擬南芥GA2ox基因家族啟動子分析

段秋紅，趙小英，賀熱情，郭 明，劉德榮，唐冬英，劉選明

(湖南大學(xué)生物學(xué)院，湖南長沙410082)

赤霉素(Gibberellin，GA)是一類雙萜物質(zhì)，是常見植物激素之一。目前已發(fā)現(xiàn)赤霉素類物質(zhì)136種［1－3］。其中少數(shù) GA 具有生物活性，如 GA1、GA4等，其他生物形態(tài)的GA只是在赤霉素的合成過程中起著中間產(chǎn)物的作用，其本身并沒有太大功能［4－5］。具有生物活性的 GAs影響植物的整個生命周期，如影響種子的萌發(fā)、莖的生長、花的發(fā)育和果實(shí)的成熟［6］。GA2-氧化酶(GA2-oxidase)，作用于有生物活性的GA1和GA4，使兩者在C-2位羥基化轉(zhuǎn)變成無活性的GA8和GA34，通過減少GAs的水平來調(diào)節(jié)植物的生長，如使植物矮化、節(jié)間縮短［7－8］。擬南芥GA2ox是由8個(GA2ox1－8)成員編碼的雙加氧酶，每個基因所參與的調(diào)控不同。一些GA2ox編碼的蛋白參與植物光形態(tài)建成，光通過誘導(dǎo)GA2ox基因的表達(dá)降低植物體內(nèi)有生物活性的GA4而促進(jìn)光形態(tài)建成［9－11］;部分編碼的蛋白具有催化植物激素(如吲哚乙酸、水楊酸等)與氨基酸聯(lián)結(jié)的功能［12－13］，可能參與植物體內(nèi)的激素代謝和逆境脅迫響應(yīng)過程。

真核基因的表達(dá)與調(diào)控是涉及多個基因、多條信號途徑及多基因產(chǎn)物的復(fù)雜過程。從轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平、翻譯及翻譯后水平、蛋白質(zhì)加工水平對基因的表達(dá)進(jìn)行精細(xì)調(diào)控［14］，首先是由啟動子與轉(zhuǎn)錄因子在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)調(diào)控，因此啟動子的作用十分關(guān)鍵。本研究提取了擬南芥GA2ox基因家族的啟動子以及蛋白質(zhì)序列，利用生物信息學(xué)分析軟件構(gòu)建進(jìn)化樹，對蛋白模體和順式元件進(jìn)行分析，探討基因定位、進(jìn)化關(guān)系、蛋白模體同源性以及順式元件的保守性，了解高保守順式元件與GA2ox基因表達(dá)調(diào)控的相關(guān)性，詳細(xì)分析了各類激素如何調(diào)控GA2ox基因的表達(dá)，為后續(xù)GA2ox基因表達(dá)調(diào)控的研究提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 蛋白質(zhì)與啟動子序列的確定

從TAIR網(wǎng)站獲得GA2ox基因家族的全基因組序列、CDS序列和蛋白質(zhì)序列，并取得染色體、外顯子、內(nèi)含子信息，同時獲取翻譯起始密碼子上游1 500 bp序列，用于對GA2ox基因家族的啟動子分析。

1.2 蛋白模體獲取與進(jìn)化樹構(gòu)建

利用MEME在線分析GA2ox蛋白模體，設(shè)置模體長度最大為300、最小為6，模體最多設(shè)為10。將獲得的GA2ox氨基酸序列構(gòu)建進(jìn)化樹，其聚類結(jié)果利用 MEGA5繪制進(jìn)化樹［15］。

1.3 順式元件分析

從PLACE在線分析GA2ox基因上游1 500 bp啟動子序列，獲取GA2ox基因高同源性以及特異性的順式元件。利用DMB序列局部比對分析軟件，設(shè)置上游元件長度最大為12 nt、最小為5 nt，每個長度尋找元件最多設(shè)為15，分析選擇EM2模式，對105個模體進(jìn)行分析［16］。利用 Plant CARE分析與PLACE以及DMB共同的保守元件。

