AHDC1基因變異及臨床病理指標(biāo)對(duì)食管癌高低發(fā)區(qū)患者生存期的影響*

李洪雷，范宗民，王偉鵬，周勝理，王亞豪，黃 靜，董金成，李 貝，郭金生，張連群，王立東#

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院河南省食管癌重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室；鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 鄭州 450052 2)磁縣醫(yī)院胃鏡室 磁縣 056500 3)河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科 洛陽(yáng) 471003 4)淇縣衛(wèi)生局 淇縣 456750 5)姚村食管癌醫(yī)院普外科 林州 456592 6)安陽(yáng)腫瘤醫(yī)院胃鏡室 安陽(yáng) 455000

食管癌預(yù)后極差，中晚期食管癌患者5 a生存率僅約10%[1-2]。作者所在的課題組近20 a的現(xiàn)場(chǎng)研究發(fā)現(xiàn)少部分患者生存期超過(guò)10 a，其中最長(zhǎng)的達(dá)39 a。顯然，單純從臨床特征和形態(tài)學(xué)改變并不能解釋這種現(xiàn)象，可能存在某種分子機(jī)制影響著食管癌的預(yù)后。作者所在的課題組2009年的研究[3]結(jié)果顯示，位于AT鉤 DNA結(jié)合蛋白1(AT hook DNA binding containing 1，AHDC1)基因上的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)位點(diǎn)rs4908343變異與食管癌易感性高度相關(guān)。作者觀察了AHDC1基因變異及臨床病理因素對(duì)食管癌患者生存期的影響，以加深對(duì)食管癌預(yù)后分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)，同時(shí)為建立食管癌預(yù)后的客觀評(píng)價(jià)體系提供線(xiàn)索。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象3 478例患者主要來(lái)自河南、河北和山西三省交界的太行山食管癌高發(fā)區(qū)。患者的一般資料、治療方式和早中晚分期、腫瘤浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度等信息全部來(lái)自河南省食管癌重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室資料庫(kù)。3 478例中男2 111例，年齡27～85(59.0±9.0)歲，女1 367例，年齡30～99(60.0±9.2)歲。

1.2隨訪(fǎng)采用入戶(hù)家訪(fǎng)、現(xiàn)場(chǎng)問(wèn)卷普查、電話(huà)隨訪(fǎng)調(diào)查3 478例食管癌患者的生存狀況，隨訪(fǎng)截止時(shí)間為2011年12月18日；隨訪(fǎng)內(nèi)容側(cè)重于患者是否健在、死亡時(shí)間、死亡原因等；通過(guò)醫(yī)院病理查詢(xún)核實(shí)患者的臨床病理情況。成功隨訪(fǎng)2 416例，其中健在1 574例，死亡842例。終點(diǎn)事件為死亡。

1.3AHDC1基因分型患者簽訂知情同意書(shū)后，每例采集5 mL空腹外周靜脈血(EDTA抗凝)。和安徽醫(yī)科大學(xué)合作，采用Taqman基因分型技術(shù)，檢測(cè)AHDC1 基因rs4908343位點(diǎn)，rs4908343位點(diǎn)上游引物5’-AACCAGGGTCTGACTAACTCC-3’，下游引物為5’-GTTGAAGTGCCAAGAAAGGA-3’，Taqman探針1為5’-FAM-TGGGCTATGACAAAGAG MGB-3’，Taqman探針2為5’-HEX-TGGGCTATGA CAAGGAG-MGB-3’。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0處理數(shù)據(jù)。采用χ2擬合優(yōu)度檢驗(yàn)判斷AHDC1基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律，χ2檢驗(yàn)分析基因型分布與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度、浸潤(rùn)程度、治療方式及高低發(fā)區(qū)的關(guān)系；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線(xiàn)并進(jìn)行Log-Rank檢驗(yàn)，采用Cox回歸模型對(duì)食管癌生存時(shí)間的影響因素進(jìn)行多因素分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1遺傳平衡吻合度檢驗(yàn)2 416例經(jīng)基因分型，共獲得2 285例的分型結(jié)果。AHDC1基因rs4908343位點(diǎn)的基因分型(AA型1 025例，AG型1 008例，GG型252例)經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，觀察值和預(yù)測(cè)值吻合好(χ2=0.031，P=0.984)。

