兒童激素耐藥腎病綜合征相關(guān)致病基因及其臨床檢測策略

李國民 沈 茜 徐 虹 安 宇

腎病綜合征(NS)是因腎小球濾過屏障受損而引起的一組臨床綜合征。腎小球濾過屏障由內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜和足細(xì)胞構(gòu)成。多項研究表明，足細(xì)胞在腎小球濾過屏障中起關(guān)鍵作用，特別是足細(xì)胞相鄰足突構(gòu)成的裂隙膜(slit diaphragm，SD)［1～4］。依據(jù)對激素治療的反應(yīng)可將 NS 分為激素敏感型(SSNS)和激素耐藥型 (SRNS)［5］。10%～20%的NS患兒為SRNS，超過半數(shù)的SRNS患兒在10年內(nèi)會進(jìn)展為終末期腎病(ESRD)［5～7］。在 NS患者中，有一類是由足細(xì)胞和基底膜相關(guān)分子基因突變所引起，該類NS又稱為遺傳性NS［8，9］。遺傳性NS患者不僅表現(xiàn)對激素耐藥，對其他免疫抑制劑幾乎均耐藥，屬于SRNS范疇，治療的主要方向是減輕蛋白尿和保護(hù)腎功能，延緩疾病進(jìn)展;這類SRNS患者易快速進(jìn)展為ESRD，而進(jìn)展為ESRD后的最佳治療選擇為腎移植，因為遺傳性NS患者腎移植后復(fù)發(fā)率很低［10～13］。目前臨床觀點認(rèn)為，在SRNS患者選擇免疫抑制劑治療和終末期腎移植之前應(yīng)將遺傳性NS患者篩選出來，其目的是為SRNS患者提供個體化治療，避免盲目治療［14～17］。本文就SRNS相關(guān)致病基因、主要基因突變流行率，及臨床基因分析對象、方法和意義進(jìn)行綜述。

1 SRNS的定義和分類

兒童SRNS診斷標(biāo)準(zhǔn):潑尼松1.5～2.0 mg·kg-1·d-1(最大不超過60 mg)治療4～8周，或相應(yīng)劑量的其他類型的腎上腺皮質(zhì)激素治療4～8周，尿蛋白不能轉(zhuǎn)陰［18，19］。依據(jù)SRNS患者是否伴有腎外癥狀，可將 SRNS分為非綜合征型(單發(fā)型)SRNS 和綜合征型 SRNS［8，14］。非綜合征型SRNS只有NS表現(xiàn)，不伴有其他系統(tǒng)癥狀，綜合征型SRNS不僅有NS的表現(xiàn)，還有先天性或遺傳性疾病引起的腎外癥狀;依據(jù)發(fā)病年齡又可以將SRNS分為先天性(0～3個月)、嬰兒型(～12個月)、兒童早發(fā)型(～5歲)、兒童遲發(fā)型(～13歲)、青少年型(～18歲)和成人型(＞18 歲)［8，14］;依據(jù)患者間是否具有血緣關(guān)系，SRNS 可分為家族性和散發(fā)性。

表1 非綜合征型SRNS及其致病基因

2 SRNS的相關(guān)致病基因

SRNS患者發(fā)病早，有腎病水平蛋白尿家族史，快速進(jìn)展為 E SRD 提 示由遺傳因素引起［14，15，20］。1998 年，發(fā)現(xiàn)了NPHS1，其編碼nephrin是足細(xì)胞SD結(jié)構(gòu)構(gòu)成和信號傳導(dǎo)分子，是維持腎小球濾過屏障完整性的關(guān)鍵分子之一，也是芬蘭型先天性NS主要致病基因［21］。NPHS1的發(fā)現(xiàn)開創(chuàng)了NS致病基因和分子研究時代。

