熱敏灸對失眠大鼠模型血清內分泌激素水平的影響*

★ 肖愛嬌 王河寶 劉海云

（江西中醫(yī)學院 南昌 330004）

失眠是睡眠障礙中最常見的一種類型，通常指患者對睡眠時間和（或）質量不滿足并影響白天社會功能的一種主觀體驗[1-2]。隨著生活節(jié)奏的加快，競爭壓力的增大，睡眠障礙已經成為一個影響現(xiàn)代人健康的重要問題，并越來越成為威脅世界各國公眾的一個突出問題。據(jù)世界衛(wèi)生組織對14個國家15個地區(qū)的25916名在基層醫(yī)療就診的病人進行調查，發(fā)現(xiàn)有27%的人有睡眠問題；美國的失眠發(fā)生率高達32%-50%，英國10%-14%，日本20%，法國30%，中國也在30%以上。目前臨床上治療失眠的西藥多是一些鎮(zhèn)靜、安眠的精神藥物，雖短期癥狀緩解明顯，但長期服用會導致藥物依賴性、嗜睡、乏力、步態(tài)不穩(wěn)等不良反應[3]，最終影響神經系統(tǒng)功能。而祖國醫(yī)學的中醫(yī)療法治療失眠具有較好的效果。

艾灸法—作為針灸療法的重要組成部分，是借助艾草燃燒時發(fā)出的藥力和紅外線溫熱刺激，來熏灼特定的穴位，刺激組織以調和氣血、疏通經絡，從整體上調節(jié)臟腑功能，以達到治病防病、養(yǎng)生保健的目的。該療法操作簡便，療效顯著，無任何副作用，正日益受到患者的親睞。臨床研究觀察到艾灸治療失眠具有較好的效果[4-5]。而腧穴熱敏化艾灸新療法（即熱敏灸療法）的出現(xiàn)，則大幅度提高了艾灸臨床療效，改觀了中國灸療臨床現(xiàn)狀[6]。臨床研究表明，熱敏灸治療多種疾病具有良好的療效，其治療失眠也取得了很好的療效[7]。然而熱敏灸如何治療失眠的機理還不清楚。據(jù)報道，失眠病人存在內分泌激素水平的異常[2]。那么，熱敏灸能否通過調節(jié)體內內分泌激素水平而達到改善睡眠？為此，本研究采用腹腔注射對氯苯丙氨酸（PCPA）制備失眠大鼠模型，采用行為觀察法、放射免疫分析法等研究熱敏灸對大鼠行為活動、內分泌激素水平等方面的影響，了解熱敏灸治療失眠的效果，闡明熱敏灸治療失眠的作用機理，為熱敏灸治療睡眠障礙提供理論依據(jù)和實驗依據(jù)，促進熱敏灸在睡眠障礙防治中的應用。

1 材料

1.1 動物與分組

SD大鼠32只，雄性，體質量200g左右，由南昌大學醫(yī)學院動物科學部提供，適應性喂養(yǎng)1周后，采用隨機數(shù)字表將大鼠分為正常對照組（A），模型組（B），艾灸組（C），熱敏灸組（D），每組8只。正常對照組（A組）：腹腔注射對等的生理鹽水，1次/d，共2d。模型組（B）：腹腔注射對氯苯丙氨酸（PCPA，300mg/kg）進行造模，1次/d，共2d。艾灸組（C）：同模型組，并艾灸“百會”穴，1次/d，15min/次，共5d。熱敏灸組（D）：同模型組，并艾灸“百會”穴，1次/d，40min/次，共5d。

1.2 主要試劑

對氯苯丙氨酸（PCPA，美國sigma公司）；ACTH、GH、T4、CORT、MT放射免疫分析藥盒（北京華英生物技術研究所）。

1.3 主要儀器

EthoVision XT動物行為跟蹤系統(tǒng)（荷蘭Noldus公司）；r-911全自動放免計數(shù)儀（中國科技大學實業(yè)總公司生產）；MP31001電子天平（上海舜宇恒平科技儀器有限公司生產）。

2 方法

2.1 失眠大鼠模型制備

采用腹腔注射PCPA制備失眠大鼠模型，根據(jù)文獻[8-9]報道進行操作，即對B、C、D組大鼠，將PCPA用弱堿性（pH7～8）生理鹽水配置成混懸液，按300mg/kg體質量進行腹腔注射，1次/d，連續(xù)注射2d。

