HPLC法測(cè)定舒胸滴丸中羥基紅花黃色素A的含量*

★ 吳蓓 楊婕 簡(jiǎn)暉 馮育林,3 陳海芳 張武崗,3*** 楊世林,3

(1.江西省南昌市食品藥品檢驗(yàn)所2.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330006;3.中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心 南昌 330006)

舒胸滴丸是由《中國(guó)藥典》收載舒胸片改制而來(lái)，由三七、川芎和紅花3味中藥組成，具有活血、祛瘀、止痛之功效，臨床主要用于冠心病、心絞痛、心律失常、軟組織損傷等疾病[1]。舒胸滴丸以舒胸片組方為基礎(chǔ)，將三七、川芎和紅花3味藥材的提取物制成的治療冠心病心絞痛的速效制劑。已有報(bào)道證實(shí)三七、紅花和川芎3味中藥有效成分組與舒胸片原方具有相似的藥理效應(yīng)。滴丸與片劑相比具有生物利用度高、流動(dòng)性好、釋藥穩(wěn)定、起效快的特點(diǎn)。目前舒胸滴丸的文獻(xiàn)報(bào)道集中在提取、制劑處方研究方面[2]，因此，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)[3-5]，采用HPLC法測(cè)定舒胸滴丸中羥基紅花黃色素A的含量，以能更全面評(píng)價(jià)舒胸滴丸的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀：Waters2695系列；Waters2996檢測(cè)器；Empower色譜工作站。

1.2 試藥

羥基紅花黃色素A對(duì)照品（批號(hào)：111637-200301）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。舒胸滴丸自制（批號(hào)：110601、110602、110603；規(guī)格：30mg.丸-1）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液配制

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL中0.051mg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備：取本品，研細(xì)，取0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）20min，放冷，密塞，再稱定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL，置10mL量瓶中加25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 紅花陰性供試品溶液的制備：取處方中缺紅花的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法項(xiàng)下操作，即得紅花陰性供試品溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：Shimadzu VP-ODS C18柱 5μm×4.6mm×250mm。流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液（19：9：72）。流速：1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：400nm

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

分別吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液、陰性樣品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖（見(jiàn)圖1）。結(jié)果表明，舒胸滴丸中羥基紅花黃色素A得到很好的分離，且紅花陰性無(wú)干擾，理論塔板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)為9852。如圖1。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性范圍：取一定濃度為的羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1、2、5、8、10、15、20mL，按照上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。以濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖，得回歸方程為：Y=2215957X+55480，r=0.9999，線性范圍為0.05136～1.0272mg。

2.4.2 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號(hào)：110601）6份，按2.1.2項(xiàng)制備方法，平行制備供試品溶液共6份，按2.2項(xiàng)色譜方法進(jìn)行測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果得出樣品中羥基紅花黃色素A平均含量（n=6）為1.47mg/丸，RSD分別為0.48%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.3 精密度試驗(yàn)：按2.1.2項(xiàng)制備一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，在2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果得出羥基紅花黃色素A精密度良好，RSD%值為0.35%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.4.4 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)：按2.1.2項(xiàng)制備一份供試品溶液（批號(hào)：110601），分別于0、2、4、8、16、24h后進(jìn)樣，在2.2項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄羥基紅花黃色素A峰面積。羥基紅花黃色素A峰面積的RSD為0.42%，結(jié)果表明供試品溶液有很好的穩(wěn)定性，在24h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn)：取已知含量的舒胸滴丸（批號(hào)：110601）樣品細(xì)粉約0.05g六份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按80%、100%、120%的量各加入羥基紅花黃色素A對(duì)照品，進(jìn)行處理，即得。按“2.1.2”項(xiàng)方法制備溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果得出羥基紅花黃色素A回收率良好，平均回收率為99.16%，RSD%值為0.37%。

2.5 含量測(cè)定

取3批舒胸滴丸樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定各成分的峰面積，代入各自的線性方程，計(jì)算羥基紅花黃色素A的含量，結(jié)果如表1。

表1 舒胸滴丸中試樣品羥基紅花黃色素A含量測(cè)定

3 討論

利用高效液相色譜儀中二極管陣列檢測(cè)器的波長(zhǎng)掃描功能，進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，得出羥基紅花黃色素A在400nm有較大吸收。

在超聲提取方法中，考察了超聲10、20、30、40、50min不同時(shí)間的提取效果，結(jié)果表明在超聲提取20min羥基紅花黃色素A的提取率明顯升高，30min達(dá)到最大值，其提取率高于其余不同時(shí)間處理，但20、30、40、50min不同處理時(shí)間的提取率差異不顯著，因此，選取超聲20min。

本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC測(cè)定舒胸滴丸中羥基紅花黃色素A含量的方法，其專屬性強(qiáng)，簡(jiǎn)便可靠，為舒胸滴丸質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版一部［S］．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1 166.

[2]張武崗，馮育林，宋永貴，等.舒胸滴丸中紅花和川芎混合提取物純化工藝[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（12）：2 977-2 979.

[3]劉紅，郁曉藝，徐小燕.紅花中羥基紅花黃色素A含量的紫外分光光度法測(cè)定[J].石河子大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，22（6）：517-518.

[4]趙明波，鄧秀蘭，王亞玲，等.高效液相色譜法測(cè)定紅花中的羥基紅花黃色素A[J].色譜，2003，21（6）：593-595.

[5]張麗，張穎，宋洪濤，等.HPLC法測(cè)定舒胸制劑中羥基紅花黃色素A的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2008，24（1）：65-67.