茶－茶湯中茚蟲威的浸出率，結(jié)果見表4。其中“整葉樣”第1次浸出率為1.8%～2.6%，第2次浸出率為1.4%～1.7%，第3次浸出率為1.0%～1.6%，3次總浸出率為4.3%～5.7%，平均值為5.2%; “碎末樣”第1次浸出率為6.6%～7.5%，第2次浸出率為1.0%～1.6%，兩次總浸出率為8.2%～8.8%，平均值為8.4%;茶葉整碎程度對(duì)浸出率存在一定影響，隨著浸泡次數(shù)增多，總浸出率加大，但逐次浸出率降低。由此可見茚蟲威在茶葉－茶湯沖泡中浸出率較低，總浸出率小于10%，難浸泡出農(nóng)藥，茶葉沖泡后，超過90%的茚蟲威殘留仍然殘存在茶渣中，不會(huì)影響人體飲用安全。

表4 茚蟲威在成茶－茶湯沖泡過程中的浸出率數(shù)據(jù)Table 4 The leaching rate data of indoxacarb during the brewing process from made tea to tea infusion

2.7 茶葉中茚蟲威殘留飲用安全性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

目前，歐盟、日本和我國臺(tái)灣省雖然設(shè)定有茶葉中茚蟲威殘留量的MRL值標(biāo)準(zhǔn)，但上述三地區(qū)的MRL值均為未在茶樹上進(jìn)行殘留試驗(yàn)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估情況下而采用的“一律標(biāo)準(zhǔn)”。CAC暫無茶葉中茚蟲威殘留量的MRL標(biāo)準(zhǔn)，但規(guī)定其在結(jié)球甘藍(lán)中的殘留為3 mg/kg，花椰菜中為0.20 mg/kg，番茄中為0.50 mg/kg，茄子中為0.50 mg/kg，萵苣莖中為7 mg/kg，萵苣葉中為15 mg/kg。根據(jù)150 g/L茚蟲威乳油在茶葉上的最終殘留試驗(yàn)，噴藥后間隔10 d，成茶中茚蟲威殘留量為0.028～2.236 mg/kg。假定以3.00 mg/kg值設(shè)定為茶葉中的MRL標(biāo)準(zhǔn)，考慮到飲茶時(shí)，只飲用茶湯，不會(huì)食用茶渣的特殊性，故引入泡茶時(shí)農(nóng)藥最大浸出率來計(jì)算人體最大攝入量為:

其中LP為世界上每人每天飲用茶葉的最高數(shù)量(13 g/d=0.013 kg/d);HR－P為理論上應(yīng)該取假定安全間隔期10 d的成茶中最高殘留量2.236 mg/kg，此處按照建議MRL值3 mg/kg計(jì)算;BW為成人平均體重(63 kg);ER為泡茶時(shí)農(nóng)藥最大浸出率(整葉和碎末浸出率均小于10.0%，故以10.0%計(jì)算)。

計(jì)算獲得人體最大攝入量為0.000 061 9 mg/kg·d·bw，該值僅為茚蟲威ADI值(0.01 mg/kg·d·bw［25］)的0.619%，說明當(dāng)采用3 mg/kg作為茚蟲威在茶葉中的MRL值時(shí)，人體飲用安全系數(shù)高達(dá)161.5，因此可認(rèn)為茚蟲威在茶葉中的MRL值為3 mg/kg是安全的。150 g/L茚蟲威乳油施藥劑量為制劑240.00～333.33 mL/hm2(即有效成分36.0～50.0克/公頃)，施藥1次，安全采摘期為10 d。

3 結(jié)論

本文利用分散固相萃取凈化茶葉、固相萃取富集凈化茶湯，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法建立了茶葉、茶湯中茚蟲威殘留的分析方法，首次研究了150 g/L茚蟲威乳油在茶園茶葉中的殘留降解規(guī)律，并對(duì)茚蟲威在茶葉－茶湯浸泡過程中的浸出率和飲用安全性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。結(jié)果表明按照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估制定茶葉中茚蟲威殘留量MRL值為3 mg/kg對(duì)人體飲用是安全的，人體攝入的茚蟲威殘留量僅占每日允許攝入量(ADI)的0.619%。

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