泰山盤(pán)石散對(duì)米非司酮誘導(dǎo)小鼠流產(chǎn)的保胎效果

耿梅英，苑方重，鐘秀會(huì)

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸醫(yī)學(xué)院，河北 保定071001）

正常的妊娠期間母體和胎兒的共同作用包含了復(fù)雜的免疫機(jī)制。自然條件下，胚胎著床失敗是由于母體免疫反應(yīng)引起的早期胚胎丟失，以及反復(fù)自然流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion，RSA）等引起的妊娠終止在所有的妊娠失敗中占據(jù)很大的比例。

中醫(yī)稱流產(chǎn)為胎漏、胎動(dòng)不安和滑胎，針對(duì)這種癥狀的治療原則是保胎。自《神農(nóng)本草經(jīng)》首載桑寄生、阿膠、白膠、黑雌雞為安胎藥［1］，后經(jīng)不斷發(fā)展，中醫(yī)對(duì)安胎藥物的使用已經(jīng)較為成熟。此外，中醫(yī)在治療胎動(dòng)不安時(shí)還從不同的臟腑論治，認(rèn)為流產(chǎn)多因脾腎虧損、沖任不固、氣血兩虛所致。根據(jù)這種理論，不少研究者認(rèn)為對(duì)流產(chǎn)治療應(yīng)采取補(bǔ)脾腎、固沖任、調(diào)氣血，從而有利于保胎［2－3］，并分別提出補(bǔ)腎保胎、升陽(yáng)舉陷，補(bǔ)脾安胎、清肝固元等治療措施，并取得了較好的效果。

《中華人民共和國(guó)獸藥典》二部收載了有氣血雙補(bǔ)作用的方劑－泰山盤(pán)石散。泰山盤(pán)石散方中包含黨參 、黃芪、當(dāng)歸等多味中藥。該方劑在臨床多年應(yīng)用，具有很好的保胎效果。但是，如何從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度認(rèn)識(shí)該方劑的保胎作用，研究資料尚屬少見(jiàn)。

本試驗(yàn)選擇泰山盤(pán)石散預(yù)處理試驗(yàn)小鼠，觀察泰山盤(pán)石散對(duì)米非司酮誘導(dǎo)流產(chǎn)作用的抑制效果，探討試驗(yàn)中選用中藥方劑的保胎作用及可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)昆明種9周齡未經(jīng)產(chǎn)仔母鼠和10周齡公鼠，雌鼠體重23～30g，雄鼠體重30～35g。購(gòu)自河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。常規(guī)飼養(yǎng)，自由采食和飲水。

1.2 試驗(yàn)藥品與試劑 米非司酮（RU486），由美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)。泰山盤(pán)石散由黨參30g，黃芪30 g，當(dāng)歸30g，續(xù)斷30g，黃芩30g，川芎15g，白芍30g，熟地黃45g，白術(shù)30g，砂仁15g，甘草（炙）12 g組成。

1.3 動(dòng)物分組 將懷孕小鼠隨機(jī)分為3組（見(jiàn)表1）。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物分組和處理

1.4 胚胎吸收率（死亡率）和流產(chǎn)率計(jì)算 孕鼠均于孕8d頸椎脫臼處死小鼠，打開(kāi)腹腔，暴露子宮，觀察子宮生長(zhǎng)情況，記錄胚胎著床數(shù)及流產(chǎn)數(shù)。取一側(cè)子宮用Bouin氏液固定作石蠟切片用。

按下列公式計(jì)算試驗(yàn)各組的胚胎吸收率、流產(chǎn)率：

胚胎吸收率＝被吸收的胚胎數(shù)/（被吸收的胚胎數(shù)＋正常胚胎數(shù)）×100%；

流產(chǎn)率＝發(fā)生流產(chǎn)的母鼠數(shù)/試驗(yàn)組母鼠總數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 泰山盤(pán)石散的保胎作用 A組10只孕鼠在孕8d剖殺，有2只流產(chǎn)，自然流產(chǎn)率為20%，剖檢看見(jiàn)，胚胎正?；蚧菊?，僅有部分胚胎死亡、吸收變小。B組10只孕鼠在孕8d剖殺，有4只死胎全部排出，子宮內(nèi)已無(wú)胎兒，其余6只母鼠子宮內(nèi)胎兒已全部死亡，大部分胚胎已吸收，呈紫黑色，胚胎間或有血凝塊，子宮宮腔膨大，壁明顯增厚，子宮長(zhǎng)度明顯縮短，流產(chǎn)率為100%。C組10只孕鼠在孕8 d剖殺。有5只發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)率為50%。發(fā)生流產(chǎn)的各組動(dòng)物在剖檢時(shí)可見(jiàn)，子宮系膜充血嚴(yán)重，胚胎基本正常，子宮腔偶然看見(jiàn)血凝塊。

試驗(yàn)結(jié)果表明，中藥方劑泰山盤(pán)石散（C組）能有效對(duì)抗RU486誘導(dǎo)的小鼠流產(chǎn)盡管保胎效果還沒(méi)有達(dá)到正常水平（A組，自然流產(chǎn)率20%），與正常對(duì)照組比較，差異極顯著（P＜0.01），而胚胎吸收率也相對(duì)較高，但與單純使用米非司酮處理的對(duì)照（B組）相比較，試驗(yàn)動(dòng)物的流產(chǎn)率從100%下降到50%，胚胎吸收率也出現(xiàn)顯著下降，見(jiàn)表2。