2.2 艾灸取穴與方法

在大鼠失眠模型造成后次日，即腹腔注射PCPA后第3日，將C、D組大鼠頭部的毛發(fā)剪去，露出“百會”[10]，作為艾灸穴位。

艾灸方法：用直徑0.4cm，長10cm的艾條（江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院制），距穴位2cm左右溫和灸大鼠，1次/d，C組15min/次，D組40min/次，共5d。

2.3 大鼠行為學觀察

在第一次腹腔注射PCPA28～30h后，每日定時錄制視頻30min，共5d，觀察各組大鼠活動情況。

2.4 大鼠體質量稱量

每日8：30-10：30，用電子天平稱重并作記錄。

2.5 大鼠血清ACTH、GH、CORT、T4和MT水平的測定

治療結束后次日，大鼠用3%戊巴比妥鈉（40mg/kg）腹腔注射麻醉后，抽取腹主動脈血5ml置于離心管，然后以3000r/min離心15min，收集血清，用于檢測促腎上腺皮質激素（ACTH）、皮質酮（CORT）、甲狀腺素（T4）、生長激素（GH）和褪黑素（MT）的水平。以上激素均采用放射免疫法進行測定。

2.6 數(shù)據(jù)處理

3 結果

3.1 大鼠的一般活動

適應期間，所有的大鼠活動良好，警覺性很好，進食飲水正常，晝夜節(jié)律正常。在第一次腹腔注射PCPA 28-30h后，B、C、D組大鼠出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失，白天活動不停，整體觀察與A組有明顯不同，表明模型成功。給予艾灸治療后，熱敏灸組大鼠晝夜節(jié)律有所好轉，白天能較安靜入睡，行為活動趨于正常；而模型組恢復得較慢。

3.2 熱敏灸對失眠模型大鼠體質量的影響

在適應期間，各組體質量接近，且增長速度無明顯差異。造模后，與正常組相比，B、C、D組大鼠體質量增長較緩。給予艾灸治療后，艾灸組大鼠的體質量增長較慢，在治療1d、3d時，體質量仍明顯低于正常組；熱敏灸組大鼠的體質量增長較快，在治療5d時，熱敏灸組體質量與正常組基本接近；而模型組大鼠仍處長較慢增長。結果見表1。

表1 熱敏灸對失眠大鼠體質量的影響（g）

3.3 熱敏灸對失眠模型大鼠血清ACTH、CORT、T4、GH和MT水的影響

從表中可以看出，與正常組相比，模型組大鼠血清CORT、T4、GH和MT水平較高，而ACTH水平低于正常組；其中，ACTH、T4、GH和MT水平與正常組相比有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與模型組相比，艾灸組和熱敏灸組大鼠血清CORT、T4、GH和MT水平較低，而ACTH水平高于模型組；其中熱敏灸組GH和MT水平與模型組相比，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結果見表2。

表2 熱敏灸對失眠模型大鼠血清ACTH、CORT、T4、GH和MT水平的影響

4 討論

有關睡眠障礙的動物模型很多，有應激相關模型、藥理學模型、疾病相關模型、遺傳學模型等。其中，對氯苯丙氨酸（PCPA）致失眠模型較為常用，有證據(jù)證明5-HT是引發(fā)非快速動眼睡眠的重要神經遞質，通過注射色氨酸羥化酶的抑制劑PCPA來達到造模目的。該法操作簡便，安全性高，大鼠剝奪睡眠過程清晰，可重復性強，一般注射2次即起效，持續(xù)約一周，具有可逆性，且腹腔注射所致模型符合人類失眠的某些特點，已成為較常用的失眠動物模型[11]。因此，本研究采用腹腔注射PCPA制備失眠大鼠模型。實驗結果觀察到，在第一次腹腔注射PCPA28-30h后，模型組、艾灸組和熱敏灸組大鼠，出現(xiàn)晝伏夜出節(jié)律消失，白天活動不停，總睡眠時間減少，整體觀察與正常組明顯不同，表明模型制備成功。

