大麻藥生品和三種炮制品的急性毒性比較

陳旅翼，蘭 洲，林親雄，鄧旭坤，趙喻丹，何鳳蓮

(1中南民族大學藥學院，武漢430074;2湖北中醫(yī)藥大學藥學院，430065)

大麻藥(Radix Dolichosae)為豆科植物鐮扁豆(Dolichos falcatus Kalcatus Klein)的根或葉，別名麻里麻、麻三段、豆葉百步還陽等［1］.分布于在我國云南、四川、甘肅等地，尤以云南為多.本品性辛、麻、溫，有毒，具有祛風活血、止血止痛等功效.在云南民間主要用于骨折、跌打損傷、風濕疼痛，治療外傷出血，能抗癌、利尿［2-4］，其根的主要化學成分有三萜皂甙、生物堿、黃酮等［5-8］.

大麻藥有毒，如誤食中毒則會出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹瀉、頭暈、乏力、舌及全身發(fā)麻、血壓下降、心率減慢、縮瞳以至休克的毒性癥狀.因目前對大麻藥的毒性物質(zhì)基礎(chǔ)和毒性機理研究甚少，阻礙了其臨床的合理應(yīng)用.白族地區(qū)主要采用麩制、姜制與酒制等炮制方法改變大麻藥的辛濕藥性和降低其毒性［9］.為更好地闡明這些炮制方法的科學內(nèi)涵，進一步研究大麻藥的毒效物質(zhì)基礎(chǔ)，建立大麻藥規(guī)范化的炮制方法，本文對大麻藥生品、姜制品、麩制品和酒制品的急性毒性進行了比較研究.

1 實驗材料

1.1 藥品和試劑

大麻藥生品(20110512)，產(chǎn)于大理市賓川縣太和鎮(zhèn)，購于昆明市菊花村藥材市場;生姜、麥麩、50度白酒購于副食品市場，乙醇等試劑均為分析純.

1.2 動物

健康昆明種小鼠(S04110700C)，SPF級，雄雌各半，體重(20±2)g，購于華中科技大學實驗動物中心.

2 實驗方法

2.1 各種炮制品的制備

姜制品:取切片好的生品500 g，加等量生姜(搗爛)，置于鍋中，加水，以武火煮沸，文火持續(xù)30 min，至口嘗稍有辛麻感時，撈出，揀去生姜渣，曬干，備用.

麩制品:取切片好的生品500 g，加麩皮50 g，同置鍋內(nèi)，用文火炒至有焦斑(持續(xù)時間30 min)，起鍋，篩去麩皮，研細粉.

酒制品:以50度白酒1000 g，加入干大麻藥粉50 g(粉碎，過80目篩)，浸泡20日左右.

2.2 不同制品藥材提取

稱取生品、姜制品、麩制品各100 g，粉碎，過80目篩.各稱取50 g，分別加入10，8，6倍量水提取3次，提取時間分別為2，1.5，1h，水提物合并，5000 r/min離心10 min后，上清液分別冷凍干燥，得三者水提物干膏(批號20120825得率15.2%;20120827得率15.0%;20120829 得率 16.1%).酒制品 5000 r/min離心10 min后，加壓回收至干(批號20120902得率18.1%).適量稱取樣品，加蒸餾水配制成一定濃度的藥液備用.

2.3 急性毒性實驗

生品組、姜制組、麩制組和酒精制4個組均設(shè)5個劑量組，生品組和酒制組分別為 4.0，3.0，2.25，1.69，1.27 g·kg－1(r=0.75);姜制組和麩制組分別為5.3，4，3，2.25，1.69 g·kg－1(r=0.75).210 只昆明小鼠，按體重隨機分成21組(1個空白對照組和20個藥物組).小鼠禁食不禁水12 h后，按40 mL·kg－1灌胃給藥1次;空白組給以等體積的蒸餾水.連續(xù)觀察14 d，記錄小鼠的毛色、精神、動度、進食、飲水等一般情況、中毒癥狀及死亡情況.在給藥后30 min內(nèi)，連續(xù)不間斷觀察;30 min～2 h，持續(xù)可間斷觀察;2～4 h，每20 min觀察1次;4～8 h，每1 h觀察1次;8～24 h，每4 h觀察1次;第2天起，每天觀察1次.