2.1 非綜合征型(單發(fā)型)SRNS致病基因 目前有12種基因突變可分別引發(fā)非綜合征型SRNS(表1)，其臨床主要病理類型為局灶節(jié)段腎小球硬化(FSGS)、彌漫系膜硬化(DMS)和膜增生性腎小球腎炎(MPGN)。這些基因產(chǎn)物均在腎小球足細(xì)胞中表達(dá)，有的分子直接、間 接 參 與 SD(NPHS1、NPHS2、CD2AP)和肌動蛋白細(xì)胞骨架(ACTN4、INF2)的構(gòu)成，有的參與細(xì)胞代謝和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(PTPRO、 PLCE1、 APLO1、MYO1E、DGKN 和 ARHGDIA)［20～32］。 N PHS1、 N PHS2、PTPRO、PLCE1、CD2AP、APLO1、MYO1E、DGKN 和 A RHGDIA引起的SRNS表現(xiàn)為常染色體隱性遺傳(AR)，在兒童時期發(fā)病(APLO1除外，其突變主要在成年期發(fā)病);而ACTN4、TRPC6和INF2引起的SRNS表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳(AD)，多數(shù)患者在青少年或成年期發(fā)?。?2，14，34］。APLO1與成人ESRD、FSGS和非糖尿病腎病發(fā)病有關(guān)，這些疾病主要發(fā)生在非裔美國人群中，未見其在其他人群中發(fā)生，表明APLO1所致疾病與種族有關(guān)聯(lián)［29，35，36］。這些基因突變類型有錯義、無義突變、插入、缺失和剪切突變等，其中錯義突變是主要突變類型，可以累及基因所有編碼區(qū)，故無熱點突變［14，15，37］。

2.2 綜合征型SRNS致病基因綜合征型SRNS患者腎外癥狀明顯，經(jīng)常因腎外癥狀就診，后發(fā)現(xiàn)腎臟表現(xiàn)。引起綜合征型SRNS的基因見表2，這些基因不僅僅在足細(xì)胞中表達(dá)，而且在其他組織和細(xì)胞也有表達(dá)。其中WT1和LMX1B編碼的蛋白屬于轉(zhuǎn)錄因子，LAMB2和ITGB4編碼的蛋白屬于腎小球基底膜構(gòu)成分子，SCARB2編碼的蛋白屬于溶 酶 體 蛋 白 ，COQ2、PDSS2、COQ6和MTTL1編碼的蛋白屬于線粒體蛋白，SMARCAL1編碼的蛋白屬于DNA核小體重組調(diào)節(jié)因 子［37～52］。WT1、LAMB2 和MYH 9突變可僅有SRNS表現(xiàn)(非綜合征型)，也可引起相應(yīng)的綜合征同時伴發(fā)SRNS(綜合征型)［40，54，55］。WT1、MYH9、ITGB4、ZMPSTE24 和 LMNA突變可以引發(fā)多個臨床綜合征，并不是都伴有SRNS，僅部分伴有SRNS(表2)。如WT1突變可以引起中疾病，Denys-Drash綜合征和Frasier綜合征可伴有NS表現(xiàn)，而體細(xì)胞間皮瘤和Wilms腫瘤1型無NS表現(xiàn)。此外，WT1突變也可僅有NS表現(xiàn)，所以有時 WT1可用 NPHS4作為基因代碼［54，56，57］。Galloway-Mowat綜合征于1968首次描述，臨床表現(xiàn)為早期發(fā)病的NS(病理DMS)、小頭畸形和裂孔疝，為AR，至今尚未發(fā)現(xiàn)其致病基因［58］。

3 SRNS相關(guān)致病基因的突變頻率

澳大利亞的研究發(fā)現(xiàn)，SRNS是兒童繼先天性腎臟泌尿道畸形(CAKUT)之后第二常見的遺傳性腎臟疾?。?9］。在綜合征型SRNS致病基因中，WT1是所致疾病相對常見的基因，其他基因所致疾病比較罕見［38］。在非綜合征型SRNS致病基因中，PTPRO所致疾病不太常見，可能與相關(guān)研究不夠有關(guān)［15］。國外研究顯示，相對常見的SRNS相關(guān)致病基因在不同人群的流行率是不同的(表3)［9，12，14，60～68］。國 內(nèi) 對 SRNS 致 病 基 因 研 究 比 較 少，NPSH2在散發(fā)性SRNS患兒中的突變率為4%～5%［69］，WT1在3歲之前散發(fā)性SRNS患兒中的突變率為16%～17%，3歲之后未見報道［70］。NPHS1在散發(fā)性SRNS患兒中的突變率為4.5%［71］。世界各地研究發(fā)現(xiàn)，某一基因的突變率并不一致，可能是種族的影響。總體特征是，年齡越小發(fā)病的 SRNS，基因所致可能性越大［15，72～74］。