1.4 基因芯片分析

利用 BAR HeatMapper tool、AtGenExpress Visual-ization Tool、PLEXdb以及 NCBI網(wǎng)站，獲取 GA2ox基因家族的各個組織器官的表達(dá)量以及不同激素處理下GA2ox表達(dá)量的變化。

2 結(jié)果和分析

2.1 AtGA2ox基因家族染色體定位、內(nèi)含子和外顯子分布

在擬南芥中有 8個完整的 GA2ox基因，因GA2ox5為假基因，所以只對7個GA2ox基因進(jìn)行染色體定位分析，結(jié)果表明，該家族五個基因定位在1號染色體上，GA2ox3分布在4號染色體上，GA2ox8分布在2號染色體上(見圖1c)。外顯子和內(nèi)含子分析顯示GA2ox基因具有相似的內(nèi)含子和外顯子結(jié)構(gòu)，均為2個內(nèi)含子和3個外顯子，且外顯子的長度變化較小(見圖1a、b)。GA2ox基因染色體定位與外顯子、內(nèi)含子結(jié)構(gòu)分布的保守性，可能存在某些功能的相似性。

2.2 AtGA2ox基因家族進(jìn)化關(guān)系

根據(jù)擬南芥GA2ox基因氨基酸序列構(gòu)建進(jìn)化樹，并對蛋白模體進(jìn)行比對分析(見圖2)。擬南芥GA2ox基因家族可以分為兩亞類:一類作用于C19-GAs的 AtGA2ox1－6，AtGA2ox1－3的親緣關(guān)系較近，而AtGA2ox4，6與前3條序列親緣關(guān)系較遠(yuǎn);另一類作用于C20-GAs的AtGA2ox7－8［8］，說明擬南芥中同時存在2種具有不同特異性的GA2-氧化酶。蛋白模體分析表明，GA2ox基因家族10個蛋白模體結(jié)構(gòu)基本類似，預(yù)示該家族在進(jìn)化上可能具有一定的保守性，同時進(jìn)化關(guān)系越相近的亞類，其模體同源性越高，且模體結(jié)構(gòu)位置分布更接近，這些差異也說明為什么GA2ox基因家族兩個亞類具有不同功能。

2.3 AtGA2ox基因家族啟動子順式元件特性

2.3.1 保守順式元件

利用DMB分析GA2ox基因家族得到105個保守序列，出現(xiàn)頻率大于70%(在5條以上序列中出現(xiàn))的保守序列共有38個，約占36%。有21個保守序列可在PLACE數(shù)據(jù)庫中找到相應(yīng)的順式元件(見表1)，諸多保守元件是與組織或器官特異性表達(dá)相關(guān)，調(diào)控基因在根、莖、葉、花、種及胚中的表達(dá)。其中NODCON1GM是與根瘤菌有關(guān)的特異性保守序列，在植物細(xì)胞被感染后對基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用;ARRlAT和CPBCSPOR與細(xì)胞分裂素有關(guān)，參與細(xì)胞分裂素的應(yīng)答調(diào)節(jié)［17－18］;DOFCOREZM 能與 Dof蛋白結(jié)合，參與碳代謝途徑［19］;GT1CONSENSUS具有能與GT－1結(jié)合的保守序列，是典型的植物光調(diào)控元件;IBOXCORE元件可能參與光信號調(diào)控途徑;ANAER-O1CONSENSUS位于厭氧應(yīng)答基因上游調(diào)控區(qū)，可 能 參 與 厭 氧 基 因 的 表 達(dá) 調(diào) 控［20］;MYB1CORE能被植物抗旱元件MYB識別，且參與植物的苯丙素代謝以及植物生長發(fā)育的調(diào)控［21－24］;WBOXATNPR1是與傷害防御相關(guān)的元件;而BIHD1OS、CCAATBOX1 是與脅迫響應(yīng)相關(guān)的元件［25］。

圖1 擬南芥AtGA2ox基因家族的染色體定位以及外顯子、內(nèi)含子分布圖Fig.1 The chromosome and exon-intron location of AtGA2ox gene family

圖2 擬南芥AtGA2ox基因家族的進(jìn)化樹以及蛋白模體分布Fig.2 Phylogenetic tree and protein motifs location of AtGA2ox gene family