2.4 統(tǒng)計分析

LD50采用藍宙藥學專業(yè)軟件系列之LD50數(shù)據(jù)處理程序(Version 1.01)處理.體重各組數(shù)據(jù)以()表示，所有數(shù)據(jù)采用 SPSS 11.5軟件 One way ANOVA方式進行方差分析，α=0.01.

3 結(jié)果

3.1 生品組小鼠急性毒性結(jié)果

小鼠灌胃生品大麻藥10 min后出現(xiàn)怠動、腹瀉、心跳加速，唾液分泌增加等毒性反應(yīng)，24 h后開始逐漸緩解、消失.不同劑量生品組給小鼠灌胃急性毒性癥狀見表1，由表1可見，小鼠毒性癥狀的發(fā)生率呈現(xiàn)一定的劑量相關(guān)性，劑量越大，其毒性癥狀越嚴重，4.0g·kg－1劑量組 100% 出現(xiàn)腹瀉和唾液增加，80%出現(xiàn)怠動，70%出現(xiàn)心跳加速.說明大麻藥生品對小鼠的消化系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)有較強的毒性作用.

表1 大麻藥生品組小鼠急性毒性癥狀Tab.1 The acute toxic symptoms of the raw Radix Dolichosae-treated mice

不同劑量生品小鼠灌胃后不同時間的累計死亡數(shù)見圖1.由圖1可見，大麻藥生品組小鼠于給藥后0.5 h開始出現(xiàn)死亡，多數(shù)在給藥4 h后未見死亡數(shù)增加.給藥 14 d 后，4.0，3.0，2.25，1.69，1.27 g·kg－1劑量組小鼠死亡率分別為90%、80%、70%、50%、20%.

圖1 大麻藥生品組小鼠時間-累積死亡曲線Fig.1 The time-cumulative death curve of the raw Radix Dolichosae-treated mice

3.0，2.25，1.69，1.27 g·kg－1各組存活小鼠體重變化見圖2.由圖2可見，給藥后1 d，對照組小鼠體重有所增加，而各給藥組體重則均有不同程度的降低，給藥后4 d，2.25，1.69，1.27 g·kg－1組小鼠體重均開始有不同程度的回升，給藥后6 d，3.0 g·kg－1劑量組小鼠體重也開始回升.至給藥后14d，各給藥組小鼠體重分別增加1～4g.

根據(jù)各藥物組小鼠死亡率，用Bliss法計算生品各劑量組小鼠口服LD50，得大麻藥生品組灌胃給藥的LD50=1.84 g·kg－1，95%可信限為(1.57～2.15)g·kg－1.

圖2 大麻藥生品組小鼠體重變化Fig.2 Body weight changes of the raw Radix Dolichosae-treated mice

3.2 姜制組小鼠急性毒性結(jié)果

各劑量姜制組小鼠灌胃后急性毒性癥狀見表2.由表2可見，小鼠灌胃姜制大麻藥20 min后出現(xiàn)怠動、腹瀉、心跳加速，唾液分泌增加等毒性反應(yīng)，且毒性癥狀的發(fā)生率呈劑量相關(guān)性，上述癥狀于藥后24 h開始逐漸緩解、消失.與同等劑量的生品組相比，姜制組小鼠的毒性癥狀明顯減輕，且發(fā)生率明顯降低，表明大麻藥姜制后能明顯改善其對消化系統(tǒng)的毒副作用.

表2 大麻藥姜制組小鼠急性毒性癥狀Tab.2 The acute toxic symptoms of the ginger processed product-treated mice

灌胃后不同時間各劑量組累計死亡數(shù)見圖3.由圖3可見，大麻藥姜制組小鼠于給藥后0.5 h開始出現(xiàn)死亡，多數(shù)在給藥4 h后未見死亡數(shù)增加.給藥14 d 后，4.0，3.0，2.25，1.69，1.27 g·kg－1劑量組小鼠死亡率分別為90%、70%、60%、40%、20%.