表310個相對常見SRNS基因的突變率(%)

4 SRNS相關(guān)致病基因分析對象和策略

4.1 分析對象 從SRNS相關(guān)致病基因在不同人群中流行特點來分析，兒童是基因分析的主要對象，無論是散發(fā)性還是家族性 S RNS 均應(yīng)該進(jìn)行相關(guān)基因分析［14，15，60］。NPHS2、ACTN4、TRPC6和INF2在家族性SRNS成人病例中有一定的突變率，但在散發(fā)性SRNS成人中罕見，因此家族性AR的 SRNS患者可行 NPSH2分析，AD患者可行ACTN4、TRPC6和INF2分析，散發(fā)性SRNS成人病例可不行基因分析［9，16，34］。

4.2 分析方法 目前，SRNS相關(guān)致病基因分析方法主要是用Sanger法對外顯子及附近區(qū)域直接測序，并已經(jīng)從實驗室走向臨床［14，15，60］。這種方法的優(yōu)點是準(zhǔn)確性高、重復(fù)性強(qiáng)，缺點是需要消耗大量的財力和時間，這也限制了SRNS相關(guān)致病基因分析在臨床推廣。對于有熱點突變的基因，基于SnapShot等技術(shù)的熱點突變分析是目前臨床經(jīng)濟(jì)、有效和快速的基因分析方法。隨著科技的發(fā)展，高通量測序儀已在生物科學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用?；谛酒夹g(shù)的多基因外顯子捕獲和高通量測序?qū)⑹俏磥鞸RNS相關(guān)致病基因全面分析的方向［75］。

4.3 分析策略 涉及SRNS發(fā)病基因達(dá)到數(shù)十個，臨床對所有SRNS致病基因進(jìn)行分析無疑是很昂貴和耗時、也不切實際。臨床理想的SRNS致病基因分析策略是根據(jù)表型與基因型的對應(yīng)關(guān)系，有針對性的進(jìn)行某些基因分析，但SRNS患兒表型與基因型具有異質(zhì)性，非對應(yīng)關(guān)系，這就給臨床SRNS患者基因分析帶來困難。對于綜合征型SRNS患兒，致病基因分析的策略是根據(jù)腎外表現(xiàn)來推斷可能的致病基因，然后對該基因進(jìn)行直接測序(圖1)［9，11，20，42，46，60，76］。而對于非綜合征 S RNS 患兒，目前臨床策略是對非綜合征SRNS患兒先行腎活檢，依據(jù)病理表型來推斷可能的致病基因，然后進(jìn)行候選致病基因直接測序(圖 2 )［8，15，16，60，77］，這樣可盡可能縮小檢測基因范圍。但近年來有學(xué)者認(rèn)為，SRNS患兒致病基因分析應(yīng)該先于腎活檢，其理由為腎活檢具有創(chuàng)傷性，腎臟病理類型與致病基因并沒有直接的關(guān)系。盡管多數(shù)SRNS患兒主要腎臟病理為FSGS和DMS。但研究發(fā)現(xiàn)，遺傳性SRNS患兒的早期腎臟病理改變可為輕微病變(MCD)或系膜增殖性腎小球腎炎(MsPGN)，晚期可以表現(xiàn)為FSGS或DMS，并無特征性改變［14，15］。由于1歲以內(nèi)兒童 N S主要由 N PHS1、NPHS2 和WT1等基因突變引起，特別是先天性腎病綜合征(CNS)［74，78］。因此，對 C NS 和嬰兒型 N S 患兒應(yīng)常規(guī)行NPHS1、NPHS2和 WT1等基因分析，更應(yīng)該先于腎活檢［8，15，60，78］。合理的兒童 S RNS 相關(guān)致病基因臨床分析策略應(yīng)該是根據(jù)特定SRNS兒童人群(遺傳背景相似)的突變圖譜來選擇致病基因分析。這就需要通過對特定SRNS兒童人群進(jìn)行致病基因研究，建立該人群SRNS致病基因突變圖譜。成人主要依據(jù)是家族性或散發(fā)性來決定基因分析策略，如是家族性，遺傳方式為 A D，可考慮行 A CTN4、TRPC6和INF2分析;遺傳方式為AR，可行NPHS2分析。如果是散發(fā)性，可以不用進(jìn)行基因分析，或行 N PHS2 Q229R位點分析，如果存在NPHS2 Q229R，可考慮進(jìn)行全NPHS2 基因分析［12，14，16，79］。

