新晶型恩諾沙星注射液在豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)研究

李朋朋，周德剛，付旭東，張曉會

（1.國家獸用藥品工程技術(shù)研究中心，河南 洛陽471003；2.石家莊市動物疫病預(yù)防控制中心，河北 石家莊050000）

恩諾沙星的化學(xué)名稱是1－環(huán)丙基－6－氟－4－氧代－1，4－二氫－7－（4－乙基－1－哌嗪基）－3－喹啉羧酸，分子式為C19H22FN3O3，外觀為微黃色或淡橙黃色結(jié)晶性粉末；無臭，味微苦；遇光色漸變?yōu)槌燃t色，化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示［1］。它是第一個動物專用的氟喹諾酮類藥物，1987年由德國拜耳公司研制成功并投入使用。

圖1 恩諾沙星的化學(xué)結(jié)構(gòu)

恩諾沙星具有較強(qiáng)的抗菌能力，且抗菌譜廣，近年來在歐洲、美國等多個國家得到廣泛應(yīng)用。市售普通恩諾沙星在顯微鏡下無定形，呈不規(guī)則排列，而新晶型恩諾沙星呈現(xiàn)出規(guī)則的柱狀結(jié)晶排布，溶解速率基本一致。本文研究了新晶型恩諾沙星注射液肌肉注射給藥后在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征，并與市售普通恩諾沙星注射液比較，對恩諾沙星注射液做出藥物動力學(xué)評價，考察晶型的改變是否會影響恩諾沙星的吸收、分布及代謝，為臨床用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 豬，杜洛克－大約克－長白雜交，16頭，雌雄各半，體重30kg±2kg，普萊柯生物工程股份有限公司動物房提供。試驗前1個月飼喂不含抗菌藥物的全價日糧，自由飲水。

1.1.2 藥品與試劑 恩諾沙星對照品：含量為99.5%，批號：H0110807，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；拜有利5%，批號：KP05H7K，含量99.6%，拜耳醫(yī)藥保健股份有限公司生產(chǎn)；新晶型恩諾沙星注射液，5%，批號：20100514，含量102%，洛陽惠中獸藥有限公司；乙腈，色譜純，天津市鑫源化工有限公司；磷酸，分析純，成都市科龍化工試劑廠；二氯甲烷，分析純，煙臺市雙雙化工有限公司；甲醇，分析純，成都市科龍化工試劑廠。

1.1.3 儀器 Waters ACQU IIY超高效液相色譜儀，Empower II軟件；分析天平；超聲波清洗機(jī)；TCL－16G臺式離心機(jī)，上海安亭科技儀器廠；振蕩器。

1.2 試驗方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制 精密稱取恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品25.0 mg置于250 mL容量瓶中，加入適量0.1 mol/L氫氧化鈉溶液溶解并加三蒸水定容，得100 μg/mL的恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)儲備液，臨用前稀釋到所需濃度。

1.2.2 試驗動物分組 16頭豬隨機(jī)分為兩組，每組8頭，分別肌肉注射恩諾沙星注射液和拜有利。

1.2.3 血樣采集 豬耳后肌肉注射2.5 mg/kg體重注射液，單點注射不高于2.5 mL，給藥前每頭豬分別采集空白血樣，給藥后5 min、10 min、15 min、30 min、1、2、4、8、12、24、48、56、72 h分別對每頭豬進(jìn)行前腔靜脈采血3 mL，采集完畢后立即置于肝素鈉抗凝管中，3 500 r/min離心10 min，分離血漿，－20℃冰箱保存，待測。

1.2.4 樣品前處理 取出血漿，自然解凍后搖勻，準(zhǔn)確吸取500μL，加入50μL磷酸，震蕩5 s，再加入1 mL乙腈，震蕩10 s，4 000 r/min（4℃）離心5 min，取上清液，加入1.5 mL二氯甲烷，劇烈震蕩10 s，4 000 r/min（4℃）離心5 min，取上層水溶液層進(jìn)高效液相色譜分析。

色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，ACQUIIY UPLC BEH C18（1.7μm，2.1 mm×50 mm）；流動相為乙腈：甲醇：水溶液（含0.4%三乙胺和0.4%磷酸，p H值2.5）＝17∶3∶80；流速為0.6 mL/min，紫外檢測波長為278 nm。

1.3 方法學(xué)驗證

1.3.1 提取回收率及精密度測定 通過回收率和變異系數(shù)的考察，將高、中、低3個濃度的恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品溶液添加到空白豬血漿中，充分混勻，以獲得恩諾沙星藥物濃度分別為20μg/mL、2μg/mL和0.5μg/mL的血漿，按1.2.4進(jìn)行處理分析，每個濃度于同一天內(nèi)制備5份樣品以考察日內(nèi)變異系數(shù)，連續(xù)重復(fù)測定3天以考察日間變異系數(shù)。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 取空白血漿500μL，加入一定量各濃度的恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)液，得2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.05 μg/mL血漿，每個對照物質(zhì)濃度做5個重復(fù)。血漿藥物提取方法同樣品前處理方法，進(jìn)樣測定血藥濃度。

