病理學(xué)大鼠創(chuàng)傷愈合實驗?zāi)Ｐ偷臉?gòu)建*

朱 峰，范 豪，宋雅穎，張 健，李珊珊

1)鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)系09級六班開拓者創(chuàng)新團(tuán)隊 鄭州 450052 2)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 鄭州 450052

創(chuàng)傷愈合是《病理學(xué)》課程中的重要章節(jié)，按照常規(guī)教學(xué)方法，老師做理論講解后，學(xué)生觀看組織學(xué)和病理學(xué)圖片。學(xué)生只在理論上知道創(chuàng)傷愈合的炎癥滲出、組織增生、瘢痕形成三個階段，印象并不深刻。作者探索建立一種簡便易行的創(chuàng)傷愈合大鼠模型，以便學(xué)生動態(tài)觀察創(chuàng)傷愈合過程，從而更好地理解理論知識，拓展思路并培養(yǎng)其動手能力。

1 材料與方法

1.1動物與分組清潔級SD大鼠28只，鄭州大學(xué)實驗動物中心提供，雌雄不拘，10～12周齡，體質(zhì)量250～350 g。采用隨機(jī)數(shù)字表將實驗動物分為1、3、5、7、14、28 d模型組及正常對照組，每組4只大鼠。

1.2造模方法戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠，置俯臥位，臀背部剃毛約6 cm直徑大小區(qū)域，常規(guī)消毒，鋪一次性無菌巾。模型組大鼠于臀背部脊柱兩側(cè)旁開1 cm處各做長1.5 cm皮膚切口，右側(cè)創(chuàng)口縫合，左側(cè)創(chuàng)口不縫合，創(chuàng)面自然止血，不包扎，不施藥。正常對照組大鼠臀背部脊柱一側(cè)旁開1 cm切開3 cm，分離皮下組織和肌肉，分層進(jìn)行解剖學(xué)組織結(jié)構(gòu)觀察；另一側(cè)臀背部取材1 cm3組織塊。手術(shù)后分籠飼養(yǎng)，給予消毒飼料及飲水，注意保持傷口干燥。

1.3觀察方法裸眼觀察各模型組大鼠創(chuàng)口愈合情況。斷頸處死各組大鼠，取創(chuàng)緣及周圍1 cm3組織塊。所有組織塊均石蠟包埋、切片及常規(guī)HE染色，顯微鏡下觀察創(chuàng)傷組織愈合情況及病理組織學(xué)改變。

2 結(jié)果

2.1正常大鼠臀背部解剖和組織學(xué)結(jié)構(gòu)大鼠背部解剖結(jié)構(gòu)由淺入深依次為：皮膚和皮下組織、淺筋膜、淺層肌肉組織、深筋膜、深層背部肌肉。組織學(xué)見皮膚層含有毛囊和附屬器，皮下組織較為疏松，淺筋膜由疏松結(jié)締組織和彈力纖維組成、染色較淺，淺層肌肉為束狀環(huán)形，肌肉下深筋膜組織較厚且致密。深筋膜下為縱行的背部肌肉。

2.2大鼠臀背部創(chuàng)口愈合過程的大體觀察1 d模型組大鼠：縫合創(chuàng)口輕度腫脹，少許滲出物，邊緣對合整齊，無出血和皮下組織外露；未縫合創(chuàng)口紅腫較嚴(yán)重，滲出物較多，創(chuàng)口哆開，皮下組織及淺層肌肉外露，創(chuàng)口少許滲血。3 d模型組大鼠：縫合創(chuàng)口腫脹消退，表面干燥，邊緣對合整齊；未縫合創(chuàng)口紅腫減輕，創(chuàng)面趨于干燥，創(chuàng)口邊緣回縮，創(chuàng)口兩側(cè)間距縮小。5 d模型組大鼠：縫合創(chuàng)口表面干燥，邊緣對合整齊；未縫合創(chuàng)口局部紅腫消退，創(chuàng)面干燥，創(chuàng)口邊緣繼續(xù)回縮、兩側(cè)間距進(jìn)一步變小，滲出物及肉芽組織逐步填平創(chuàng)口。7 d模型組大鼠：縫合創(chuàng)口拆線，留下一淡紅色的線形痕跡；未縫合創(chuàng)口創(chuàng)緣進(jìn)一步回縮，創(chuàng)口兩側(cè)間距進(jìn)一步變小。14 d模型組大鼠：縫合創(chuàng)口僅留下一白色線狀瘢痕；未縫合創(chuàng)口留下表面較為粗糙的瘢痕。28 d模型組大鼠：創(chuàng)口均已愈合，看不出造創(chuàng)痕跡。見圖1。