圖1 綜合征型SRNS基因檢測流程圖

圖2 非綜合征型SRNS基因檢測流程圖

5 SRNS相關(guān)致病基因臨床分析的意義

SRNS 發(fā)病機(jī)制和治療一直困擾著兒科臨床醫(yī)生或腎臟病工作者。SRNS致病基因不僅能明確患者的病因和發(fā)病機(jī)制，而且可以指導(dǎo)治療。指導(dǎo)治療體現(xiàn)在不必要使用糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑，進(jìn)入ESRD的SRNS患者優(yōu)先考慮腎移植治療［15，80，81］。SRNS致病基因分析是臨床提供遺傳咨詢的依據(jù)，這種遺傳咨詢不僅可以提供給患者的父母，同時也可提供給患者本人［8，77］。如父母是NPHS1突變的攜帶者，其子女發(fā)生CNS的概率為25%，母親在妊娠20周后應(yīng)該檢測α甲胎蛋白(AFP)，AFP顯著增高提示CNS可能性極大，必要時可行產(chǎn)前診斷;又如 W T1突變的患者，理論上有發(fā)生Wilm's腫瘤和腎胚胎瘤的可能，應(yīng)該定期隨訪腎臟超聲［11，37，77］。

總之，SRNS致病基因多種，SRNS患者的表型和基因型復(fù)雜。臨床工作者應(yīng)該首先在不同遺傳背景人群構(gòu)建SRNS基因突變圖譜，根據(jù)圖譜再構(gòu)建基因分析的方案，然后依據(jù)方案選擇經(jīng)濟(jì)、快速和準(zhǔn)確的方法來分析SRNS致病基因。雖然基于芯片技術(shù)的多基因外顯子捕獲和高通量測序?qū)⑹俏磥鞸RNS相關(guān)致病基因全面分析的方向，這些技術(shù)已經(jīng)不是問題，但是龐大的測序數(shù)據(jù)分析將成為這項技術(shù)開展的新問題。集數(shù)學(xué)、生物學(xué)和計算機(jī)學(xué)為一體的生物信息學(xué)發(fā)展會幫助解決這些新問題。

［1］Greenbaum LA， Benndorf R， Smoyer WE.Childhood nephrotic syndrome-current and future therapies.Nat Rev Nephrol，2012，8(8):445-458

［2］Davin JC， Rutjes NW.Nephrotic syndrome in children:from bench to treatment.Int J Nephrol，2011，372304

［3］Machado JR， Rocha LP， Neves PD， et al.An overview of molecular mechanism of nephrotic syndrome.Int J Nephrol，2012，937623

［4］ Patrakka J， Tryggvason K.New insights into the role of podocytes in proteinuria.Nat Rev Nephrol，2009，5(8):463-468

［5］Lennon R， Watson L， Webb NJ.Nephrotic syndrome in children.Paediatr and child health，2012，20(1):36-42

