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    炎復(fù)康栓的制備及其體外抑菌作用研究※

    2013-11-14 11:03:54辛玲歌張媛媛
    河北中醫(yī) 2013年12期
    關(guān)鍵詞:苦參藥理學(xué)黃連

    辛玲歌 張 旋 張媛媛

    (陜西中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥劑科,陜西 咸陽 712000)

    制劑與質(zhì)量控制

    炎復(fù)康栓的制備及其體外抑菌作用研究※

    辛玲歌 張 旋 張媛媛

    (陜西中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥劑科,陜西 咸陽 712000)

    【摘 要】目的研究炎復(fù)康栓的制備,觀察其對體外抑菌作用的影響。方法應(yīng)用薄層色譜法(TLC)對處方中的黃連、苦參進(jìn)行薄層色譜鑒別;應(yīng)用平板打孔法和試管稀釋法觀察炎復(fù)康栓對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、乙型溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、大腸埃希菌的最低抑菌濃度(MIC)、最低殺菌濃度(MBC)和抑菌圈。結(jié)果黃連、苦參薄層色譜特征斑點清晰,專屬性強(qiáng),陰性對照無干擾;炎復(fù)康栓對以上5種菌均具有較強(qiáng)的抑制作用。結(jié)論炎復(fù)康栓制備工藝可行,質(zhì)量可控,并具有良好的抑菌作用,應(yīng)用前景良好。

    【關(guān)鍵詞】生產(chǎn)和制備;微生物敏感性試驗;中草藥;藥理學(xué);黃連;苦參;白花蛇舌草

    炎復(fù)康栓是我院在長期的臨床實踐過程中,結(jié)合中醫(yī)理論,在辨證論治的基礎(chǔ)上總結(jié)出來的有效方劑,主要由黃連、苦參、白花蛇舌草等中藥組成,具有清熱燥濕、活血化瘀、殺蟲止癢的功效。是臨床用于治療女性生殖系統(tǒng)炎癥(外陰炎、陰道炎、宮頸炎、盆腔炎)、直腸炎、結(jié)腸炎、包皮炎、陰囊濕疹的外用中藥制劑[1-2]。

    本品原劑型為洗液,是將諸藥水提后適當(dāng)濃縮,加入防腐劑后,滅菌,分裝即得。雖在長期使用過程中療效可靠,但具有久置后澄明度低、質(zhì)量不穩(wěn)定、患者使用不方便等缺點。中藥栓劑是以中藥飲片為基本原料,經(jīng)現(xiàn)代化工藝“全成分”提取而成,與適宜的基質(zhì)混合制成專供腔道給藥的一種固體制劑。根據(jù)婦女宮頸陰道生理特征形體,決定將本產(chǎn)品改良制成栓劑,可克服原洗液的缺點,同時栓劑具有操作簡單、攜帶方便、質(zhì)量穩(wěn)定、安全有效、藥效持久的特點。為了加強(qiáng)對該品種的質(zhì)量控制,我們進(jìn)行了該制劑的制備工藝研究并對其進(jìn)行了體外抑菌試驗,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù),結(jié)果如下。

    1 材料與菌種

    1.1 實驗材料 鹽酸小檗堿對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供,批號:110713-200911);苦參堿對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供,批號:110805-200508);潔爾陰洗液(成都恩威制藥有限公司,國藥準(zhǔn)字Z10930008,批號:201202023);營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(上海時代生物科技有限公司,批號:20120121),營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(上海時代生物科技有限公司,批號:20120212),沙氏培養(yǎng)基(上海研生生化試劑有限公司,批號:20120315);甲醇、三氯甲烷、乙醇、碘化鉍鉀均由天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司提供,氨試液由西安三浦精細(xì)化工廠提供,亞硝酸鈉由山東海洋化工有限責(zé)任公司提供。

    1.2 菌種 金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、綠膿桿菌[CMCC(B)10104]、白色念珠菌[CMCC(F) 98001]、乙型溶血性鏈球菌[CMCC(B)32210]、大腸埃希菌[CMCC(B)32210]均由陜西省咸陽市疾病預(yù)防控制中心細(xì)菌室提供。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 方法

    2.1.1 處方 黃連57.10 g,白花蛇舌草142.86 g,苦參28.57 g,牡丹皮14.29 g,丹參8.57 g,赤芍藥8.57 g,半合成脂肪甘油酯適量。

    2.1.2 制備方法 將黃連、白花蛇舌草、苦參、牡丹皮、丹參、赤芍藥按處方量稱取,粉碎成粗粉,用70%乙醇提取2次,第1次加12倍量,第2次加10倍量,每次提取1 h,濾過,合并濾液。濾液濃縮成稠膏,將稠膏進(jìn)行真空干燥,粉碎,過100目篩,置潔凈容器中,備用。另取半合成甘油酯,于65 ℃下熔融至約3/4,停止加熱,繼續(xù)攪拌,待溫度下降至60 ℃加入浸膏粉,攪拌均勻后,注模前基質(zhì)溫度約為50 ℃,注入已均勻涂布好潤滑油的栓模中(模具溫度約為15 ℃),冷卻30 min后,刮去溢出部分,制成每粒重2.6 g的炎復(fù)康栓??偭繛?00粒,共260 g。