1.3.3 數(shù)據(jù)處理 Winnonlin6.1中 WNL經(jīng)典模型中藥物代謝動力學(xué)模擬藥時曲線，計算參數(shù)，SPSS12 11LSD法對主要參數(shù)進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果

2.1 提取回收率及精密度測定結(jié)果 血漿中恩諾沙星空白添加濃度分別在20、2μg/mL和0.5μg/mL時，提取回收率在63.6%～98.4%之間，高濃度血漿精密性測定結(jié)果小于10%，中濃度、低濃度小于15%。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 該方法在0.05μg/mL～5 μg/mL范圍內(nèi)的線性方程為：C＝1.89×105A＋864，R2＝0.9992，血藥濃度與峰面積線性關(guān)系良好，可用于血漿藥物濃度測定。

2.3 藥代動力學(xué)特征 兩種恩諾沙星注射液給豬肌肉注射后的藥時曲線如圖2所示。各藥動參數(shù)如表1所示。

圖2 各組恩諾沙星注射液的藥時曲線

表1 各組恩諾沙星注射液藥代動力學(xué)參數(shù)

3 結(jié)果與分析

從表1中數(shù)據(jù)看出，該研究中所用新晶型恩諾沙星注射液的達(dá)峰時間較短對照藥物拜有利，而達(dá)峰濃度卻高于后者，說明新晶型恩諾沙星注射液在豬體內(nèi)吸收速度較快。其次，新晶型恩諾沙星注射液與拜有利的t1/2Ka分別為0.38±0.17 h、0.21±0.06 h，表觀分別容積分別為5.60±0.98 L/kg、7.58±1.54 L/kg，說明這兩種注射液在豬體內(nèi)分布迅速其廣泛。從二者藥時曲線圖可以看出，二者在豬體內(nèi)的存留時間基本相當(dāng)，從藥動參數(shù)也可看出新晶型恩諾沙星注射液的AUC稍高于拜有利，其生物利用度是拜有利的105.72%，這表明新晶型恩諾沙星注射液在豬體內(nèi)生物利用度更高。

試驗測得新晶型恩諾沙星注射液的消除半衰期為5.43±1.30 h，該結(jié)果與周云波［2］等報道5.0831±1.121 h相似，且略偏高，高于曾振靈等［3］報道的3.45±0.85 h，說明它的消除較緩慢，在體內(nèi)存留時間較長。分析原因可能是晶型改變使藥物在吸收與消除時間上有所改變。

與張曉會、周洋等［4］的研究成果相比較，該試驗中所用恩諾沙星注射液的達(dá)峰濃度、AUC及體內(nèi)存留時間顯著提高，說明藥物的晶型與制備工藝對藥物注射液的影響很大，優(yōu)勢晶型的開發(fā)應(yīng)用使其注射液的血液濃度峰值有所提高，生物利用度更高。另外，由于達(dá)峰時間減少，因此其起效更快。從藥動學(xué)參數(shù)值上看，新晶型恩諾沙星注射液與普通恩諾沙星注射液相比，具有較大的優(yōu)越性。

最后，根據(jù)曾振靈等［5］報道的恩諾沙星對大腸桿菌的 MIC為0.05μg/mL，而我們試驗所用的新晶型恩諾沙星按2.5 mg/kg體重，肌肉注射后24 h血藥濃度為0.06μg/mL±0.02μg/mL，高于曾五和、陳杖榴［6］測得的血藥濃度，所以我們建議按以下給藥方案給藥：2.5 mg/kg體重，肌肉注射，1次/d，重癥加倍。因此建議從臨床應(yīng)用方面再加以驗證。

［1］ 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二〇〇五版一部［S］.

［2］ 周云波，吳海燕，鞠曉峰，等.長效恩諾沙星注射液在健康豬體內(nèi)的藥動學(xué)［J］.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報，2005，17（3）：70－72.

［3］ 曾振靈，馮淇輝.恩諾沙星在豬體內(nèi)的生物利用度及藥物動力學(xué)研究［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報，1996，16（6）：606－612.

［4］ 張曉會，周洋，周德剛，等.三種恩諾沙星注射液在豬體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)研究［J］.中國獸藥雜志，2010，44（5）：9－13.

［5］ 曾振靈，馮淇輝.恩諾沙星對大腸桿菌感染豬的藥動學(xué)及藥效學(xué)研究［J］.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997，6（30）：10－15.

［6］ 曾五和，陳杖榴.恩諾沙星混懸液在豬體內(nèi)的藥動學(xué)及生物利用度［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2001，33（1）：63－67.