［6］Sinha A， Bagga A.Nephrotic syndrome.Indian J Pediatr，2012，79(8):1045-1055

［7］Saleem MA.New developments in steroid-resistant nephrotic syndrome.Pediatr Nephrol， 2013， 28(5):699-709

［8］Benoit G， Machuca E， Antignac C.Hereditary nephrotic syndrome:a systematic approach for genetic testing and a review of associated podocyte gene mutations.Pediatr Nephrol，2010，25(9):1621-1632

［9］Mccarthy HJ， Saleem MA.Genetics in clinical practice:nephrotic and proteinuric syndromes.Nephron Exp Nephrol，2011，118(1):1-8

［10］Liapis H.Molecular pathology of nephrotic syndrome in childhood:a contemporary approach to diagnosis.Pediatr Dev Pathol，2008，11(4):154-163

［11］Lowik MM， Groenen PJ， Levtchenko EN， et al.Molecular genetic analysis of podocyte genes in focal segmental glomerulosclerosis-a review.Eur J Pediatr，2009，168(11):1291-1304

［12］D'Agati VD， Kaskel FJ， Falk RJ.focal segmental glomerulosclerosis.N Engl J Med，2011， 365(25):2398-2411

［13］Jungraithmayr TC， Hofer K， Cochat P， et al.Screening for NPHS2 mutations may help predict FSGS recurrence after transplantation.J Am Soc Nephrol，2011，22(3):579-585

［14］Santin S， Bullich G， Tazon-Vega B， et al.Clinical utility of genetic testing in children and adults with steroid-resistant nephrotic syndrome.Clin J Am Soc Nephrol，2011，6(5):1139-1148

［15］Gbadegesin RA， Winn MP， Smoyer WE.Genetic testing in nephrotic syndrome-challenges and opportunities.Nat Rev Nephrol，2013，9(3):179-184

［16］Lipska BS， Iatropoulos P， Maranta R， et al.Genetic screening in adolescents with steroid-resistant nephrotic syndrome.Kidney Int，2013， 84(1):206-213

［17］Gubler MC.Nephrotic syndrome:Genetic testing in steroidresistant nephrotic syndrome.Nat Rev Nephrol，2011，7(8):430-431

［18］The Subspecialty Group of Nephrology， Society of Pediatrics，Chinese Medical Association(中華醫(yī)學(xué)會兒科分會腎臟病學(xué)組).Evidence-based guidelines on diagnosis and treatment of childhood common renal diseases(Ⅰ)Evidence-bused guideline on diagnosis and treatment of steroid-sensitive，relapsing/steroid-dependent nephrotic syndrome(for trial implementation)Chin J Pediatr(中華兒科雜志)，2009，47(3):167-169

［19］Lombel RM， Gipson DS， Hodson EM.Treatment of steroidsensitive nephrotic syndrome:new guidelines from KDIGO.Pediatr Nephrol，2013，28(3):415-426

［20］Piscione TD， Licht C.Genetics of proteinuria:an overview of gene mutations associated with nonsyndromic proteinuric glomerulopathies.Adv Chronic Kidney Dis，2011，18(4):273-289

［21］Kestila M，Lenkkeri U，Mannikko M，et al.Positionally cloned gene for a novel glomerular protein-nephrin-is mutated in congenital nephrotic syndrome.Mol Cell，1998，1(4):575-582

［22］Lenkkeri U， Mannikko M， Mccready P， et al.Structure of the gene for congenital nephrotic syndrome of the finnish type(NPHS1)and characterization of mutations.Am J Hum Genet，1999，64(1):51-61

［23］Boute N， Gribouval O， Roselli S， et al.NPHS2， encoding the glomerular protein podocin，is mutated in autosomal recessive steroid-resistant nephrotic syndrome.Nat Genet，2000，24(4):349-354

［24］Hinkes B， Wiggins RC， Gbadegesin R， et al.Positional cloning uncovers mutations in PLCE1 responsible for a nephrotic syndrome variant that may be reversible.Nat Genet，2006，38(12):1397-1405

