通草提取工藝及其鑒別的研究

★ 劉靖巖 賈艾玲 邱智東 (長春中醫(yī)藥大學 長春 130117)

通草提取工藝及其鑒別的研究

★ 劉靖巖*賈艾玲**邱智東 (長春中醫(yī)藥大學 長春 130117)

目的：對通草提取工藝及薄層鑒別進行研究。方法：采用L9(34)正交設計安排實驗,用薄層色譜(TLC)進行定性鑒別,用紫外分光光度法(UV)進行含量測定。結(jié)果：優(yōu)選了通草的最佳提取工藝，在薄層色譜中可檢出特征斑點。結(jié)論：該提取工藝和質(zhì)量控制方法科學合理,可作為通草生產(chǎn)和質(zhì)量控制的依據(jù)。

通草；提取工藝；薄層鑒別

通草為五加科植物通脫木Tetrapanaxpapyrifer(Hook)K.Koch的干燥莖髓。主要分布在西南及陜西、江蘇、安徽、浙江、江西、福建、臺灣、湖北、湖南、廣東、廣西等地，主產(chǎn)于臺灣、貴州、廣兩、云南。具有清熱利尿、通氣下乳等功效，用于濕溫尿赤、淋病澀痛、水腫尿少、乳汁不下。2010版《中國藥典》中對通草僅有性狀和顯微鑒別,缺少對其有效成分的鑒別和含量要求,而目前市售通草品種混亂,摻次摻偽日益增多。鑒于通草中多糖含量較高,本實驗對此作出相關研究,對通草中多糖進行含量測定并對其薄層進行定性鑒別,為完善其質(zhì)量評價體系奠定基礎。

1 儀器與試劑

紫外分光光度計(儀器型號:TU-1810PC)，葡萄糖對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110833—200904)，5%苯酚，硫酸溶液，購自北京化工廠，所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗設計 根據(jù)預試驗結(jié)果,以總多糖含量和出膏率為考察指標,以加水量、煎煮次數(shù)、提取時間作為3個考察因素,優(yōu)化提取工藝，因素水平見表1。

表1 因素水平表

2.2 總多糖含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備

取葡萄糖對照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取水煎干膏適量，研細，過60目篩，精密稱定約0.2g，置于100mL錐形瓶中，加入蒸餾水50mL，密塞，稱定重量，超聲處理15分鐘，放冷，再稱定重量，用蒸餾水補足減失的重量，搖勻，濾過，收集續(xù)濾液。吸取1mL續(xù)濾液置于10mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，再用0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2.3 標準曲線的繪制

精密吸取對照品溶液(99.8μg/mL)0.1，0.2,0.4,0.6，0.8,1.0mL,分別置于10mL具塞試管中，加蒸餾水至1.0mL，加入1mL5%苯酚溶液，搖勻后，迅速加入5mL濃硫酸溶液，混勻，于100℃沸水浴中，加熱15分鐘后取出，放入冰浴中，冷卻15分鐘。在490nm處測定吸光度。以濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標求得回歸方程：Y=0.00613X-0.05364，r=0.9999，結(jié)果表明，葡萄糖在9.98μg/mL～99.8μg/mL濃度范圍內(nèi)，與吸收度呈良好線性關系。

2.2.4 精密度試驗

精密吸取對照品溶液0.6mL，置于10mL具塞刻度試管中，加入蒸餾水至1mL，按“2.2.3”項下的方法顯色，測定吸光度，重復6次。結(jié)果表明該方法的精密度良好,RSD為0.55%(n=6)。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液,按“2.2.3”項下的方法顯色,分別于0,10,20,30,40,50分鐘不同時間測定其吸光度,供試品RSD為0.15%，說明供試品在50分鐘內(nèi)穩(wěn)定性較好，測定結(jié)果準確、可靠。

2.2.6 重現(xiàn)性試驗

精密稱取正交樣品中2號樣6份，每份0.2g按照供試品溶液項下的方法制備，精密吸取0.5mL供試品溶液置于具塞試管中，加蒸餾水至2.0mL。按“2.2.3”項下的方法顯色,測定吸光度，并計算總多糖平均含量為850.0764mg/g，RSD=2.52%，說明重現(xiàn)性較好。

2.2.7 加樣回收率試驗

取已知含量供試品粉末(總多糖850.0764mg/g)6份,每份約0.1g,分別加入等量的葡萄糖對照品粉末,按“2.2.3”項下的方法顯色,測量吸光度值,并計算含量及加樣回收率,結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果

結(jié)果表明，平均回收率為100.47%，RSD=2.12%。本法回收率較好，方法可行。

2.3 通草的提取制備最佳工藝確定：正交試驗結(jié)果見表3，方差分析結(jié)果見表4。

表3 正交試驗結(jié)果

表4 方差分析結(jié)果表

由以上極差分析及方差分析可知，影響因素大小順序為：Cgt;Agt;B，即煎煮次數(shù)C是主要影響因素，加水量A是次要影響因素，而煎煮時間B對試驗結(jié)果影響較小。各因素的最佳水平依次為：A因素的第1水平，B因素的第1水平，C因素的第3水平，確定A1B1C3為最佳提取方案，即加30倍量水，提取3次，每次1小時。

2.4 通草的定性鑒別

取本品粉末3g,加60%甲醇30mL,于水浴上加熱回流1小時,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇10mL溶解,濾過,濾液濃縮至約1mL,作為供試品溶液。另取通草對照藥材3g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯(7∶3)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；噴以香草醛硫酸試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，顯相同顏色的斑點。

3 討論

3.1 以出膏率、總多糖轉(zhuǎn)移率為考察指標,通過綜合評分,由表4中極值F值大小顯示,各個因素作用主次為C﹥A﹥B,由表3方差分析結(jié)果表明,A因素無顯著性意義(P﹥0.05),B因素也無顯著性意義(P﹥0.05),C因素有顯著性意義(P﹤0.05),以A1B1C3為最佳,即以加30倍量水、煎煮提取3次、每次1小時為最佳提取工藝。

3.2 本實驗在目前國內(nèi)對通草藥材化學成分研究較少的背景下采用TLC對其有效成分進行鑒別,方法簡便、易行,結(jié)果清晰,對儀器設備要求較低。由于《中國藥典》2010版一部通草項下并未收錄通草的薄層鑒別方法,通過條件摸索,初步定為展開劑∶石油醚—乙酸乙酯(8∶2)，展開時，對照藥材與供試品斑點Rf值均較低,把比例調(diào)整為石油醚—乙酸乙酯(7∶3)時,則效果較好,斑點清晰;重現(xiàn)性好。

3.3 本實驗對通草提取制備工藝進行了研究,以主要有效成為指標,設計優(yōu)選了通草有效成分的最佳制備工藝;運用UV、TLC等方法對通草進行了化學表征和鑒別研究,初步建立了通草的質(zhì)量標準,可作為通草生產(chǎn)和質(zhì)量控制的依據(jù)。今后還將對通草進行多指標檢測,盡量闡明通草中的各種有效成分，進一步完善通草的質(zhì)量標準。

劉靖巖，碩士研究生，中藥制劑研究方向，Tel：15164310437，E-mail：438831128@qq.com

**通訊作者:賈艾玲,碩士,助教,從事中藥制劑的研究,Tel:18684341320，E-mail:171265932@qq.com

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2013-07-22)