臨床研究已證明，熱敏灸治療失眠已取得了較好的療效[7]。所謂熱敏灸，通俗地說就是在熱敏化腧穴上進行艾灸。臨床實踐發(fā)現(xiàn)，人體腧穴存在敏化態(tài)與靜息態(tài)兩種功能態(tài)，當人體發(fā)生疾病時能使體表腧穴發(fā)生敏化，敏化的類型多種多樣，而腧穴熱敏化是經穴敏化的一種新類型，處在熱敏態(tài)的腧穴對熱刺激特別敏感，能耐受較長時間（多數(shù)30min以上）的熱刺激并感到很舒適[12]。而傳統(tǒng)懸灸的灸量每次每穴一般從10min到15min，或者以局部皮膚潮紅為度，往往達不到治療個體化的最佳灸量。灸量即艾灸的每次有效作用劑量。艾灸劑量由艾灸強度、艾灸面積、艾灸時間三個因素組成，在前兩個因素基本不變的情況下，艾灸劑量主要由艾灸時間所決定。本研究同時觀察了艾灸15min（傳統(tǒng)懸灸）和艾灸40min（熱敏灸）對失眠的治療效果，結果顯示：給予艾灸治療后，與模型組相比，艾灸組和熱敏灸組，尤以熱敏灸組大鼠晝夜節(jié)律有所好轉；體質量增長速度較快。提示熱敏灸具有改善睡眠的效果。然而，熱敏灸治療失眠的作用機理還不十分清楚。

據(jù)報道，失眠病人存在體內內分泌激素水平異常[2]。那么，熱敏灸能否通過調整體內內分泌激素水平而達到改善睡眠的效果？本實驗觀察到：與正常組相比，模型組大鼠血清CORT、T4、GH和MT水平較高，而ACTH水平低于正常組；與模型組相比，艾灸組和熱敏灸組大鼠血清CORT、T4、GH和MT水平較低，而ACTH水平高于模型組；其中熱敏灸組GH和MT水平與模型組相比，有統(tǒng)計學意義。表明熱敏灸可能通過調節(jié)體內內分泌激素水平而達到改善睡眠的效果。

眾所周知，褪黑素主要是由哺乳動物和人類的松果體產生的一種激素，具有鎮(zhèn)靜、催眠、鎮(zhèn)痛、抗驚厥、抗抑郁等多種生物學作用。1993年6月4日，美國Walter Pierpaoli和William Regelson公布了潛心研究30多年的成果，認定松果體通過分泌褪黑素控制著機體的睡眠與覺醒周期。自此，褪黑素—一種與睡眠有關的內源性物質，已開始作為保健品或激素替代療法用于治療睡眠障礙。有研究報道失眠病人血清褪黑素水平較低[13]，經補充外源性褪黑素可起到改善睡眠的作用[14]。本研究觀察到模型組大鼠血清MT水平高于正常組，推測可能是一種機體代償反應的結果。至于模型組大鼠血清CORT、T4、GH水平高于正常組，認為可能是應激反應導致的。當機體受到應激刺激（如失眠、緊張等）時，血液中糖皮質激素、T4和GH等激素水平均可升高。這些升高的激素（如CORT、T4）可提高中樞神經系統(tǒng)的興奮性，引起煩躁、易激動、失眠等癥狀，同時，這些激素也可加強機體的新陳代謝，促進脂肪、蛋白質等分解，導致體質量增長緩慢。另外，由于運動、應激、能量消耗增加時，均可引起GH分泌增加，因此認為，模型組GH水平增加也可能是機體減少能量消耗的一種保護機制，對促進生長發(fā)育作用不大。而ACTH水平降低則可能是血漿中升高的糖皮質激素水平通過負反饋調節(jié)下丘腦促腎上腺皮質激素釋放激素（CRH）和腺垂體促腎上腺皮質激素（ACTH）的分泌實現(xiàn)的?？傊?，失眠模型大鼠存在體內內分泌激素水平的異常。而熱敏灸由于具有雙相調節(jié)的特點，可使升高的或降低的激素水平回到或接近正常的水平，繼而發(fā)揮改善睡眠的效果。

綜上所述，我們推測熱敏灸可能通過艾灸穴位，調動了機體內源性的抗病機制，從而發(fā)揮調節(jié)血清ACTH、CORT、T4、GH和MT的水平、改善失眠癥狀的作用。這可能是熱敏灸治療失眠的作用機理之一。

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