“益氣調(diào)血，扶本培元”針法對(duì)快速老化癡呆小鼠腦組織海馬細(xì)胞凋亡的影響*

河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院 (石家莊050091)

吳中秋 梁玉磊 徐江紅△ 王子鳴△△ 張瑞娟 陳子龍 張 敏 張一昕

隨著社會(huì)老齡化的加劇，老年癡呆癥的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響著患者的生存質(zhì)量，給社會(huì)、家庭帶來(lái)巨大的負(fù)擔(dān)，已成為臨床中亟待解決的難題之一。［1］臨床發(fā)現(xiàn)，“益氣調(diào)血，扶本培元”治療本病療效顯著。［2－3］為進(jìn)一步指導(dǎo)臨床，故設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)，研究以快速老化癡呆鼠SAMP10 為研究對(duì)象，正常老化鼠SAMR1 為對(duì)照，觀察小鼠腦組織海馬細(xì)胞凋亡情況，探求“益氣調(diào)血，扶本培元”針法治療老年性癡呆可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 選用健康雄性8月齡快速老化癡呆小鼠(SAMP10)30 只，體質(zhì)量28～32 g/只，由天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(津?qū)崉?dòng)質(zhì)M 準(zhǔn)字第108 號(hào))，隨機(jī)分為3 組，即P10 對(duì)照組，P10 針刺組和P10 非穴組，每組10 只。選取同源健康雄性8月正常老化小鼠(SAMR1)10 只作為正常對(duì)照組，即R1 對(duì)照組。恒溫單籠飼養(yǎng)，自然進(jìn)食水。

1.2 試劑與儀器 原位細(xì)胞凋亡(Tunel)試劑盒(德國(guó)寶靈曼公司);一次性30 號(hào)0.5 寸無(wú)菌針灸針(蘇州醫(yī)療器械廠);小鼠跳臺(tái)儀(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所);BX60 熒光顯微鏡(日本OLYMPUS 公司);RM2125 型切片機(jī)(德國(guó)LEICA 公司);HPIAS－1000 型高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)(同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)千屏影像工程公司)。

1.3 治療方法 選穴:P10 針刺組遵循“益氣調(diào)血，扶本培元”針刺，［4］穴取膻中、中脘、氣海、血海、足三里;穴位定位參照《中國(guó)獸醫(yī)針灸學(xué)》。［5］針刺方法:針刺膻中、中脘、氣海、足三里得氣后，行捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法30 s，血海得氣后，行捻轉(zhuǎn)瀉法30 s。非穴位組取雙脅下兩個(gè)固定非穴位點(diǎn)，行平補(bǔ)平瀉30 s。R1 和P10 對(duì)照組經(jīng)行相同時(shí)間和程度的捉抓。1 次/d，連續(xù)治療15 d。

1.4 指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.4.1 行為學(xué)檢查:治療結(jié)束后進(jìn)行跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)，將小鼠置于跳臺(tái)儀中適應(yīng)3 min，然后接通36 v 交流電，記錄動(dòng)物受電刺激后跳上橡皮墊的反應(yīng)時(shí)間和5 min 內(nèi)受到電擊的次數(shù)(錯(cuò)誤次數(shù))，結(jié)果作為學(xué)習(xí)成績(jī)。

1.4.2 腦組織細(xì)胞凋亡檢測(cè):采用Tunel 法檢測(cè)。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后斷頭處死小鼠，取左側(cè)腦組織進(jìn)行染色封片、鏡檢，用圖象分析儀分別對(duì)海馬CA1 區(qū)進(jìn)行處理，測(cè)量單位面積凋亡細(xì)胞數(shù)目。(光鏡下陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)記呈棕黃色，陰性細(xì)胞呈淡藍(lán)色。以上指標(biāo)由河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心檢測(cè)。)

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)檢測(cè) P10 對(duì)照組和P10 非穴組較R1 對(duì)照組和P10 針刺組反應(yīng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P＜0.01)，錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多(P＜0.01);P10 針刺組與R1 對(duì)照組比較，小鼠反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)，錯(cuò)誤次數(shù)略多，但是差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。詳見表1。

表1 各組大鼠跳臺(tái)學(xué)習(xí)成績(jī) (±s)

表1 各組大鼠跳臺(tái)學(xué)習(xí)成績(jī) (±s)

注:與R1 對(duì)照組比較，△△P＜0.01;與P10 針刺組比較，◇◇P＜0.01

分組 n 反應(yīng)時(shí)間(s) 錯(cuò)誤次數(shù)(次)10 36.72±2.16 2.52±0.32 P10 對(duì)照組 10 50.78±6.67△△◇◇ 7.89±2.06△△◇◇P10 針刺組 10 40.12±3.48 3.04±1.15 P10 非穴組 10 47.31±7.23△△◇◇ 7.03±1.98 R1 對(duì)照組△△◇◇