Plant CARE分析結(jié)果表明GA2ox基因上游啟動子除TATA-box、CAAT-box等真核生物啟動子結(jié)構(gòu)元件外，還存在諸多保守元件(見圖3)，與DMB和PLACE軟件分析一致。綜上所述，GA2ox基因啟動子存在光、耐旱、耐低溫、防御元件以及增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄活性相關(guān)元件;還存在脫落酸(Abscisic acid，ABA)、水楊酸(Salicylic acid，SA)、茉莉酸(Jasmonate，JA)、乙烯(Ethyl-ene，ET)、生長素(Auxin，IAA)、赤霉素等激素以及生物鐘響應(yīng)元件等。

2.3.2 與光相關(guān)的順式元件

由圖3可知，GA2ox家族每個基因中至少存在8個光順式作用元件，且均勻分布在上游1 500bp啟動子調(diào)控區(qū)。所有基因中都存在著一些典型的光元件，如:G-box與GT1，此類元件對于維持啟動子功能與調(diào)控GA2ox基因轉(zhuǎn)錄是起非常重要的作用。一部分光元件僅存在于進(jìn)化關(guān)系相近的GA2ox基因家族中，如:分布在 C19-GAs亞類的 SP1，僅存在于GA2ox1－3啟動子中的 ATCT-motif、LS7、chs-CMA1a 以及BoxⅡ。部分光元件(如G-box)必須和其它的光元件組合才能使啟動子具有光調(diào)節(jié)特性，且類型和數(shù)量不同的光元件具有不同光調(diào)控特性［26］，因此GA2ox基因家族光元件種類、數(shù)量及與彼此之間的距離，可能影響各個基因的轉(zhuǎn)錄造成不同光調(diào)控 特性。

表1 AtGA2ox基因家族啟動子保守順式元件統(tǒng)計(jì)Table 1 Conservative cis-elements statistics of AtGA2ox gene family

圖3 AtGA2ox基因家族啟動子保守順式元件分布Fig.3 Conservative cis-elements location of AtGA2ox gene family

2.3.3 與植物激素和脅迫相關(guān)的順式元件

除諸多光保守元件外，在GA2ox基因啟動子序列中還發(fā)現(xiàn)許多與激素和脅迫相關(guān)的元件，如表2和圖3所示。現(xiàn)從中選取較為典型的順式元件進(jìn)行分析。由表2可知分布較廣的為ABA、IAA和ET響應(yīng)元件，所有基因均存在ET和IAA響應(yīng)元件，共分布 11個 ERELEE4，而 GA2ox3則含有 4個ERELEE4;6個GA2ox基因家族中存在11個ABA元件ABRELATE-RD1，其中GA2ox2和GA2ox7含有3個此元件;GA2ox基因家族有5個成員含GA和JA響應(yīng)元件，且JA元件達(dá)到14個。同時脅迫響應(yīng)元件MYB、Wbox等存在于所有基因中。有研究發(fā)現(xiàn)植物體內(nèi)激素可以作為“逆境激素”［27］，在植物抗鹽、抗旱和抗寒的生理過程中起作用，因此，當(dāng)植物處于高鹽、干旱和低溫脅迫下，誘導(dǎo)啟動子脅迫響應(yīng)元件的表達(dá)，同時也可能誘導(dǎo)激素響應(yīng)元件，共同調(diào)控GA2ox的表達(dá)。

2.3.4 其他順式元件

在研究GA2ox基因順式元件與該家族的進(jìn)化關(guān)系時，發(fā)現(xiàn)除光元件以外，其它順式元件在進(jìn)化關(guān)系選擇上也具有一定規(guī)律性。如:與溫度調(diào)控相關(guān)的元件LTR僅存在于GA2ox1－2以及GA2ox8啟動子中;CTAG-motif元件僅分布在 GA2ox1和 GA2ox3中;真菌誘導(dǎo)響應(yīng)元件Box-W1僅出現(xiàn)在GA2ox4和GA2ox6中。同時，GA20x基因各自存在一些獨(dú)特的功能元件，如:GA2ox1的 ACE元件;GA2ox6的MRE、HD-Zip1以及HD-Zip2元件;GA2ox3的P-box元件等。因此，GA2ox啟動子既存在諸多保守元件，又具有自身特異性元件，說明啟動子部分區(qū)域序列呈現(xiàn)多態(tài)性，在基因進(jìn)化選擇時也可能因特異啟動子調(diào)控基因的表達(dá)模式不同而出現(xiàn)差異。