［25］Ozaltin F， Ibsirlioglu T， Taskiran EZ， et al.Disruption of PTPRO causes childhood-onset nephrotic syndrome.Am J Hum Genet，2011，89(1):139-147

［26］Kaplan JM， Kim SH， North KN， et al.Mutations in ACTN4，encoding alpha-actinin-4，cause familial focal segmental glomerulosclerosis.Nat Genet，2000，24(3):251-256

［27］Winn MP， Conlon PJ， Lynn KL， et al.A mutation in the TRPC6 cation channel causes familial focal segmental glomerulosclerosis.Science，2005，308(5729):1801-1804

［28］Gigante M， Pontrelli P， Montemurno E， et al.CD2AP mutations are associated with sporadic nephrotic syndrome and focal segmental glomerulosclerosis(FSGS).Nephrol Dial Transplant，2009，24(6):1858-1864

［29］Genovese G， Friedman DJ， Ross MD， et al.Association of trypanolytic ApoL1 variants with kidney disease in African Americans.Science，2010，329(5993):841-845

［30］Brown EJ， Schlondorff JS， Becker DJ， et al.Mutations in the formin gene INF2 cause focal segmental glomerulosclerosis.Nat Genet，2010，42(1):72-76

［31］Sanna-Cherchi S， Burgess KE， Nees SN， et al.Exome sequencing identified MYO1E and NEIL1 as candidate genes for human autosomal recessive steroid-resistant nephrotic syndrome.Kidney Int，2011，80(4):389-396

［32］Ozaltin F， Li B， Rauhauser A， et al.DGKE variants cause a glomerular microangiopathy that mimics membranoproliferative GN.J Am Soc Nephrol，2013，24(3):377-384

［33］Gupta I R， Baldwin C， Auguste D， et al.ARHGDIA:a novel gene implicated in nephrotic syndrome.J Med Genet，2013，50(5):330-338

［34］Li GM(李國民)，Gao XW，Xu H， et al.Clinical characteristics and INF2 gene mutation analysis in a family with autosomal dominant focal segmental glomerulosclerosis.Chin J Evid Based Pediatr(中國循證兒科雜志)，2013，8(3):192-196

［35］Genovese G， Tonna SJ， Knob AU， et al.A risk allele for focal segmental glomerulosclerosis in African Americans is located within a region containing APOL1 and MYH9.Kidney Int，2010，78(7):698-704

［36］Rosset S， Tzur S， Behar DM， et al.The population genetics of chronic kidney disease:insights from the MYH9-APOL1 locus.Nat Rev Nephrol，2011，7(6):313-326

［37］Pollak MR.Expanding the spectrum of NPHS1-associated disease.Kidney Int，2009，76(12):1221-1223

［38］Ruf RG， Schultheiss M， Lichtenberger A， et al.Prevalence of WT1 mutations in a large cohort of patients with steroidresistant and steroid-sensitive nephrotic syndrome.Kidney Int，2004，66(2):564-570

［39］Matejas V， Al-Gazali L， Amirlak I， et al.A syndrome comprising childhood-onset glomerular kidney disease and ocular abnormalities with progressive loss of vision is caused by mutated LAMB2.Nephrol Dial Transplant，2006，21(11):3283-3286

［40］Kopp JB.Glomerular pathology in autosomal dominant MYH9 spectrum disorders:what are the clues telling us about disease mechanism？.Kidney Int，2010，78(2):130-133

［41］Diomedi-Camassei F， Di Giandomenico S， Santorelli FM， et al.COQ2 nephropathy:a newly described inherited mitochondriopathy with primary renal involvement.J Am Soc Nephrol，2007，18(10):2773-2780

［42］Heeringa SF， Chernin G， Chaki M， et al.COQ6 mutations in human patients produce nephrotic syndrome with sensorineural deafness.J Clin Invest，2011，121(5):2013-2024

［43］Kambham N， Tanji N， Seigle RL， et al.Congenital focal segmental glomerulosclerosis associated with beta4 integrin mutation and epidermolysis bullosa.Am J Kidney Dis，2000，36(1):190-196

