宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中Bmi-1的表達(dá)

林愛琴，朱曉菡，呂新全，薛金慧

1)鄭州鐵路職業(yè)技術(shù)學(xué)院護理學(xué)院 鄭州 450052 2)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 鄭州 450052

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率較高，僅次于乳癌，且以中晚期患者為多，具有較高的轉(zhuǎn)移率，預(yù)后差，嚴(yán)重危害婦女的健康。因此早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌，預(yù)測宮頸癌的早期復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移尤為重要。Bmi-1基因作為原癌基因，與惡性腫瘤的關(guān)系越來越受到人們的重視，近來研究表明Bmi-1在白血病[1]、淋巴瘤、喉癌[2]、乳癌、卵巢癌[3]等多種腫瘤中均呈高表達(dá)，且表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及預(yù)后密切相關(guān)[4-7]，高表達(dá)Bmi-1的腫瘤細(xì)胞被認(rèn)為是腫瘤中存在的“腫瘤干細(xì)胞”[8]。但目前有關(guān)Bmi-1在宮頸癌中表達(dá)的報道甚少。作者以84例宮頸癌患者作為研究對象，運用免疫組化法和原位雜交法檢測Bmi-1蛋白及mRNA在宮頸癌組織中的表達(dá)，并探討其與臨床病理特征之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1臨床資料84例宮頸癌、20例慢性宮頸炎標(biāo)本均選自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2009年12月至2011年6月存檔的手術(shù)切除和宮頸活檢的石蠟標(biāo)本，所有標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)確診，病理及臨床資料完整，取材前患者未進行放、化療。84例宮頸癌患者年齡26～78(45.2±0.9)歲；其病理類型均為宮頸鱗狀細(xì)胞癌(宮頸鱗癌)；依據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)1985年腫瘤細(xì)胞分化程度規(guī)定，高分化19例，中分化39例，低分化26例；采用國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，2000年)修訂的標(biāo)準(zhǔn)進行臨床分期，其中Ⅰ期36例，Ⅱ期48例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例。20例慢性宮頸炎患者年齡32～73(46.3±1.2)歲。所有組織標(biāo)本均經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，用于免疫組化和原位雜交染色。

1.2主要試劑及探針合成兔抗人Bmi-1單克隆抗體購自美國Abcam公司，SP免疫組化試劑盒、濃縮型DAB試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。預(yù)雜交液、堿磷酶標(biāo)記鏈親和素、胃蛋白酶、乙酰化BSA封閉液、核固紅均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。生物素標(biāo)記Bmi-1 cDNA探針由北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)有限公司合成，探針序列：5’-ATTCTGCGGGGCTGGGAGGTGCT-3’。

1.3Bmi-1蛋白的檢測應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)SP法進行染色，操作步驟按說明書進行，Bmi-1一抗按100倍稀釋。用PBS代替一抗作陰性對照。

1.4Bmi-1mRNA檢測標(biāo)本經(jīng)新鮮配制二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，用新鮮配制的體積分?jǐn)?shù)3%H2O2室溫孵育20 min；檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶室溫下孵育20 min；每張組織切片滴加10 μL不含探針的預(yù)雜交液(40 ℃)預(yù)雜交4 h；滴加雜交液，恒溫40 ℃孵育12 h；37 ℃ SSC洗滌后，加乙酰化BSA封閉液封閉20 min，加SA-AP，37 ℃ 20 min；漂洗后加BCIP/NBT，避光顯色10～120 min。用不含探針的雜交液孵育組織切片作陰性對照。

1.5結(jié)果判定Bmi-1蛋白的陽性表達(dá)為細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒。Bmi-1 mRNA的陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)藍(lán)紫色顆粒。高倍鏡下選取5個視野，計算陽性細(xì)胞所占百分比：陽性細(xì)胞百分比≤10%計0分，～25%計1分，～50%計2分，～75%計3分；>75%計4分。觀察顯色強度：無色計0分，弱染色計1分，中等程度染色計2分，強染色計3分。取二者乘積積分≥2分計為陽性。以上結(jié)果至少由兩名病理科醫(yī)生用盲法觀察評定。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 17.0進行分析，應(yīng)用χ2檢驗比較兩種組織中Bmi-1蛋白及mRNA表達(dá)的差異，用Pearson列聯(lián)系數(shù)分析宮頸鱗癌組織中Bmi-1蛋白和mRNA表達(dá)的關(guān)聯(lián)性，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1宮頸鱗癌組織中Bmi-1蛋白及mRNA的表達(dá)見圖1、表1。

圖1 宮頸鱗癌組織中Bmi-1蛋白及mRNA的表達(dá)

組織類型nBmi-1蛋白Bmi-1 mRNA慢性宮頸炎201(5.0)2(10.0)宮頸鱗癌8460(71.4)49(58.3)χ2(P)29.394(<0.001)15.100(<0.001)

2.2Bmi-1蛋白及mRNA表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理特征的關(guān)系見表2。在84例宮頸鱗癌病例中，Bmi-1蛋白和mRNA的表達(dá)與腫瘤臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)，而與分化程度無關(guān)。