2.4 AtGA2ox基因家族表達(dá)譜

利用基因芯片對AtGA2ox基因家族的分析表明(見圖4)，GA2ox各個基因在種子、根、葉、花以及果莢中都有表達(dá)，其中GA2ox1、GA2ox3和GA2ox4在花和果莢中表達(dá)量高，GA2ox2在老葉中表達(dá)量較高，GA2ox6、GA2ox8在根、葉中表達(dá)量較高，而GA2ox7在下胚軸中表達(dá)量高。數(shù)據(jù)表明，GA2ox基因在不同發(fā)育階段以及不同組織部位的表達(dá)均可能受到嚴(yán)格的控制，且與GA2ox存在大量的組織器官順式元件分析結(jié)果保持一致(見表1)。

圖4 擬南芥AtGA2ox基因家族組織器官相對表達(dá)量Fig.4 Tissue and organ-specific expression of AtGA2ox genefamily

表2 AtGA2ox基因家族啟動子中與激素相關(guān)的元件Table 2 The phytohormone cis-elments of AtGA2ox gene family promoter

為研究GA2ox大量的激素響應(yīng)元件是如何調(diào)控基因的表達(dá)，我們選取了芯片數(shù)據(jù)庫10 μM ABA、ACC以及1 μM GA、MJ、IAA分別處理擬南芥野生型0 h、0.5 h、1 h、3 h 的 GA2ox表達(dá)數(shù)據(jù)(見圖5)，結(jié)果顯示，GA2ox8和GA2ox6在IAA處理后上調(diào)表達(dá)，而其他基因在處理后均下調(diào)，其中對IAA最敏感的是含有2個生長素響應(yīng)元件的GA2ox6，而不含生長素響應(yīng)元件的GA2ox3其表達(dá)也下調(diào)，這說明IAA誘導(dǎo)生長素響應(yīng)元件的表達(dá)對植物生長的重要性，同時也可能存在其他未被鑒定的生長素響應(yīng)元件。

ABA上調(diào)GA2ox6和GA2ox7基因的表達(dá)，而下調(diào)其他基因。除GA2ox3，茉莉酸合成前體茉莉酸甲酯(MJ)和乙烯合成前體 1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸(ACC)均能降低GA2ox基因的表達(dá)。在GA處理下，所有GA2ox表達(dá)降低，但隨著處理時間延長，其表達(dá)微升。在外源赤霉素的處理下，會促進(jìn)有生物活性的GA1和GA4積累，而使GA失活的GA2ox基因表達(dá)會降低，但持續(xù)處理下，植物體內(nèi)復(fù)雜的負(fù)反饋調(diào)控機(jī)制可能會起作用，因此致使大部分GA2ox在3 h出現(xiàn)一定的上調(diào)。

在各類激素處理后，GA2ox基因家族表達(dá)量均受到不同程度的影響，這與啟動子中含有ABA、GA、IAA、JA和ET響應(yīng)元件的分布結(jié)果基本相吻合。

3 討論

擬南芥GA2ox基因家族集中分布在1號染色體上，內(nèi)含子和外顯子的結(jié)構(gòu)分布具有高相似性，蛋白序列具有高保守性，其進(jìn)化關(guān)系較近的模體結(jié)構(gòu)分布位置基本相同。GA2ox基因上游啟動子區(qū)域內(nèi)存在大量光響應(yīng)元件，但一部分光元件僅分布在進(jìn)化關(guān)系相近的基因中，同時各個基因都具有自身特異性的順式元件。這說明GA2ox無論是蛋白還是啟動子都具有高保守性，預(yù)示基因功能可能具有相似性;同時特異順式元件調(diào)控不同基因的表達(dá)對揭示其進(jìn)化關(guān)系也將提供有價值的線索。