2.2AHDC1基因型與臨床病理因素及高低發(fā)區(qū)的關(guān)系見(jiàn)表1。表1顯示，AHDC1基因型分布與臨床病理因素及高低發(fā)區(qū)無(wú)關(guān)。

表1 AHDC1基因型分布與各因素的關(guān)系 例(%)

*數(shù)據(jù)有刪失。

2.3食管癌患者預(yù)后的單因素分析AHDC1基因AA/AG型患者5 a生存率高于GG型患者，浸潤(rùn)黏膜層患者高于浸潤(rùn)肌層和漿膜層患者，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，早期患者高于中、晚期患者，手術(shù)治療的患者高于非手術(shù)患者，食管癌高發(fā)區(qū)高于低發(fā)區(qū)，見(jiàn)表2。

2.4Cox回歸分析將單因素分析有意義的指標(biāo)納入Cox回歸模型，結(jié)果顯示AHDC1基因型、臨床分期和高低發(fā)區(qū)是食管癌患者預(yù)后的影響因素，見(jiàn)表3。

表2 食管癌患者預(yù)后的單因素分析

表3 Cox回歸模型分析結(jié)果

3 討論

該研究發(fā)現(xiàn)AHDC1基因變異可能是判斷食管癌患者預(yù)后的重要分子指標(biāo)，攜帶AA/AG型的食管癌患者5 a生存率高于GG型患者，同時(shí)AHDC1基因型分布與臨床病理因素及高低發(fā)區(qū)無(wú)關(guān)，提示AHDC1基因型變異與食管癌的預(yù)后有關(guān)，但又獨(dú)立于傳統(tǒng)的臨床病理指標(biāo)，該基因可能是通過(guò)其他途徑影響食管癌的預(yù)后。AHDC1蛋白由1 603個(gè)氨基酸組成，包含2個(gè)AT鉤DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和1個(gè)1類(lèi)PDZ結(jié)構(gòu)域結(jié)合基序，含有AT鉤DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的蛋白可以影響染色體的結(jié)構(gòu)并可調(diào)控AT富含區(qū)基因的轉(zhuǎn)錄[4-5]。AT結(jié)構(gòu)是一種輔助蛋白基序，DNA損傷因素(如電離輻射、紫外線(xiàn))使其磷酸化進(jìn)而反饋?zhàn)饔糜贒NA，促進(jìn)損傷修復(fù)[6-8]。既往研究[9]顯示，食管癌的發(fā)病及預(yù)后與基因的損傷及修復(fù)密切相關(guān)。該研究顯示攜帶AHDC1基因AA/AG型的患者預(yù)后優(yōu)于GG型，可能與AHDC1對(duì)基因的損傷修復(fù)功能有關(guān)。

該研究還顯示，食管癌臨床分期等傳統(tǒng)病理特征是判斷患者預(yù)后的影響因素，這與以往文獻(xiàn)報(bào)道一致[10-12]。

最后，高發(fā)區(qū)患者比低發(fā)區(qū)患者預(yù)后好，提示外界干預(yù)和環(huán)境因素對(duì)食管癌的預(yù)后也有影響，以往研究[1]發(fā)現(xiàn)外界因素是通過(guò)內(nèi)部遺傳因素而影響食管癌的發(fā)病。

綜上所述，食管癌預(yù)后的機(jī)制十分復(fù)雜，各獨(dú)立因素之間又相互影響。作者將在下一步的研究中深入了解AHDC1基因變異對(duì)食管癌預(yù)后的作用機(jī)制，為個(gè)體化治療提供新的線(xiàn)索，從而開(kāi)啟食管癌治療的新途徑，延長(zhǎng)食管癌患者的生存時(shí)間。

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