冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方對(duì)急性心肌缺血大鼠的保護(hù)作用比較研究*

★ 朱偉 陳蘭英 朱杰 陳筱 李俊,

(1.中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心 南昌 330006；2.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330006)

冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方對(duì)急性心肌缺血大鼠的保護(hù)作用比較研究*

★ 朱偉1**陳蘭英1,2***朱杰2陳筱1李俊1,2

(1.中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心 南昌 330006；2.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330006)

目的：研究并比較冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方對(duì)急性心肌缺血大鼠的保護(hù)作用。方法：SD大鼠隨機(jī)分為5組，連續(xù)給藥7天，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支造成大鼠心肌缺血，觀察大鼠心電圖ST段變化，分析大鼠心肌梗死面積，并檢測(cè)血清一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)和心肌肌鈣蛋白I(cTNI)含量。結(jié)果：冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方均能降低模型大鼠ST段，減小心肌梗死面積，提高血清NO含量，降低血清ET-1和cTNI含量。結(jié)論：冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方對(duì)急性心肌缺血大鼠均有很好的保護(hù)作用。

冠心丹參方；精制冠心方；舒胸方；心肌缺血；梗死面積

冠心丹參方由丹參、三七和降香油組成，精制冠心方由丹參、川芎、赤芍、紅花和降香組成，舒胸方由三七、紅花和川芎組成，三方主要功效均為活血化瘀、行氣止痛，臨床上皆可用于心血瘀阻之冠心病、胸痹心痛。冠心病屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”范疇，其病理基礎(chǔ)是心肌缺血損傷[1]。本實(shí)驗(yàn)旨在探討冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方對(duì)急性心肌缺血大鼠的保護(hù)作用。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物 雄性SD大鼠，SPF級(jí)，體重250-300 g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK(湘)2009-0004，大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，自由飲食。

1.2 主要試劑 氨基甲酸乙酯(烏拉坦)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：T20110214；伊文思藍(lán)(Evans blue)，Sigma公司，批號(hào)：1000903700；2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)，Sigma公司，批號(hào)：101000616；甲醛溶液，西隴化工廠股份有限公司，批號(hào)：1103112；一氧化氮(NO)測(cè)試盒、內(nèi)皮素-1(ET-1)酶聯(lián)免疫測(cè)試盒、心肌肌鈣蛋白I(cTnI) 酶聯(lián)免疫測(cè)試盒均購(gòu)自南京建成生物工程有限公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 主要儀器 電生理記錄儀(ADInstruments，PowerLab8/sp)、電動(dòng)呼吸機(jī)(江西特力中益呼吸設(shè)備有限公司，TKR-400H)、酶標(biāo)儀(Thermo，Multiskan MK3)、紫外分光光度儀(北京瑞利分析儀器公司，UV-1800)、分析天平(Sartorius，BS124S)、解剖顯微鏡(Olympas，SZ61)。

2 方法

2.1 受試藥準(zhǔn)備 冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方原藥材購(gòu)于南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院中藥房，均按《中國(guó)藥典》2010版制備[2]。

2.2 模型建立與給藥 將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、冠心丹參組、精制冠心組、舒胸組，每組10只。冠心丹參組、精制冠心組和舒胸組分別灌胃給予冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方藥液，給藥劑量均相當(dāng)于人臨床用量的2倍，空白組和模型組給予等容量生理鹽水，每天給藥1次，連續(xù)給藥7d。

最后1次給藥10分鐘后，腹腔注射20%烏拉坦(0.6mL/100g)麻醉大鼠，固定于恒溫(37℃)解剖臺(tái)上。頸部被毛，沿正中線縱向剪開(kāi)頸部皮膚，分離氣管，接呼吸機(jī)(頻率為90次/min，吸呼比為1∶1.5)。左前胸被毛，縱向剪開(kāi)皮膚，剪斷第3-5肋，撐開(kāi)胸腔，撕開(kāi)心包，充分暴露心臟。用穿有5/0縫合線的小圓針從左心耳下緣2mm處進(jìn)針，垂直于左前降支由肺動(dòng)脈圓錐旁出針，進(jìn)針深度控制在1.5mm左右，寬度為1.5-2mm，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支后迅速關(guān)閉胸腔，空白組只穿線不結(jié)扎[3]。