2.3大鼠臀背部創(chuàng)口愈合過程的病理組織學(xué)觀察

1 d模型組大鼠：未縫合創(chuàng)口哆開、創(chuàng)緣不整，可見大量中性粒細(xì)胞浸潤；縫合創(chuàng)口組織缺損少，創(chuàng)緣較整齊，可見少量炎細(xì)胞浸潤。創(chuàng)口邊緣基底細(xì)胞增生，向創(chuàng)口中心遷移。3 d模型組大鼠：未縫合創(chuàng)口大量炎性細(xì)胞浸潤，創(chuàng)口內(nèi)可見周圍脂肪組織嵌塞；縫合創(chuàng)口創(chuàng)緣整齊，少量炎細(xì)胞浸潤；創(chuàng)口邊緣開始長出肉芽組織。5 d模型組大鼠：未縫合創(chuàng)口底部及邊緣長出多量的肉芽組織；縫合創(chuàng)口肉芽組織趨于填滿創(chuàng)口。7 d模型組大鼠：未縫合創(chuàng)口仍有較多炎性細(xì)胞浸潤，從創(chuàng)口底部及邊緣長出多量的肉芽組織，創(chuàng)面收縮明顯；縫合創(chuàng)口肉芽組織基本將創(chuàng)口填滿，表皮結(jié)構(gòu)已基本恢復(fù)正常。14 d模型組大鼠：未縫合創(chuàng)口炎細(xì)胞浸潤減少，創(chuàng)緣可見新生毛細(xì)血管減少，纖維成分增多；縫合創(chuàng)口創(chuàng)面已基本消失，膠原纖維平行于皮膚表面，毛囊等附屬器尚未長出，肌層尚未完全修復(fù)。28 d模型組大鼠：未縫合創(chuàng)口瘢痕完全形成，瘢痕中膠原纖維與皮膚表面平行，纖維結(jié)締組織仍富于細(xì)胞，毛囊等皮膚附屬器未見再生，瘢痕部肌層缺如；縫合創(chuàng)口表皮和真皮的結(jié)構(gòu)均已基本恢復(fù)正常，幾乎看不出造創(chuàng)痕跡。見圖2。

圖1 模型組大鼠臀背部創(chuàng)傷愈合的大體觀察

圖2 大鼠臀背部創(chuàng)傷愈合的病理組織學(xué)觀察(HE,×10)

3 討論

3.1大鼠創(chuàng)傷愈合實驗?zāi)Ｐ妥鳛榻虒W(xué)實驗的可行性創(chuàng)傷愈合是《病理學(xué)》課程中的重要章節(jié)，但本科生教學(xué)時間和經(jīng)費有限，因此采用什么實驗動物、使用較少的經(jīng)費、在較短的時間內(nèi)完成創(chuàng)傷愈合實驗需要探索。文獻(xiàn)[1-2]顯示，創(chuàng)傷愈合常用的動物有鼠、兔或豬等，切口常選在動物的背部或腹部，這種模型適合觀察創(chuàng)口愈合過程、全身或局部使用藥物和敷料等對創(chuàng)口愈合的影響[3]。大鼠常用于眼科、婦產(chǎn)科創(chuàng)傷愈合和外科胃腸吻合實驗研究[4-6]。大鼠價格低廉、飼養(yǎng)方便，形體適合進(jìn)行1～3 cm大小的創(chuàng)傷實驗，并且大鼠性格溫順，觀察方便，創(chuàng)傷愈合過程較快，Ⅰ期愈合在7～14 d可以完整觀察到炎癥滲出、組織增生、組織改建三個創(chuàng)傷愈合的基本過程。所以該研究選用大鼠作為病理學(xué)創(chuàng)傷愈合實驗?zāi)Ｐ蛣游铩?/p>