2.2 小鼠腦組織海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡情況 各組小鼠腦組織海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡結(jié)果:R1 對(duì)照組見少量散在凋亡細(xì)胞，P10 對(duì)照組與P10 非穴組分布有大量陽(yáng)性細(xì)胞，其凋亡細(xì)胞數(shù)目多于R1 對(duì)照組和P10 針刺組(P＜0.05);P10 針刺組見部分凋亡細(xì)胞略多于R1 對(duì)照組，但差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。詳見表2。

表2 各組小鼠腦組織海馬CA1 區(qū)細(xì)胞凋亡結(jié)果(個(gè)，±s)

表2 各組小鼠腦組織海馬CA1 區(qū)細(xì)胞凋亡結(jié)果(個(gè)，±s)

注:與R1 對(duì)照組比較，△P＜0.05;與P10 針刺組比較，◇P＜0.05

分組 n 細(xì)胞凋亡數(shù)R1 對(duì)照組10 18.74±1.58 P10 對(duì)照組 10 32.71±6.58△◇P10 針刺組 10 21.79±5.57 P10 非穴組 10 28.75±5.70△◇

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，癡呆的病位在腦府，與氣虛血瘀關(guān)系密切?！夺t(yī)林改錯(cuò)》指出:“元?dú)饧忍摚夭荒苓_(dá)于血管，血管無(wú)氣，必停留而瘀。”本病病發(fā)老年，臟腑已虛，元?dú)獠蛔?，血運(yùn)無(wú)力，終致腦髓失養(yǎng)，神明失常，出現(xiàn)健忘失聰、思維遲鈍等智能低下之癥。楊氏指出氣非單指元?dú)?，也包括三焦之氣。其認(rèn)為老年癡呆癥是三焦氣化功能紊亂的結(jié)果。［6］三焦是氣機(jī)升降出入的通道，主導(dǎo)各部氣機(jī)。其下合于腎與膀胱，上連于心肺，中聚于脾胃，元?dú)馔ㄟ^三焦而充沛全身。膻中位于上焦，為氣之會(huì)?！鹅`樞·脹論》言:“君主之宮城也?！蹦苁枥辖箽饣?，行氣以活血;中脘、足三里意在調(diào)理中焦，補(bǔ)中益氣，資生氣血;氣海位于臍下，為元?dú)鈪R聚之處?！躲~人》釋言:“生氣之海”，可總調(diào)下焦氣機(jī)，善治“真氣不足”，具培補(bǔ)升發(fā)元?dú)庵ΑＶT穴合用，通條三焦各部氣機(jī)，配以血海養(yǎng)血行血，使肌體功能協(xié)調(diào)共濟(jì)。［7］

現(xiàn)代研究表明，神經(jīng)細(xì)胞的存活數(shù)量可直接影響神經(jīng)突觸的可塑性，神經(jīng)細(xì)胞凋亡可出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶障礙，［8］發(fā)生進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙。［9］實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，“益氣調(diào)血，扶本培元”針法能夠減低SAMP10 小鼠的學(xué)習(xí)反應(yīng)時(shí)間，減少錯(cuò)誤次數(shù);同時(shí)能夠降低腦組織海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡率，從而達(dá)到改善老年癡呆癥狀和提高其學(xué)習(xí)記憶的能力。

［1］楊輝，Colette B rowning，Shane Thomas.老年癡呆—基于社區(qū)干預(yù)策略的政策探討［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2008，8A:(11):1 323－1 325

［2］韓景獻(xiàn)，于建春，于濤，等.針刺干預(yù)腦衰老的臨床及基礎(chǔ)研究［J］.天津中醫(yī)藥，2005，22 (5):438－438

［3］胡起超，孫兆元，孟媛，等.益氣調(diào)血、扶本培元針法治療老年性癡呆40 例［J］.陜西中醫(yī)，2010，31 (3):343－344

［4］劉存志，于建春，韓景獻(xiàn).“益氣調(diào)血，扶本培元”針法對(duì)多發(fā)梗死性癡呆模型大鼠聯(lián)合型學(xué)習(xí)能力的影響［J］.天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24 (2):67－69

［5］中國(guó)獸醫(yī)針灸學(xué)會(huì).中國(guó)獸醫(yī)針灸學(xué)［M］.北京:北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1984.212

［6］楊宏波，張雪竹，于建春，等.脾胃在“三焦氣化失司所致癡呆”中的作用［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2011，38 (1):60

［7］于建春，韓鸚贏，成海燕，等.“益氣調(diào)血，扶本培元”針法腧穴配伍思想探微［J］.中國(guó)針灸，2011，31 (9):814－816

［8］彭躍鋼，黃立武.復(fù)方絞股藍(lán)總甙膠囊對(duì)血管性癡呆大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，22(3):368

［9］周毅，王景，周高東，等.人臍血細(xì)胞靜脈輸注對(duì)血管性癡呆大鼠行為和海馬細(xì)胞凋亡的影響［J］.中國(guó)行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2006，10 (15):868－870