［44］Nicolaou N， Margadant C， Kevelam SH， et al.Gain of glycosylation in integrin alpha3 causes lung disease and nephrotic syndrome.J Clin Invest，2012，122(12):4375-4387

［45］Elizondo LI， Cho KS， Zhang W， et al.Schimke immunoosseous dysplasia:SMARCAL1 loss-of-function and phenotypic correlation.J Med Genet，2009，46(1):49-59

［46］Berkovic SF， Dibbens LM， Oshlack A， et al.Array-based gene discovery with three unrelated subjects shows SCARB2/LIMP-2 deficiency causes myoclonus epilepsy and glomerulosclerosis.Am J Hum Genet，2008，82(3):673-684

［47］Lopez LC，Schuelke M，Quinzii CM，et al.Leigh syndrome with nephropathy and CoQ10 deficiency due to decaprenyl diphosphate synthase subunit 2(PDSS2)mutations.Am J Hum Genet，2006，79(6):1125-1129

［48］Boyer O， Woerner S， Yang F， et al.LMX1B Mutations Cause Hereditary FSGS without Extrarenal Involvement.J Am Soc Nephrol，2013，24(8):1216-1222

［49］Agarwal AK， Zhou XJ， Hall RK， et al.Focal segmental glomerulosclerosis in patients with mandibuloacral dysplasia owing to ZMPSTE24 deficiency.J Investig Med，2006，54(4):208-213

［50］Perez-Duenas B， Garcia-Cazorla A， Pineda M， et al.Longterm evolution of eight Spanish patients with CDG type Ia:typical and atypical manifestations.Eur J Paediatr Neurol，2009，13(5):444-451

［51］Kranz C， Denecke J， Lehle L， et al.Congenital disorder of glycosylation type Ik(CDG-Ik):a defect of mannosyltransferase I.Am J Hum Genet，2004，74(3):545-551

［52］Imachi H， Murao K， Ohtsuka S， et al.A case of Dunnigantype familial partial lipodystrophy(FPLD)due to lamin A/C(LMNA)mutations complicated by end-stage renal disease.Endocrine，2009，35(1):18-21

［53］Kurogouchi F， Oguchi T， Mawatari E， et al.A case of mitochondrial cytopathy with a typical point mutation for MELAS，presenting with severe focal-segmental glomerulosclerosis as main clinical manifestation.Am J Nephrol，1998，18(6):551-556

［54］Chernin G， Vega-Warner V， Schoeb DS， et al.Genotype/phenotype correlation in nephrotic syndrome caused by WT1 mutations.Clin J Am Soc Nephrol，2010，5(9):1655-1662

［55］Hasselbacher K， Wiggins RC， Matejas V， et al.Recessive missense mutations in LAMB2 expand the clinical spectrum of LAMB2-associated disorders.Kidney Int，2006，70(6):1008-1012

［56］Iijima K， Someya T， Ito S， et al.Focal segmental glomerulosclerosis in patients with complete deletion of one WT1 allele.Pediatrics，2012，129(6):1621-1625

［57］Lee H， Han KH， Lee SE， et al.Urinary exosomal WT1 in childhood nephrotic syndrome.Pediatr Nephrol，2012，27(2):317-320

［58］Sartelet H， Pietrement C， Noel LH， et al.Collapsing glomerulopathy in Galloway-Mowat syndrome:a case report and review of the literature.Pathol Res Pract，2008，204(6):401-406

［59］Fletcher J， Mcdonald S， Alexander SI.Prevalence of genetic renal disease in children.Pediatr Nephrol，2013，28(2):251-256

［60］Rood IM， Deegens JK， Wetzels JF.Genetic causes of focal segmental glomerulosclerosis:implications for clinical practise.Nephrol Dial Transplant，2012， 27(3):882-890

［61］Ovunc B， Ashraf S， Vega-Warner V， et al.Mutation analysis of NPHS1 in a worldwide cohort of congenital nephrotic syndrome patients.Nephron Clin Pract，2012，120(3):139-146