各劑量組存活小鼠體重變化見圖4.由圖4可見，給藥后1 d，對照組小鼠體重有所增加，給藥組體重則均有不同程度的降低;給藥后 4 d，3.0，2.25，1.69 g·kg－1組小鼠體重均有不同程度的回升，給藥后6 d，4.0 g·kg－1劑量組小鼠體重也開始回升.至給藥后14d，各給藥組小鼠體重分別增加1.8～4g.

根據(jù)各藥物組小鼠死亡率，用Bliss法計算姜制組小鼠口服LD50，得大麻藥姜制組灌胃給藥的LD50=2.69 g·kg－1，95% 可信限為(2.42～2.98)g·kg－1.

3.3 麩制組小鼠急性毒性結(jié)果

麩制組給小鼠灌胃急性毒性癥狀見表3.由表3可知，小鼠灌胃麩制大麻藥20 min后出現(xiàn)怠動、腹瀉、心跳加速，唾液分泌增加等毒性反應(yīng)，且毒性癥狀的發(fā)生率呈劑量相關(guān)性，上述癥狀于藥后24 h開始逐漸緩解、消失.與同等劑量的生品組相比，麩制組小鼠腹瀉和唾液分泌增加等毒性癥狀明顯減輕，且發(fā)生率明顯降低，表明大麻藥麥麩制后能明顯改善其對消化系統(tǒng)的毒副作用.

圖3 大麻藥姜制組小鼠時間-累積死亡曲線Fig.3 The time-cumulative death curve of the ginger processed product-treated mice

圖4 大麻藥姜制組小鼠體重變化Fig.4 Body weight changes of the ginger processed product-treated mice

表3 大麻藥麥麩組小鼠急性毒性癥狀Tab.3 The acute toxic symptoms of the bran processed product-treated mice

各劑量組灌胃后不同時間的累計死亡數(shù)見圖5.由圖5可見，大麻藥麥麩組小鼠于給藥后0.5 h開始死亡，多數(shù)在給藥4 h后未見死亡數(shù)增加.給藥14 d 后，5.3，4.0，3.0，2.25，1.69 g·kg－1劑量組小鼠死亡率分別為90%、80%、60%、30%，20%.

圖5 大麻藥麩制組小鼠時間－累積死亡曲線Fig.5 The time-cumulative death curve of the bran processed product-treated mice

各劑量組存活小鼠體重變化見圖6.由圖6可見，給藥后1 d，對照組小鼠體重有所增加，給藥組體重則均有不同程度的降低，給藥后 4 d，3.0，2.25，1.69 g·kg－1組小鼠體重均有不同程度的回升，給藥后6 d，4.0 g·kg－1劑量組小鼠體重也開始回升.至給藥后14d，各給藥組小鼠體重分別增加2～4g.

圖6 大麻藥麩制組小鼠體重變化Fig.6 Body weight changes of the bran processed product-treated mice

根據(jù)各藥物組小鼠死亡率，用Bliss法計算生品組小鼠口服LD50，得大麻藥麥麩組灌胃給藥的LD50=2.70g·kg－1，95%可信限為(2.47～2.95)g·kg－1.

3.4 酒制組小鼠急性毒性結(jié)果

酒制組各劑量給小鼠灌胃急性毒性癥狀見表4.表4結(jié)果表明:小鼠灌胃酒制大麻藥10 min后出現(xiàn)怠動、腹瀉、心跳加速，唾液分泌增加等毒性反應(yīng)，且毒性癥狀的發(fā)生率呈現(xiàn)一定的劑量相關(guān)性，以上癥狀于給藥后24 h開始逐漸緩解、消失.與同等劑 量生品組相比，酒制組無明顯改善毒性癥狀的作用.