3.2大鼠創(chuàng)傷愈合過程該實驗結(jié)果顯示，大鼠臀背部創(chuàng)傷后，縫合創(chuàng)口和自然愈合創(chuàng)口愈合時間和愈合后局部組織結(jié)構(gòu)明顯不同。

縫合(Ⅰ期愈合)創(chuàng)口：大體觀察創(chuàng)口炎癥反應(yīng)較輕微，可在5～7 d達(dá)到臨床愈合標(biāo)準(zhǔn)；病理組織學(xué)顯示炎癥滲出不明顯，3 d開始長出肉芽組織，7 d創(chuàng)口區(qū)基本為肉芽組織填平，14 d已進(jìn)入組織改建期，28 d組織改建完成，組織結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常。

自然愈合(Ⅱ期愈合)創(chuàng)口：大體觀察創(chuàng)口表面哆開、炎癥反應(yīng)明顯，炎癥滲出至5 d，5～7 d創(chuàng)口結(jié)痂，14 d創(chuàng)口表面愈合；病理組織學(xué)顯示，1～3 d創(chuàng)口內(nèi)大量炎細(xì)胞浸潤，5～7 d長出多量肉芽組織，纖維母細(xì)胞大量增生，14 d時開始形成瘢痕，28 d創(chuàng)口區(qū)大量瘢痕結(jié)構(gòu)。

創(chuàng)傷愈合過程涉及許多細(xì)胞因子的作用[7]，也可以通過類似實驗進(jìn)行觀察研究。該實驗研究顯示：大鼠創(chuàng)傷愈合炎癥滲出、組織增生、組織改建等病理過程可在2周內(nèi)完成。

3.3進(jìn)行創(chuàng)傷愈合實驗的意義①學(xué)會了觀察和愛護(hù)實驗動物：如果不細(xì)心觀察和愛護(hù)動物，動物意外死亡，會影響實驗進(jìn)程；實驗動物為教學(xué)和科研做出貢獻(xiàn)，值得愛護(hù)和保護(hù)。②通過實驗，學(xué)會了麻醉和固定動物，確保實驗順利進(jìn)行。③學(xué)會和懂得了無菌術(shù)的重要性：通過創(chuàng)傷實驗，學(xué)會了手術(shù)區(qū)消毒、器械和輔料消毒，操作過程遵守?zé)o菌術(shù)，才能避免手術(shù)感染，保證實驗的成功。④熟練掌握了切開、分離、止血、縫合、打結(jié)等外科基本手術(shù)技術(shù)。⑤懂得了掌握適當(dāng)方法的重要性：如實驗開始時使用剪刀和刮刀給大鼠剃毛，費時費工且效果不好，通過詢問有經(jīng)驗的老師，使用剃毛推子，既快又好。⑥學(xué)會了病理取材方法，增加了對病理切片制作過程的了解和對病理學(xué)應(yīng)用于臨床的感性認(rèn)識。⑦增強(qiáng)了思考問題、動手解決問題的能力，學(xué)會了許多相關(guān)知識和技能。⑧提高了學(xué)習(xí)興趣。

總之，希望“大鼠創(chuàng)傷愈合實驗?zāi)Ｐ汀蹦軌驊?yīng)用到本科病理學(xué)教學(xué)實踐中，從而提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，提高學(xué)生的動手能力，提升學(xué)生對創(chuàng)傷愈合和病理學(xué)的深刻認(rèn)識。

致謝：衷心感謝眼科實驗室的老師們?yōu)閷嶒炋峁┝藞龅睾推餍?；感謝病理科的老師們?yōu)閷嶒炦M(jìn)行病理組織學(xué)制片；感謝鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科副主任李珊珊教授的指導(dǎo)！

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