2.3 心電圖觀察 將針狀電極插入大鼠四肢皮下，連接Powerlab生理記錄儀并描記心電圖，觀察記錄造模后5、15、30min與1、2、3h各個(gè)時(shí)間點(diǎn)ST段的變化。

2.4 血清NO、ET-1、cTNI含量測(cè)定 造模3h后，腹主動(dòng)脈取血，3 500轉(zhuǎn)/min離心10min，取上清保存于-80℃冰箱內(nèi)待測(cè)，用一步法測(cè)定血清一氧化氮(NO)含量，酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清內(nèi)皮素-1(ET-1)和心肌肌鈣蛋白I(cTNI)含量，均嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2.5 心肌梗死面積測(cè)定 采用Evans blue-TTC雙重染色法[4]：大鼠取血后，迅速開(kāi)胸取心臟，從主動(dòng)脈緩慢注入PBS溶液10mL沖洗余血，再緩慢注入1%依文思藍(lán)溶液6mL；剔除血管和脂肪等非心肌組織，-80℃冷凍30min，沿房室溝從心尖部將心臟平行切成2mm厚切片；將心臟切片放入1%TTC溶液中(用PH7.4-7.5的PBS溶液配制)，置于37℃水浴中避光染色20min，于10%福爾馬林溶液中固定24h；心臟切片稱重，解剖顯微鏡下拍照，ImageTool 3.0圖像分析軟件分析各心臟切片(正常心肌為藍(lán)色，缺血心肌為紅色，梗死心肌為白色)，計(jì)算心肌梗死面積百分比。

3 結(jié)果

3.1 造模后各組大鼠心電圖ST段變化 以造模后心電圖ST段抬高(≥0.2mv)作為衡量是否造模成功的指標(biāo)。詳見(jiàn)表1。

模型組心電圖ST段造模后明顯抬高，與空白組比較具有極顯著性差異(P<0.01)，說(shuō)明造模成功。

表1 各組大鼠心電圖ST段變化值

與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型比較，*P<0.05，**P<0.01。

精制冠心方和舒胸方可抑制造模后ST段抬高，造模1h后的ST段與模型組比較具有顯著性差異(P<0.05)，冠心丹參方對(duì)ST段無(wú)明顯改善作用。

3.2 各組大鼠心肌梗死面積測(cè)定

各給藥組大鼠心肌梗死面積百分比均顯著低于模型組(P<0.01)，說(shuō)明冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方均可減少急性心肌缺血大鼠心肌梗死面積。精制冠心組的心肌梗死面積低于冠心丹參組和舒胸組。詳見(jiàn)表2。

表2 各組心肌梗死面積比較

與空白組比較，##P<0.01；與模型比較，**P<0.01。

3.3 各組大鼠血清NO、ET-1和cTNI測(cè)定

模型組血清NO含量明顯降低，ET-1含量與cTNI含量顯著升高，與空白組比較具有極顯著性差異(P<0.01)。各給藥組血清NO含量明顯升高，ET-1含量和cTNI含量顯著降低，與模型組比較均具有顯著性差異(P<0.05或0.01)。三方中，精制冠心方NO與ET-1指標(biāo)優(yōu)于精制冠心方和舒胸方，冠心丹參方cTNI含量低于精制冠心方和舒胸方。詳見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血清NO、ET-1和cTNI含量