［62］Santin S， Tazon-Vega B， Silva I， et al.Clinical value of NPHS2 analysis in early-and adult-onset steroid-resistant nephrotic syndrome.Clin J Am Soc Nephrol，2011，6(2):344-354

［63］Frishberg Y， Rinat C， Megged O， et al.Mutations in NPHS2 encoding podocin are a prevalent cause of steroid-resistant nephrotic syndrome among Israeli-Arab children.J Am Soc Nephrol，2002，13(2):400-405

［64］Benoit G， Machuca E， Nevo F， et al.Analysis of recessive CD2AP and ACTN4 mutations in steroid-resistant nephrotic syndrome.Pediatr Nephrol，2010，25(3):445-451

［65］Mottl AK， Lu M， Fine CA， et al.A novel TRPC6 mutation in a family with podocytopathy and clinical variability.BMC Nephrol，2013，14:104

［66］Boyer O， Benoit G， Gribouval O， et al.Mutational analysis of the PLCE1 gene in steroid resistant nephrotic syndrome.J Med Genet，2010，47(7):445-452

［67］Barua M， Brown EJ， Charoonratana VT， et al.Mutations in the INF2 gene account for a significant proportion of familial but not sporadic focal and segmental glomerulosclerosis.Kidney Int，2012， 83(2):316-322

［68］Kopp J B， Winkler CA， Nelson GW.MYH9 genetic variants associated with glomerular disease:what is the role for genetic testing？.Semin Nephrol，2010，30(4):409-417

［69］Yu Z， Ding J， Huang J， et al.Mutations in NPHS2 in sporadic steroid-resistant nephrotic syndrome in Chinese children.Nephrol Dial Transplant，2005，20(5):902-908

［70］Li J， Ding J， Zhao D， et al.WT1 gene mutations in Chinese children with early onset nephrotic syndrome.Pediatr Res，2010，68(2):155-158

［71］Mao J， Zhang Y， Du L， et al.NPHS1 and NPHS2 gene mutations in Chinese children with sporadic nephrotic syndrome.Pediatr Res，2007，61(1):117-122

［72］Knob AL.Principles of genetic testing and genetic counseling for renal clinicians.Semin Nephrol，2010，30(4):431-437

［73］Guay-Woodford LM， Knoers NV.Genetic testing:considerations for pediatric nephrologists.Semin Nephrol，2009，29(4):338-348

［74］Lee JH， Han KH， Lee H， et al.Genetic basis of congenital and infantile nephrotic syndromes.Am J Kidney Dis，2011，58(6):1042-1043

［75］Mccarthy HJ， Bierzynska A， Wherlock M， et al.Simultaneous sequencing of 24 genes associated with steroid-resistant nephrotic syndrome.Clin J Am Soc Nephrol，2013，8(4):637-648

［76］Kopp JB.An Expanding Universe of FSGS Genes and Phenotypes:LMX1B Mutations Cause Familial Autosomal Dominant FSGS Lacking Extrarenal Manifestations.J Am Soc Nephrol，2013，24(8):1183-1185

［77］Joshi S， Andersen R， Jespersen B， et al.Genetics of steroidresistant nephrotic syndrome:a review of mutation spectrum and suggested approach for genetic testing.Acta Paediatr，2013，102(9):844-856

［78］Hinkes B G， Mucha B， Vlangos CN， et al.Nephrotic syndrome in the first year of life:two thirds of cases are caused by mutations in 4 genes(NPHS1，NPHS2，WT1，and LAMB2).Pediatrics，2007，119(4):907-919

［79］Kerti A， Csohany R， Szabo A， et al.NPHS2 p.V290M mutation in late-onset steroid-resistant nephrotic syndrome.Pediatr Nephrol，2013，28(5):751-757

［80］Greenbaum LA， Benndorf R， Smoyer WE.Childhood nephrotic syndrome--current and future therapies.Nat Rev Nephrol，2012，8(8):445-458

［81］Chiang CK， Inagi R.Glomerular diseases:genetic causes and future therapeutics.Nat Rev Nephrol，2010，6(9):539-554