不穩(wěn)定型心絞痛患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞與冠狀動脈狹窄程度的關(guān)系＊

南方醫(yī)科大學(xué)附屬東莞市石龍人民醫(yī)院心血管內(nèi)科（東莞523326）陳杰民 涂 昌 梁逸仙 蘭 軍 陳本發(fā) 劉映峰

外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞（Endothelial progenitor cells，EPCs）是一種存在于血液循環(huán)系統(tǒng)中能夠增殖并分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，對微血管新生、損傷血管內(nèi)皮修復(fù)和功能維持中有重要的作用。1997年Asahara等發(fā)現(xiàn)，在循環(huán)外周血中存在一種能分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞（ECs）的前體細(xì)胞，并將其命名為EPCs［1］。EPCs表面有特異的標(biāo)記物，如CD34及CD133，是鑒定EPCs的標(biāo)志。研究表明，EPCs在出生后的機(jī)體中作為能特異性聚集于缺血損傷部位并增殖分化為ECs的一群前體細(xì)胞，不僅參與了人胚胎血管的生成，同時也參與出生后血管新生和內(nèi)皮損傷后的修復(fù)過程［2］。研究表明，外周血EPCs在穩(wěn)定性心絞痛患者較正常人有明顯降低，而急性心肌梗死患者在短期內(nèi)反而增加［3］，但不穩(wěn)定性心絞痛患者外周血EPCs的水平目前意見尚不統(tǒng)一，我們擬通過研究外周血EPCs的數(shù)量同不穩(wěn)定性心絞痛患者冠狀動脈病變程度的相關(guān)性，探討EPCs在不穩(wěn)定性心絞痛患者中的作用。

對象及方法

1 研究對象 選取2011年3月至2012年8月在我院心血管內(nèi)科住院確診的，年齡在45～69歲的不穩(wěn)定性心絞痛患者53例為患者組，診斷符合中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會制定的標(biāo)準(zhǔn)，入院前1個月內(nèi)具有典型心絞痛的癥狀、心電圖示缺血性ST段異常改變，且入院實驗室檢查心肌酶及肌鈣蛋白值無異常改變。選擇同期同年齡段行冠脈造影證實無冠狀動脈病變的患者33例為對照組。實驗組及對照組均排除腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能不全、急性腦血管意外、糖尿病等疾病，入院時未服用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）及血管緊張素受體阻斷劑（ARB）類降壓藥及抗凝和調(diào)脂藥。

2 研究方法 ①流式細(xì)胞儀測定EPCs數(shù)量：選擇入院后準(zhǔn)備進(jìn)行冠脈造影的患者，采用EDTA管抽取靜脈血2ml，流式細(xì)胞儀檢測外周血CD34及CD133的細(xì)胞含量（美國BECKMAN.COULTER公司），CD133流式細(xì)胞熒光抗體一抗購于Neomarker公司，二抗購于Southern Biotech公司，CD34流式細(xì)胞熒光抗體購于BD公司。取200μl外周血與CD133流式細(xì)胞熒光抗體一抗孵育20min，再加入CD133二抗孵育20min，之后加入CD34流式細(xì)胞熒光抗體孵育20min。最后將紅細(xì)胞溶解，剩余細(xì)胞用20g／L多聚甲醛固定，以流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。CD34和CD133雙陽性細(xì)胞為EPCs，計算100000個單個核細(xì)胞CD34及CD133陽性細(xì)胞數(shù)量。②冠狀動脈血管狹窄程度評估：所有患者完善相關(guān)檢查后行冠狀動脈造影，根據(jù)Gensini評分系統(tǒng)對每支血管狹窄程度進(jìn)行定量分析：0分為無異常、1分為狹窄程度＜25%、以此類推2分（26%～50%）、4分（51%～75%）、8分（76%～90%）、16（91%～99%）、100%（閉塞）為32分，并按照病變部位乘以相應(yīng)的系數(shù)。每例患者最終評分為各分支評分之和。