與空白組比較，#P<0.05，##P<0.01；與模型比較，*P<0.05，**P<0.01。

4 討論

冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方三方藥效確切，組方簡(jiǎn)單，在臨床上治療冠心病心絞痛方面得到廣泛應(yīng)用，為活血化瘀代表方。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支復(fù)制大鼠急性心肌缺血模型，觀察三方對(duì)大鼠心電圖ST段、心肌梗死面積和血清NO、ET-1及cTNI含量的影響。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙貫穿于心肌缺血的發(fā)生和發(fā)展全過(guò)程[5]，內(nèi)皮損傷后血管收縮因子(ET-1)與舒張因子(NO)之間平衡失調(diào)，NO合成減少、ET-1含量增加，導(dǎo)致血管舒縮功能紊亂、血管內(nèi)皮受損及通透性改變，并引起血液成分和血液流變特性的變化，使心肌缺血缺氧程度進(jìn)一步加劇。心肌發(fā)生缺血(缺氧)損傷后，細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變，細(xì)胞內(nèi)的大分子物質(zhì)逸出并進(jìn)入血液循環(huán)，cTNI便是便是其中最主要的心肌損傷標(biāo)志物之一，血清cTNI含量與心肌梗死程度呈正相關(guān)[6]。

本實(shí)驗(yàn)研究表明：冠心丹參方、精制冠心方和舒胸方均能降低ST段抬高值，減小心肌梗死面積，提高血清NO含量，降低血清ET-1和cTNI含量，表明三方對(duì)急性心肌缺血大鼠均有很好的保護(hù)作用。通過(guò)對(duì)三方的研究比較，精制冠心方對(duì)急性心肌缺血大鼠的保護(hù)作用強(qiáng)于冠心丹參方和舒胸方。

[1]趙志宏,王階.胸痹心痛與冠心病的病證結(jié)合及辨證論治[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2009,7(5)：590-592.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

[3]陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社,2006.

[4]覃斐章,簡(jiǎn)潔,焦楊.17-甲氧基-7-羥基-苯并呋喃查爾酮對(duì)垂體后葉素致大鼠心肌缺血的保護(hù)作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(1)：145-148.

[5]許波華,許立.中藥抗心肌缺血作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(15)：265-269.

[6]曹玉靜,心肌標(biāo)志物對(duì)急性心肌梗死的診斷價(jià)值及研究進(jìn)展[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2010, 9(5)：388-389.

ComparativeStudiesonProtectiveEffectsofGuanxindanshenRecipe,JingzhiguanxinRecipeandShuxiongRecipeinAcuteMyocardialIschemiaRats

ZHUWei1,CHENLan-ying1,2,ZHUJie2,CHENXiao1,LIJun1,2

1.NationalPharmaceuticalEngineeringCenterforSolidPreparationinChineseHerbalMedicine,Nanchang330006,China;2.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang330004,China;

Objective: To investigate and compare the protective effects of Guanxindanshen Recipe, Jingzhiguanxin Recipe and Shuxiong Recipe on acute myocardial ischemia in rats. Methods: SD rats were randomly divided into five group. The model of acute myocardial ischemia was established by ligating the LAD after 7 days of successive administration. The changes of ST weight in ECG were observed, the infarct sizes of myocardial were analyzed, and the levels of NO/ET-1 and cTNI in serum were determined. Results: Guanxindanshen Recipe, Jingzhiguanxin Recipe and Shuxiong Recipe could lower the ST weight and reduce the infarct sizes of myocardial. At the same time, they could improve the levels of NO and reduce the levels of ET-1 and cTNI in serum. Conclusion: Guanxindanshen Recipe, Jingzhiguanxin Recipe and Shuxiong Recipe showed nice protective effects in acute myocardial ischemia rats.

Guanxindanshen Recipe; Jingzhiguanxin Recipe; Shuxiong Recipe; Myocardial Ischemia; Infarct Sizes

國(guó)家“十一五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2008BAI51B03)。

**作者簡(jiǎn)介：朱偉，男，碩士，研究方向：中藥藥理研究，E-mail:jzzw168@qq.com。

***通訊作者：陳蘭英，女，博士，教授，研究方向：中藥藥效評(píng)價(jià)及作用機(jī)制研究，E-mail:cly2513@163.com。

R 285.5

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2013-07-20)