含羞草總黃酮不同提取方法的比較*

吳崇珍，李玉賢，袁 珂，王 勇，張澤志，王艷坤

1)河南教育學(xué)院化學(xué)系 鄭州 450046 2)河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 鄭州 450008 3)浙江農(nóng)林大學(xué)林生院 臨安 311300

含羞草具有安神止痛、化痰止咳、清熱利尿等功效，主要分布在我國熱帶、亞熱帶地區(qū)，資源豐富，便于采集[1]。從含羞草中已相繼分離出黃酮苷類、酚類、皂苷等化合物[2-5]。作者分別用回流提取、微波萃取、超聲提取[6]、滲漉提取、冷浸提取、索氏提取6種方法對含羞草總黃酮進行提取，同時以蘆丁作對照品進行總黃酮含量測定，比較提取效率，探討含羞草總黃酮的最佳提取方法。

1 材料、方法與結(jié)果

1.1材料與儀器含羞草樣品采自海南三亞，由海南大學(xué)藥用植物學(xué)教授黃世滿鑒定為豆科含羞草；蘆丁對照品從中國藥品生物制品鑒定所購買。 實驗所需儀器如下：UV-2102PCS紫外可見分光光度計(上海龍尼柯儀器有限公司)，KQ-250B超聲波提取器(昆山市超聲儀器有限公司)，NJL07-3型實驗專用微波爐(南京杰全微波設(shè)備有限公司，額定功率800 W)，Millipore Sim-plicity型超純水器(美國Millipore公司)，RE-52A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，真空薄膜濃縮裝置(自裝[7])，101-1型電熱恒溫干燥箱，微量分析天平(EETTLER AE 240，瑞士)，微孔濾膜(上海醫(yī)藥工業(yè)研究院)。

1.2含羞草樣品中總黃酮的提取

1.2.1 回流提取 準確稱取粉碎并過60目篩的含羞草3份，每份20 g，分別置于圓底燒瓶中，在80 ℃恒溫水浴鍋中，加200 mL體積分數(shù)60%乙醇，回流3 h，提取 3 次。提取后抽濾，合并提取液，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，定量轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用體積分數(shù)60%乙醇稀釋定容至刻度，搖勻。

1.2.2 微波萃取 準確稱取粉碎并過60目篩的含羞草3份，每份20 g，分別置于微波爐中，用體積分數(shù)60%乙醇微波萃取，將提取液蒸發(fā)濃縮，定量轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中，用體積分數(shù)60%乙醇定容至刻度，搖勻。

1.2.3 超聲提取 準確稱取粉碎并過60目篩的含羞草3份，每份20 g，用回流提取所用溶劑超聲提取，將提取液蒸發(fā)濃縮，余同1.2.2。

1.2.4 滲漉提取 同回流提取準確稱取過篩的含羞草，用回流提取所用溶劑滲漉提取，將滲漉液濃縮，余同1.2.2。

1.2.5 冷浸提取 同回流提取準確稱取過篩的含羞草，用回流提取所用溶劑冷浸提取，將提取液濃縮，余同1.2.2。

1.2.6 索氏提取 同回流提取準確稱取過篩的含羞草，用回流提取所用溶劑進行索氏提取，將提取液濃縮，余同1.2.2。

1.3含羞草樣品中總黃酮含量的測定

1.3.1 標準曲線 蘆丁對照品標準溶液的配制：準確稱取烘干至恒重的蘆丁對照品，配成質(zhì)量濃度為0.128 g/L的蘆丁對照品標準溶液。用吸量管準確取上述標準溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于6只10 mL容量瓶中，參考文獻[2]的對應(yīng)步驟依次測定其吸光度(A)，以蘆丁質(zhì)量濃度C為橫坐標，相應(yīng)的A為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程：A=9.050 6C+0.006 8(R2=0.999 6)。

1.3.2 樣品測定 分別準確吸取上述6種提取方法所得的提取液 2 mL，置于25 mL容量瓶中，加入體積分數(shù)60%乙醇定容至刻度，搖勻，此為稀釋分析液。取稀釋分析液1.0 mL置于10 mL容量瓶中，按照1.3.1項所述的方法進行測定，按回歸方程計算出樣品溶液中的總黃酮質(zhì)量濃度，根據(jù)稀釋倍數(shù)及樣品質(zhì)量計算出樣品中總黃酮的質(zhì)量分數(shù)。

1.4結(jié)果見表1。

表1 6種提取方法提取的總黃酮質(zhì)量分數(shù)的比較

兩兩比較，P均<0.05。

2 討論

采用6種不同的提取方法對含羞草總黃酮進行提取，提取效率依次為：超聲提取>微波萃取>回流提取>滲漉提取>索氏提取>冷浸提取。其中，超聲提取法、微波萃取法和回流提取法的提取效率較高。

分析比較可知，超聲提取含羞草中的總黃酮成分完全，提取效率較高，節(jié)省溶劑和能源，被提取的黃酮成分不易被破壞。微波萃取提取出的有效成分量稍低于超聲法，是由微波輻射所引起的短時高溫對其中的熱敏性黃酮成分的影響所致，但微波萃取的時間更短，有快速高效的特點。回流提取時間較長，溶劑用量較大，因溶液長時間受熱，存在黃酮成分在持續(xù)較高溫度下可能發(fā)生變化并流失的問題。

綜上所述，含羞草總黃酮的提取工藝有多種，從提取效率和總黃酮成分的熱穩(wěn)定性考慮，應(yīng)優(yōu)選超聲提取和微波萃取。

[1] 國家中醫(yī)藥管理局編委會.中華本草：第4卷[M]. 上海:上海科技出版社,1999：573

[2] 袁珂, 呂潔麗, 殷明文.海南含羞草中黃酮碳苷類化學(xué)成分的研究[J]. 藥學(xué)學(xué)報, 2006,41(5):435

[3] 袁珂, 賈安, 呂潔麗, 等. 含羞草中新黃酮碳苷的結(jié)構(gòu)鑒定[J].分析化學(xué), 2007, 35(5):739

[4] 吳崇珍, 王艷坤, 李玉賢, 等. 含羞草組成成分藥學(xué)研究進展[J].河南教育學(xué)院學(xué)報, 2013, 22(1):27

[5] Zhang J, Yuan K, Zhou WL, et al. Studies on the active components and antioxidant activities of the extracts ofMimosapudicaLinn. from the southern of China[J]. Pharmacogn Mag， 2011,7(25):35

[6] 喬文濤, 張靜, 俞凌雁, 等. 含羞草中總黃酮提取純化工藝研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2009, 20(8):1986

[7] 袁珂, 俞莉. 真空薄膜濃縮裝置的研制及應(yīng)用研究[J]. 分析化學(xué),2005,33(9):1358