    2.1.3 質(zhì)量評價

    2.1.3.1 性狀 本品為棕色至棕褐色陰道栓劑。

    2.1.3.2 薄層鑒別

    2.1.3.2.1 黃連的鑒別[3-4]取3批本品(批號為20120702、20120710、20120715)各2粒,加水10 mL,水浴加熱使溶解,過濾,濾液水浴蒸干,殘渣加甲醇10 mL使溶解,濾過,濾液濃縮至2 mL,作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品,加甲醇制成每mL含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗,吸取供試品溶液5 μL,對照品溶液1 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-水(12∶6∶3∶3∶0.6)為展開劑,置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的黃色熒光斑點。結(jié)果見封3,圖1。

    2.1.3.2.2 苦參的鑒別[3,5]取3批本品(批號為20120702、20120710、20120715)各2粒,加水20 mL,水浴加熱使溶解,過濾,濾液加氨試液1 mL,搖勻,用三氯甲烷振搖提取2次,每次20 mL,分取三氯甲烷液,水浴蒸干,殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解,作為供試品溶液。另取苦參堿對照品,加乙醇制成每mL含0.2 mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗,吸取上述2種溶液各4 μL,分別點于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)為展開劑,展開,展距8 cm,取出,晾干,再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶4∶2∶1)10 ℃以下放置的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的橙色斑點。結(jié)果見封3,圖2。

    2.1.3.3 檢查 ①重量差異:應(yīng)符合規(guī)定;②融變時限:除另有規(guī)定外,照融變時限檢查法[3]檢查,應(yīng)符合規(guī)定;③其他:應(yīng)符合栓劑項下有關(guān)各項規(guī)定[3]。

    2.1.4 體外抑菌實驗研究

    2.1.4.1 菌懸液的制備 從新鮮菌種斜面醮取少量菌苔,白色念珠菌接種于沙氏培養(yǎng)基,于26 ℃培養(yǎng)24 h,其余菌種接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,于37 ℃ 培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)后作為原菌液,用0.9%滅菌氯化鈉注射液稀釋至10-5,白色念珠菌稀釋至10-6。

    2.1.4.2 平板打孔法(瓊脂擴(kuò)散法)[6-8]取稀釋菌液0.1 mL于平板表面,用“L”棒涂勻,待菌液完全均勻覆蓋后靜置1 min再吸出菌液,用內(nèi)徑6 mm無菌打孔器打孔;取藥物原液(1.0 g/mL)或潔爾陰洗液100 μL用微量加樣器依次向孔內(nèi)加入;置電熱恒溫培養(yǎng)箱中,白色念珠菌26 ℃、其余各菌37 ℃分別培養(yǎng)24 h。觀察抑菌圈的有無及大小,并用游標(biāo)卡尺準(zhǔn)確測量抑菌圈直徑(mm),實驗重復(fù)3次,以3次平均值作為抑菌圈。

    2.1.4.3 試管稀釋法(最低抑菌濃度測定)[9-10]每一菌株取干凈試管10支,無菌操作下,其中白色念珠菌加入沙氏液體培養(yǎng)基1.0 mL,其余各菌分別加入營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基1.0 mL;第1管加入藥物原液或潔爾陰洗液1.0 mL,混勻后吸取1.0 mL 置下一試管中,依次逐管稀釋至第9管,第10管不加藥液作為空白管。除最后一管外,其余各試管均加入細(xì)菌或霉菌稀釋液0.1 mL,置恒溫培養(yǎng)箱中,白色念珠菌28 ℃、其余各菌37 ℃培養(yǎng)24 h。與空白管比較,試管內(nèi)液體培養(yǎng)基澄清表示無菌生長;混濁,表示有細(xì)菌生長。以完全無菌生長的最高藥物稀釋度為藥物對該菌株的最低抑菌濃度(MIC),將已觀察到的MIC測定中未長菌的各管取出,分別吸取0.1 mL用接種環(huán)轉(zhuǎn)種于血瓊脂平皿和霉菌培養(yǎng)基平皿的相應(yīng)位置,于37 ℃培養(yǎng)24 h,以殺死99.9%實驗菌菌體的藥物最高稀釋度為最低殺菌濃度(MBC)。

    2.2 結(jié) 果

    2.2.1 平板抑菌圈實驗 見表1。

    表1 平板抑菌圈實驗 mm,±s

    與潔爾陰洗液比較,*P<0.05

    由表1可見,炎復(fù)康栓濃度為1.0 g/mL,對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、乙型溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、大腸埃希菌均有不同程度的抑制作用;與潔爾陰洗液比較,對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、白色念珠菌的抑菌作用強(qiáng)(P<0.05)。