圖5 AtGA2ox基因表達(dá)對吲哚乙酸、脫落酸、ACC、茉莉酸甲酯和赤霉素處理的響應(yīng)Fig.5 Expression of AtGA2ox in response to IAA，ABA，ACC，MJ and GA treatments

由GA2ox基因家族表達(dá)譜可知，在各類激素條件處理后，GA2ox表達(dá)量均受到不同的程度的影響。這些影響說明GA2ox不僅僅是赤霉素代謝途徑中的關(guān)鍵酶［11］，同時涉及激活水楊酸、吲哚乙酸和脫落酸信號途徑，并響應(yīng)茉莉酸以及乙烯元件的調(diào)控。在相同激素處理下，GA2ox基因家族成員所受調(diào)控不同，如在ABA、IAA處理后，GA2ox6基因的表達(dá)上調(diào)，但下調(diào)GA2ox1－4，這說明GA2ox的順式元件不但可以作為正調(diào)控元件，在環(huán)境脅迫下，誘導(dǎo)GA2ox家族部分基因的表達(dá)，而且還能作為負(fù)調(diào)控元件，抑制其他基因的表達(dá)［27］。

除各類激素元件外，GA2ox啟動子區(qū)還存在各種響應(yīng)生物及非生物脅迫的順式元件，如光、耐鹽、耐旱、溫度、傷害防御等相關(guān)元件。當(dāng)植物抵抗生物脅迫和非生物脅迫時，會涉及多個信號途徑，并且會形成一套完整的防御機(jī)制，而這套完整的機(jī)制可能因生物和非生物脅迫響應(yīng)元件的不同調(diào)控起作用［26－30］。有研究者發(fā)現(xiàn) IAA 元件需要 G-box和TGA-box等協(xié)同作用［31］;ABA元件兩側(cè)都存在影響其活性的G-box［32］;而光元件G-box必須和其他元件相互作用才能發(fā)揮其特性［26］;與植物抗逆反應(yīng)相關(guān)的ABA、SA 元件［33］，需要在 MYB、BIHD1OS 等元件的協(xié)調(diào)下，才能作為“逆境激素”起作用［27，34－35］。因此，在環(huán)境信號刺激下，各類順式元件協(xié)同起作用，特異性地調(diào)控GA2ox基因在植物體內(nèi)的表達(dá)，提高植物對環(huán)境脅迫的適應(yīng)能力，同時各類順式元件的互作也說明GA2ox基因表達(dá)調(diào)控的復(fù)雜性。

此外，部分?jǐn)M南芥GA2ox基因家族成員，在啟動子區(qū)并未預(yù)測到含有某類激素應(yīng)答元件，但在相應(yīng)激素處理后其表達(dá)也受到調(diào)控。如不含IAA和ABA元件的GA2ox3，在這兩類激素處理下，其表達(dá)量均下調(diào)，這可能由于GA2ox3上游啟動子存在其他未被鑒定的激素元件，或是由于GA2ox3啟動子元件的種類、數(shù)量及彼此之間的距離對GA2ox3轉(zhuǎn)錄影響的結(jié)果［14］，同時也可能是GA2ox基因家族各成員的啟動子存在相互調(diào)控或是結(jié)合多個轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)果［26］，具體弄清GA2ox基因啟動子的調(diào)控機(jī)制，還需大量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

保守順式元件調(diào)控基因的表達(dá)和啟動子元件的多元化，以及與啟動子結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子的多樣性，決定了啟動子的作用機(jī)制是一個十分復(fù)雜的過程［26］。而GA2ox基因啟動子中的生物脅迫和非生物脅迫響應(yīng)元件具體是如何行使其功能的?是獨(dú)立還是互作?若是互作，與其互作的轉(zhuǎn)錄因子是什么?GA2ox基因啟動子序列的保守性與特異性在進(jìn)化選擇上具體起什么作用?這些問題都是目前研究的關(guān)鍵，有關(guān)GA2ox基因啟動子響應(yīng)逆境脅迫的許多問題還需要繼續(xù)探索。

References)

［1］ Phinney B O，West C A，Ritzel M，Neely P M.Evidence for“gibberellin － like”substances from flowering plants［J］.PNAS，1957，43:398 －404.