3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用±s表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)分析采用單因素直線相關(guān)分析法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 患者組與對照組比較 患者組血清總膽固醇（TC）及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平明顯高于對照組，患者組外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）數(shù)量明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01），見表1。

表1 兩組人群基本特征分布

2 不同Gensini評分患者EPCs數(shù)量比較 患者組患者中，EPCs數(shù)量隨著Gensini評分的增加而升高（P＜0.05，表2、附圖）；Gensini評分與外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）數(shù)量呈正相關(guān)（r＝0.693，t＝28.254，P＜0.01）.

表2 不同Gensini評分患者EPCs數(shù)量比較

討 論

早在1999年T.Takahashi就從動物試驗發(fā)現(xiàn)：EPCs有維持血管內(nèi)皮的穩(wěn)定和參與新生血管形成的作用，因而外周血EPCs的水平可反映出冠狀動脈血管內(nèi)皮化的程度［2］。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，EPCs具有促進(jìn)血管新生、修復(fù)損傷內(nèi)膜等作用，并可用于組織工程血管的制備，在心血管疾病的預(yù)防和治療上具有很好的前景［3］。研究發(fā)現(xiàn)，作為機(jī)體對心肌缺血和內(nèi)皮受損的一種代償性反應(yīng)，在組織的再灌注缺血缺氧性損傷過程中，內(nèi)皮祖細(xì)胞從骨髓中動員至外周血，參與血管的新生和血管內(nèi)皮的修復(fù)［4］。

附圖 流式細(xì)胞儀檢測的外周血EPCs散點圖

本研究發(fā)現(xiàn)，不穩(wěn)定性心絞痛患者中，外周血EPCs數(shù)量明顯低于對照組，說明冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的多項因素能影響外周血中EPCs的數(shù)量。研究顯示，心血管危險因素中的高血壓LDL、超酸C反應(yīng)蛋白（hsCRP）等均可使外周血EPCs的數(shù)量減少［5］。此外，由于EPCs參與內(nèi)皮損傷后的修復(fù)，持續(xù)的內(nèi)皮損傷和內(nèi)皮功能障礙可導(dǎo)致EPCs過量消耗［6］。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，不穩(wěn)定性心絞痛患者中，冠狀動脈狹窄程度較嚴(yán)重的患者外周血EPCs數(shù)量高于狹窄程度較低的患者。國外研究發(fā)現(xiàn)［7］，心絞痛發(fā)作時，循環(huán)中EPCs的含量增加，提示冠狀動脈的急性缺血及內(nèi)皮損傷是EPCs從骨髓動員入血的一個確切的刺激因素。不穩(wěn)定性心絞痛的患者因其冠脈斑塊不穩(wěn)定而易導(dǎo)致心肌缺血加重，可能會存在有EPCs動員入血，通過增加外周血EPCs的含量，促進(jìn)血管新生和血管內(nèi)皮修復(fù)從而達(dá)到改善心肌缺血再灌注損傷的目的。

總之，內(nèi)皮功能障礙的本質(zhì)是內(nèi)皮損傷和修復(fù)之間的動態(tài)平衡的破壞，EPCs在維持心血管系統(tǒng)穩(wěn)定狀態(tài)中起著重要作用，甚至可以將EPCs池作為心血管系統(tǒng)是否健康的一面鏡子。本研究通過觀察不穩(wěn)定性心絞痛患者的外周血EPCs水平，從而明確冠脈病變的程度與外周血EPCs水平相關(guān)，有助于了解冠心病不穩(wěn)定性心絞痛的冠脈病變情況。同時，進(jìn)一步分析不穩(wěn)定性心絞痛患者在急性冠脈缺血時出現(xiàn)的內(nèi)皮祖細(xì)胞動員情況，可為內(nèi)皮祖細(xì)胞在急性冠脈綜合征時的移植提供理論依據(jù)。

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