    2.2.2 炎復(fù)康栓抑菌殺菌實驗 見表2。

    表2 炎復(fù)康栓抑菌殺菌實驗 mg/mL

    與潔爾陰洗液比較,*P<0.05

    由表2可見,炎復(fù)康栓對金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、白色念球菌的抑菌、殺菌作用明顯優(yōu)于潔爾陰洗液(P<0.05)。

    3 討 論

    陰道炎屬中醫(yī)學(xué)陰癢范疇,其發(fā)病主要責(zé)之于肝、脾二臟功能失調(diào),致濕熱內(nèi)生,隨經(jīng)下注,或蘊(yùn)瘀生蟲,直中陰中,故治療關(guān)鍵是健脾、除濕、殺蟲、止癢。炎復(fù)康栓是由我院院內(nèi)制劑炎復(fù)康洗液發(fā)展而來,具有清熱利濕、活血化瘀、殺蟲止癢的功效。方中以清熱燥濕的黃連和苦參為君藥,以清熱解毒、利濕通淋的白花蛇舌草為臣藥,佐以牡丹皮、丹參、赤芍藥活血化瘀,涼血止痛。

    炎復(fù)康栓是在炎復(fù)康洗液的基礎(chǔ)上開發(fā)的,通過將洗液改變劑型制成栓劑,克服原洗液久置后澄明度低、質(zhì)量不穩(wěn)定、患者使用不方便等缺點,但是栓劑在制備過程中制備工藝對栓劑的質(zhì)量影響較大。藥物加入順序、基質(zhì)加熱的溫度及栓劑冷卻時間直接影響栓劑的硬度和融變時限。在水浴上融化基質(zhì),拿出,加入藥粉,快速攪勻,倒入栓劑模型,由于藥粉不溶于基質(zhì),溫度過高則會延長冷卻時間,藥物就會沉淀,使栓劑藥物含量不勻,影響栓劑的質(zhì)量;而溫度太低時,半飽和脂肪酸酯又會凝固,都不利于制備制劑,所以溫度的控制很重要。

    我們對炎復(fù)康栓中每味藥進(jìn)行篩選,結(jié)果選用薄層色譜法對黃連、苦參進(jìn)行定性鑒別,結(jié)果顯示供試品與對照品相應(yīng)的位置上有相同的斑點,陰性對照品無干擾,方法具有專一性。本品應(yīng)建立定量分析方法,測定主藥含量,更好地控制藥品質(zhì)量,但由于條件所限,定量分析方法有待于進(jìn)一步的探討和研究。

    已知引起宮頸炎、陰道炎的病原體除淋球菌、支原體、衣原體、滴蟲、念珠菌等外,尚有金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、乙型溶血性鏈球菌、綠膿桿菌、白色念珠菌等病原微生物[11-12]。本研究結(jié)果表明,炎復(fù)康栓對以上5種病原微生物的生長具有抑制作用,其作用高于潔爾陰洗液,說明炎復(fù)康栓具有良好的抑菌和殺菌作用,其作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

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    PreparationofYanfukangsuppositoryanditsanti-bacterialeffectsinvitro

    XINLingge,ZHANGXuan,ZHANGYuanyuan.

    PharmacyDepartment,TheSecondAffiliatedHospitalofShaanxiUniversityofChineseMedicine,Shanxi,Xianyang712000

    【Abstract】ObjectiveTo prepare Yanfukang Suppository and to investigate its the anti-bacterial effects in vitro.MethodsCoptis and Flavescens in prescription were identified by TLC.The method of agar diffusion plate method and tube double dilution were used to determine the minimum inhibitory concentration(MIC),minimum bactericidal concentrations(MBC) and the bacteriostatic annulus of Yanfukang on these bacteria like staphylococcus aureus,Escherichia coli,pseudomonas aeruginosa,hemolytic streptococcus and candida albicans.ResultsCoptis and Flavescens in prescription could be detected by TLC.The result indicated that Yanfukang Suppository had strong antibacterial action on these five kinds of bacteria.ConclusionThe Yanfukang Suppository can be prepared by a simple process; the quality can be controlled and it has favorable antibacterial activities.The prospect is fine to make use of it.

    【Key words】Production and preparation; Antimicrobial susceptibility test; Chinese herbal medicine; Pharmacology; Berberine; Sophora; Diffusa

    辛玲歌(1966—),女,主任藥師,學(xué)士。研究方向:中藥制劑及臨床藥學(xué)。

    【中圖分類號】R943.4;R282.71;R287

    A

    1002-2619(2013)12-1865-03

    ※ 項目來源:陜西省教育廳2012年科學(xué)研究項目計劃(一)(編號:12JK0721)

    2012-12-20)

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