［2］ Kawaide H.Biochemical and molecular analyses of gibberellin bynthesis in fungi［J］.Biosci.Biotechnol.Biochem，2006，70(3):583－590.

［3］ 常麗，趙小英，郭明，林建中，李秀山，劉選明.GA2ox1氧化酶基因的克隆及原核表達(dá)［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2010，30(6):1099 －1104.

［4］ Hedden P，Phillips A L.Gibberellin metabolism:new insights revealed by the genes［J］.Trends in Plant Science，2003，5:523 －530.

［5］ MacMillan J.Occurrence of gibberellins in vascular plants，fungi and bacteria［J］.Plant Growth Regulation，2001，20:387 －442.

［6］ FleetC M，Yamaguchi S，Hanada A，Kawaide H，David C J，Kamiya Y，Sun T P.Overexpression of AtCPS and AtKS in Arabidopsisconfersincreased ent-kaureneproduction butno increase in bioactive gibberellins［J］.Plant Physiology，2003，132:830－839.

［7］ Ross J J，Reid J B，Swain S M，Hasan O，Poole A T，Hedden P，Willis C L.Genetic regulation of gibberellin deactivation in Pisum［J］.The Plant Journal，1995，7:513 － 523.

［8］ Schomburg F M，Bizzell C M，Lee D J，Zeevaart J A，Amasino R M..Overexpression of a Novel class of Gibberellin 2 － oxidases Decreases Gibberellin levels and Creates Dwarf Plants［J］.The Plant Cell，2003，15:151 －163.

［9］ Zhao X Y，YU X H，F(xiàn)oo E，Gregory M，Symons，Javier L，Krishnaprasad T.Bendehakkalu，Xiang J，Lin C T.A study of gibberellin homeostasis and cryptochrome－mediated blue light inhibition of hypocotyl elongation［J］.Plant Physiology，2007.145:106 －118.

［10］李研，趙小英，郭明，李旭，黃綠紅，唐冬英，郭新紅，劉選明.GA2ox8基因過量表達(dá)誘導(dǎo)藍(lán)光下擬南芥光形態(tài)建成［J］.植物生理學(xué)通訊，2008，44(3):421－425.

［11］趙小英.藍(lán)光抑制擬南芥下胚軸伸長和誘導(dǎo)種子萌發(fā)的生化分析［D］.長沙:湖南大學(xué)，2006.

［12］ Staswick P E，Tiryaki I.The oxylipin signal jasmonic acid is activated by an enzymethatconjugatesitto isoleucine in Arabidopsis［J］.The Plant Cell，2004，16(8):2117 － 2127.

［13］ Staswick P E，Serban B，Rowe M，Tiryaki I，Maldonado M T，Maldonado M C，Suza W.Characterization of an Arabidopsis enzyme family that conjugates amino acids to indole－3－acetic acid［J］.The Plant Cell，2005，17:616 －627.

［14］郭晉艷，鄭曉瑜，鄒翠霞，李秋莉.植物非生物脅迫誘導(dǎo)啟動子順式元件及轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展［J］.生物技術(shù)通報(bào)，2011，(4):16－20.

［15］ Tamura K，Dudley j，Nei M，Kumar S.MEGA4:Molecular Evolutionary Genetics Analysis(MEGA)Software Version 4.0［J］.Molecular Biology and Evolution，2007，24:1596 －1599.

［16］孫濤，柴團(tuán)耀，張玉秀.擬南芥GH3基因家族啟動子序列分析［J］.中國科學(xué)院研究生院學(xué)報(bào)，2010，27(6):847 －852.

［17］ SakaiH，Honma T，Aoyama T，Sato S，Kato T，Tabata S，Oka A.ARRl，a transcription factor for genes immediately responsive to cytokinins［J］.Science，2001，294:1519 －1521.

［18］ SakaiH，Aoyama T，Oka A.Arabidopsis ARR1 and ARR2 response regulators operate as transcriptional activators［J］.The Plant Journal，2000，24:703 －711.

［19］郭曉芳，嚴(yán)海燕.植物中的Dof蛋白和Dof轉(zhuǎn)錄因子家族［J］.植物生理學(xué)通訊，2005，41:419－423.