表2 不同處理組的妊娠

2.2 試驗(yàn)小鼠子宮組織學(xué)變化 H.E.染色后組織學(xué)觀察，正常妊娠小鼠子宮組織切片可見(jiàn)子宮內(nèi)膜蛻膜化，間質(zhì)蛻膜化，內(nèi)膜增厚，黏膜上皮完整，腺體發(fā)達(dá)，可見(jiàn)大片蛻膜組織，蛻膜細(xì)胞散在排列，形態(tài)不規(guī)則，蛻膜細(xì)胞核仁明顯，局部有充血，有少量淋巴細(xì)胞聚集，間質(zhì)疏松，有散在的不規(guī)則排列的膠原纖維，但無(wú)出血、壞死、脫落等（見(jiàn)中插彩版圖1）。

RU486誘導(dǎo)流產(chǎn)小鼠子宮內(nèi)膜發(fā)育與對(duì)照組相比有較大變化，主要表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜發(fā)育不良，部分子宮內(nèi)膜可見(jiàn)腺體與間質(zhì)發(fā)育不同步，間質(zhì)細(xì)胞部分蛻膜樣變，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，蛻膜組織呈小灶性變性、壞死，少數(shù)細(xì)胞核固縮、破碎，細(xì)胞質(zhì)不均勻及空泡變性，但正常組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)仍存在，腺體小，數(shù)目少，分泌不足，呈單層立方上皮，腺腔輕度擴(kuò)張，間質(zhì)緊密，間質(zhì)內(nèi)血竇少，血管擴(kuò)張不明顯（見(jiàn)中插彩版圖2）。泰山盤(pán)石散組，子宮組織完整程度介于正常對(duì)照組和RU486組之間，受損子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)得到不同程度的修復(fù)（見(jiàn)中插彩版圖3）。

3 討論

本試驗(yàn)中，利用RU486復(fù)制流產(chǎn)模型，用以檢測(cè)中藥方劑的保胎效果。試驗(yàn)中，在孕7d各頸部注射RU486 0.1mL/只（0.025μg）以后，試驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M小鼠的流產(chǎn)率達(dá)到了100%，而同期對(duì)照組的小鼠的自然流產(chǎn)率僅為20%，兩者之間存在著顯著的差異，同時(shí)也證明使用RU486復(fù)制小鼠的流產(chǎn)模型是成功的。

相關(guān)資料報(bào)道，哺乳動(dòng)物著床后的胚胎很容易發(fā)生死亡，大約有40%～60%不能發(fā)育到正常分娩，其中早期胚胎丟失約占67%，這在人和家畜均如此［4］，甚至同一母體出現(xiàn)2次或2次以上的反復(fù)自然流產(chǎn)（RSA）［5］，是一種非常常見(jiàn)的現(xiàn)象，它可以引起懷孕早期的胚胎丟失。中醫(yī)稱流產(chǎn)為胎漏、胎動(dòng)不安和滑胎，針對(duì)這種癥狀的治療原則是保胎。

在使用RU486成功復(fù)制出小鼠的流產(chǎn)模型后，本試驗(yàn)使用中藥方劑泰山盤(pán)石散，拮抗RU486的流產(chǎn)作用，探討常用保胎中藥方劑的臨床作用，并探明其可能的保胎機(jī)制。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，中藥方劑泰山盤(pán)石散能有效對(duì)抗RU486誘導(dǎo)的小鼠流產(chǎn)。在應(yīng)用中藥后，試驗(yàn)動(dòng)物模型的流產(chǎn)率從100%下降到50%，與單純使用米非司酮處理的流產(chǎn)模型（B組）差異極顯著（P＜0.01），胚胎吸收率也出現(xiàn)顯著下降，由B組的48.57%下降到5.08%，與B組比較，差異極顯著（P＜0.01）；但應(yīng)用藥物預(yù)處理組的中藥保胎效果還沒(méi)有達(dá)到正常的妊娠成功率水平（A組，自然流產(chǎn)率20%），與正常對(duì)照組比較，差異極顯著（P＜0.01），而胚胎吸收率也相對(duì)較高，與A組對(duì)比，差異極顯著 （C組，P＜0.01）。

結(jié)果證實(shí)，泰山盤(pán)石散有顯著的保胎效果，可以有效提高懷孕小鼠的妊娠成功率，對(duì)使用流產(chǎn)藥物引起的小鼠流產(chǎn)也有一定的抑制和拮抗作用。

［1］ 張承烈.安胎中藥研究進(jìn)展［J］.浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，25（4）：67－68.

［2］ 王漢章.石菖蒲性味功效及主治今昔考［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1997，9（2）：12.

［3］ 鐘秀會(huì)，周占祥，孫秉貴，等.黃芩白術(shù)對(duì)LPS誘導(dǎo)流產(chǎn)小鼠的保胎作用及子宮內(nèi)TNF－α含量的影響［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2000，31（5）：430－435.

［4］ López－Gatius F，Almería S，Donofrio G，etal.Protection against abortion linked to gamma interferon production in pregnant dairy cows naturally infected with Neospora caninum ［J］.Theriogenology，2007（68）：1067－1073.

［5］ Dowdell K C，Cua D J，Kirkman E，etal.NK cells regulate CD4responses prior to antigen encounter［J］.J Immunology，2003，171（1）：234－239.