表2 Bmi-1蛋白及mRNA表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3宮頸鱗癌組織中Bmi-1蛋白及mRNA表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析在宮頸鱗癌組織中，Bmi-1蛋白與mRNA的表達(dá)呈正關(guān)聯(lián)，見表3。

表3 宮頸鱗癌組織中Bmi-1蛋白及mRNA表達(dá)的關(guān)聯(lián)性

rP=0.305，P=0.003。

3 討論

Bmi-1基因是1991年在鼠淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)的致癌基因，為多梳基因(PcG)家族成員之一，與另一種癌基因c-myc協(xié)同作用引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤形成，參與細(xì)胞增殖調(diào)控[3]。它是一種核染色質(zhì)調(diào)控因子，PRC1的核心成分。Bmi-1作為轉(zhuǎn)錄抑制因子參與了多種生物學(xué)過程，尤其是在干細(xì)胞的自我更新、分化、穩(wěn)定和胚胎發(fā)育、器官形成、腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著極其重要的作用[9]

Bmi-1可能通過不同的途徑與相關(guān)基因相互作用，在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平調(diào)控腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移。Jocobs等[10]研究發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)的Bmi-1可以結(jié)合其下游調(diào)節(jié)基因INK4a/ARF，下調(diào)p16INK4a和p19ARF(在人類中為p14)的表達(dá)，使細(xì)胞周期延長，增殖旺盛。Dimri等[11]研究發(fā)現(xiàn)，Bmi-1基因能夠間接激活端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)的轉(zhuǎn)錄并誘導(dǎo)端粒酶活性，從而促進細(xì)胞增殖和永生化。

該試驗采用免疫組化法和原位雜交方法對84例宮頸鱗癌和20例慢性宮頸炎標(biāo)本中Bmi-1蛋白及mRNA進行檢測，結(jié)果顯示在宮頸鱗癌組織中二者均呈高表達(dá)。在分析兩者表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系時發(fā)現(xiàn)，Bmi-1蛋白和mRNA的表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。臨床分期越高，Bmi-1蛋白和mRNA的陽性表達(dá)率越高，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯高于不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示Bmi-1基因可能在宮頸鱗癌的發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。而臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與宮頸鱗癌的診治和預(yù)后關(guān)系密切，是判斷宮頸鱗癌預(yù)后的重要指標(biāo)，臨床分期高和(或)出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者多數(shù)預(yù)后不良[12]。該研究結(jié)果還顯示在宮頸鱗癌組織中Bmi-1蛋白和mRNA表達(dá)呈正相關(guān)，由此可見，蛋白和mRNA表達(dá)具有一致性。

總之，在宮頸鱗癌組織中Bmi-1基因呈高表達(dá)，且其高表達(dá)與腫瘤進展有關(guān)，提示Bmi-1基因可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，Bmi-1有望成為一種宮頸鱗癌早期診斷、預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)移和判斷預(yù)后的新的分子生物學(xué)標(biāo)志物。

[1]張彥潔，王軍，高峰．BMI-1基因在兒童急性白血病中表達(dá)的意義[J].實用兒科臨床雜志，2010，25(3)：198

[2]姚小寶，王曉俠，張少強，等.Bmi-1基因過度表達(dá)與喉癌的分化、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系[J].西安交通大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2011，32(2)：246

[3]黃小杏，陳杰偉，李梅，等.Bmi-1在卵巢癌組織中的表達(dá)與臨床病理意義[J].中山大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)科學(xué)版，2010，31(6)：862

[4]Zhang X，Wang CX，Zhu CB，et al.Overexpression of Bmi-1 in uterine cervical cancer：correlation with clinic pathology and prognosis[J].Int J Gynecol Cancer，2010，20(9)：1597

[5]Guo BH，F(xiàn)eng Y，Zhang R，et al.Bmi-1 promotes invasion and metastasis，and its elevated expression is correlated with an advanced stage of breast cancer[J].Mol Cancer，2011，10(1)：10

[6]Yu CC，Lo WL，Chen YW，et al.Bmi-1 regulates snail expression and promotes metastasis ability in head and neck squamous cancer-derived ALDH1 positive cells[J].J Oncol，2011，doi:pii：609259

[7]Li DW，Tang HM，F(xiàn)an JW，et al.Expression level of Bmi-1 oncoprotein is associated with progression and prognosis in colon cancer[J].J Cancer Res Clin Oncol，2010，136(7)：997

[8]陳忠，步雪鋒，毛須平，等.胃癌中Bmi-1的表達(dá)及意義[J].中國實驗診斷學(xué)，2011，15(2)：326

[9]管海濤，王中衛(wèi)，薛鋒杰，等.Bmi-1與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的相關(guān)性研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2011，16(2)：144

[10]Jacobs JJ，Kieboom K，Marino S，et al.The oncogene and Polycomb-group gene bmi-1 regulates cell proliferation and senescence through the ink4a locus[J].Nature，1999，397(6715)：164

[11]Dimri GP，Martinez JL，Jacobs JJ，et al.The Bmi-1 oncogene induces telomerase activity and immortalizes human mammary epithelial cells[J].Cancer Res，2002，62(16)：4736

[12]萬德森.臨床腫瘤學(xué)[M].2版.北京：科學(xué)出版社，2005：314