［20］ Riou C，Herve C，Pacquit V，Dabos P，Lescure B.Expression of an Arabidopsis lectin kinase receptor gene，lecRK － a1，is induced during senescence，wounding and in response to oligogalacturonic acids［J］.Plant Physiol Biochem，2002，40:431 －438.

［21］ RomeroI，F(xiàn)uertes A，Benito M J，Malpica J M，Levva A，Paz-Ares J.More than 80R2R3－MYB regulatory genes in the genome of Arabidopsis thaliana［J］.The Plant Journal，1998，14:273 －284.

［22］ Braun EL，Grotewold E.Newly Discovered Plant c－myb－Like Genes Rewrite the Evolution of the Plant myb gene family［J］.Plant Physiology，1999，121:21 －24.

［23］ Meissner R C，Jin H，Comineli E，Denekamp M，F(xiàn)uertes A，Greco R，et a1.Function Search in a Large Transcription Factor Gene Family in Arabidopsis:Assessing the Potential of Reverse Genetics to Identify Insertional Mutations in R2R3 MYB Genes［J］.Plant Cell，1999，11:1827 －1840.

［24］劉蕾，杜海，唐曉風(fēng)，吳燕民，黃玉碧，唐益雄.MYB轉(zhuǎn)錄因子在植物抗逆脅迫中的作用及其分子機(jī)理［J］.遺傳，2008，30(10):1265－l271.

［25］羅紅麗.水稻抗病性相關(guān) homeodomain型轉(zhuǎn)錄因子基因OsBIHD1的克隆鑒定與功能分析［D］.杭州:浙江大學(xué)，2004.

［26］張毅，尹輝，李丹，朱巍巍，李秋莉.植物環(huán)境響應(yīng)啟動子的誘導(dǎo)元件及轉(zhuǎn)錄因子［J］.中國生物工程雜志，2007，27(7):122－128.

［27］張計(jì)育，王慶菊，郭忠仁.植物AP2/ERF類轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展［J］.遺傳，2012，34(7):835－847.

［28］ Kunkel B N，Brooks D M.Cross talk between signaling pathways in pathogen defense［J］.Curr Opin Plant Biol，2002，5:325 － 331.

［29］ Chinnusamy V，Schumaker K，Zhu J K.Molecular genetic perspectives on cross－talk and specificity in abiotic stress signalling in plants［J］.J Exp Bot，2004，55(395):225 － 236.

［30］ FujitaM，F(xiàn)ujita Y，Noutoshi Y，Takahashi F，Narusaka Y，Shinozaki K.Crosstalk between abiotic and biotic stress responses:a current view from the points of convergence in the stress signaling networks［J］.Curr Opin Plant Biol，2006，9(4):436 －442.

［31］ Liu ZB，Hagen G，Guilfoyle T J.A G － Box－ Binding protein from soybean binds to the E1 auxin－response element in the soybean GH3 promoter and contains a proline － rich repression domain［J］.Plant Physiology，1997，115(2):397 －407.

［32］ Shen Q J，Casaretto J A，Zhang P，Ho T H .Functional definition of ABA－response complexes:the promoter units necessary and sufficient for ABA induction of gene expression in barley(Hordeum vulgare L.)［J］.Plant Mol Biol，2004，54(1):111 － 124.

［33］ UnoY，F(xiàn)ufihata T，Abe Yoshida R，Shinozaki K，Yamaguchi－Shinozaki K.Arabidopsis basic leucine zipper transcription factors involved in an abscisic acid－dependent signal transduction pathway under drought and high － salinity conditions.［J］.PNAS，2000，97(21):11632 －11637.

［34］ Yamaguchi－ShinozakiK，Shinozaki K.A novel cis－acting element in an Arabidopsis gene is involved in responsiveness to drought，low temperature，or high － salt stress［J］.The Plant Cell，1994，6(2):251 －264.

［35］ Aqarwal M，Hao Y ，Kapoor A，Dong C H，F(xiàn)ujii H，Zheng X W，Zhu J K.A R2R3 type MYB transcription factor is involved in the cold regulation of CBF genes and in acquired freezing tolerance.［J］.Journal of Biological Chemistry，2006，281(49):37636 －37645.