表4 大麻藥酒制組小鼠急性毒性癥狀Tab.4 The acute toxic symptoms of the wine processed product-treated mice

各劑量組灌胃后不同時間的累計死亡數(shù)見圖7.由圖7可見，大麻藥酒制組小鼠于給藥后0.5 h開始死亡，多數(shù)在給藥4 h后未見死亡數(shù)增加.給藥14 d 后，4.0，3.0，2.25，1.69，1.27g·kg－1劑量組小鼠死亡率分別為90%、80%、70%、50%、30%.

圖7 大麻藥酒制組小鼠時間-累積死亡曲線Fig.7 The time-cumulative death curve of the wine processed product-treated mice

各劑量組存活小鼠體重變化見圖8.由圖8可見，給藥后1 d，對照組小鼠體重有所增加，給藥組體重則均有不同程度的降低，給藥后4 d，2.25，1.69，1.25 g·kg－1組小鼠體重均有不同程度的回升，給藥后6 d，3.0 g·kg－1劑量組小鼠體重也開始回升.至給藥后14d，各給藥組小鼠體重分別增加0.2～1.2g.

圖8 大麻藥酒制組小鼠體重變化Fig.8 Body weight changes of the wine processed product-treated mice

根據(jù)各藥物組小鼠死亡率，用Bliss法計算生品組小鼠口服LD50，得大麻藥酒制組灌胃給藥的LD50=1.71g·kg－1，95% 可信限為(1.58～1.85)g·kg－1.

3.5 各組LD50轉(zhuǎn)換成生藥材量的結(jié)果

為更好比較各炮制品的毒性大小，通過藥材的提取率轉(zhuǎn)化成生藥材量科學計算LD50后結(jié)果見表5.由表5可知，大麻藥經(jīng)麥麩制和姜制后，能顯著降低其毒性;而酒制后，毒副反而增強.

表5 各組生藥材的LD50Tab.5 The LD50values of the raw drugs in different groups

4 討論

藥材經(jīng)合理的炮制，可增效減毒或改變藥性等.如麩炒可以增強療效，具有補脾的作用，也可緩和某些作用猛烈藥物的藥性.生姜味辛、性溫，升騰發(fā)散而走表，能發(fā)表散寒、溫中、止嘔、開竅、解毒，藥物經(jīng)姜炮制后能抑制寒性，增強療效，降低毒性.酒性溫、味甘苦辛，入心肝肺胃經(jīng)，功能通血脈、御寒氣、行藥勢，可治療風寒痹痛、筋脈攣急、胸痹、心腹冷痛等，還能增強藥物功效，降低藥物的毒副作用.傳統(tǒng)記載，姜制與麩制可減緩大麻藥的毒副作用，大麻藥姜制后內(nèi)服治療風濕骨痛、跌打損傷，每服干粉1g;麩制后用于消炎鎮(zhèn)痛，外傷出血，撒于傷口，內(nèi)服量2g;酒制則主要外用，忌內(nèi)服［9］.

本實驗中小鼠口服大麻藥生品及其炮制品后，其LD50由大至小分別為姜制品，麩制品，生品與酒制品.說明姜制與麩制后，能顯著降低大麻藥的毒性，緩和其藥性;而酒制后藥物的毒性反而增強，因濃度為50%的乙醇和水所提得的成分不同，毒性成分更易被高濃度醇所提出所致.此外，姜制和麩制能顯著的改善小鼠的外觀毒性癥狀，如腹瀉和唾液分泌增加，表明姜制和麩制可緩和大麻藥猛烈的藥性，降低其對胃腸道系統(tǒng)的強烈刺激作用.而酒制無此效果.

總之，本實驗結(jié)果與傳統(tǒng)記載基本吻合，表明大麻藥傳統(tǒng)炮制用藥的合理性.這將為后期大麻藥炮制前后毒效物質(zhì)成分與毒效作用的變化及建立大麻藥規(guī)范化的炮制方法奠定基礎(chǔ)，并為大麻藥在民族地區(qū)科學、合理用藥提供科學依據(jù).

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